一种β-淀粉样多肽1-42单克隆抗体、ELISA试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种β

【技术实现步骤摘要】
一种
β
‑
淀粉样多肽1
‑
42单克隆抗体、ELISA试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种β
‑
淀粉样多肽1
‑
42单克隆抗体、ELISA试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是发生于老年期的最常见痴呆类型之一，属于中枢神经系统退行性疾病，典型症状是进行性认知功能障碍，包括记忆、定位、判断和推理，最终丧失说话和活动能力。AD患者的脑部，特别是海马、杏仁核及颞叶，会发生选择性神经元丢失和突触功能异常，并伴随着细胞外β
‑
淀粉样多肽(β
‑
amyloid peptide，Aβ)沉积为核心的老年斑(senile plague，SP)和细胞内过度磷酸化的Tau蛋白为核心的神经纤维缠结(neurofibrillary tangles，NFT)的形成，阿尔茨海默病的患病率和致残率较高，病程长且治疗费用高，给患者家庭和社会带来极大的负担。
[0003]Aβ是淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein，APP)经过两种酶的裂解过程产生的，具体是通过β分裂酶将APP剪切为sAPPβ片段和C末端片段(CTFβ)，接着CTFβ片段由γ分裂酶剪切为Aβ单体(主要有Aβ40和Aβ42)和淀粉样蛋白胞内结构域(AICD)。这些Aβ单体从不规则螺旋或α螺旋转变为β折叠结构，促进了单体之间的聚集，形成短的可溶的相对稳定的中间产物，称为寡聚体(oligomer)。这些小的β片层寡聚体发生构象重排后积聚形成晶核，并继续和具有一定亚单位组成的结构可变的寡聚体相互作用，形成原纤维。原纤维成束聚集成不溶性的β片层纤维丝(fibril)，并在神经纤维网内沉积形成SP。其中，Aβ纤维丝沉积并形成SP对突触及神经元的结构和功能产生损伤，破坏神经元离子平衡，诱导氧自由基增加，从而加速细胞凋亡，导致大范围的神经功能异常和信号传导障碍；目前，越来越多的研究认为可溶性Aβ寡聚体，在AD早期阶段起毒性作用，比不溶性Aβ纤维丝毒性更强，Aβ寡聚体还可以激活AMPA受体，使线粒体Ca
2+
超载，功能紊乱，诱导氧化应激，导致突触改变和神经元死亡，另外，Aβ的沉积发生于AD的早期，因此，Aβ是导致AD的一个重要因素和关键环节。
[0004]有研究表明，阿尔茨海默症的早期特征是脑脊液中出现了Aβ42而没有出现Aβ40，进入阿尔茨海默病的晚期阶段，则出现了Aβ40，尤其是在成熟老年斑的中心部分出现。因此，如果能快速检测出Aβ42，就能在早期诊断出阿尔茨海默病，这对于预防和治疗阿尔茨海默病具有重要的意义。目前，市面上只有极少数厂家开发出检测Aβ42的试剂盒，但存在检测灵敏度不高、特异性不强等问题。
[0005]有鉴于此，有必要开发一种检测人β
‑
淀粉样多肽1
‑
42的ELISA试剂盒来解决上述问题。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种β
‑
淀粉样多肽1
‑
42单克隆抗体、ELISA试剂盒及其应用，本专利技术将β
‑
淀粉样多肽1
‑
42的N端抗原序列免疫复合物和C端抗原序列免疫复合物进行动物免疫，制备出β
‑
淀粉样多肽1
‑
42的多克隆抗体和单克隆抗体，
分别作为捕获抗体和检测抗体用于ELISA双抗夹心试剂盒中，并且建立了β
‑
淀粉样多肽1
‑
42的检测试剂盒使用方法及其应用。
[0007]本专利技术的一个目的在于提供一种β
‑
淀粉样多肽1
‑
42单克隆抗体。
[0008]一种β
‑
淀粉样多肽1
‑
42单克隆抗体，所述β
‑
淀粉样多肽1
‑
42单克隆抗体重链氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，所述β
‑
淀粉样多肽1
‑
42单克隆抗体轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。
[0009]进一步地，所述β
‑
淀粉样多肽1
‑
42单克隆抗体是由杂交瘤细胞株Aβ
‑
8A10分泌得到，所述杂交瘤细胞株Aβ
‑
8A10已在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)进行保藏；地址：中国武汉武汉大学；保藏日期：2021年12月30日；保藏编号为：CCTCC NO：C2021302。
[0010]进一步地，编码所述β
‑
淀粉样多肽1
‑
42单克隆抗体重链核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；编码所述β
‑
淀粉样多肽1
‑
42单克隆抗体轻链核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。
[0011]本专利技术的另一个目的在于提供一种ELISA试剂盒。
[0012]一种ELISA试剂盒，所述ELISA试剂盒包括上述任一项所述的β
‑
淀粉样多肽1
‑
42单克隆抗体、β
‑
淀粉样多肽1
‑
42多克隆抗体、酶标板、封闭液、HRP
‑
羊抗鼠IgG二抗、显色液、终止液、包被液和洗涤液。
[0013]进一步地，所述β
‑
淀粉样多肽1
‑
42多克隆抗体作为捕获抗体，所述β
‑
淀粉样多肽1
‑
42单克隆抗体作为检测抗体。
[0014]进一步地，所述β
‑
淀粉样多肽1
‑
42单克隆抗体稀释度为(1:250)～(1:4000)；所述β
‑
淀粉样多肽1
‑
42多克隆抗体稀释度为(1:500)～(1:2000)。
[0015]进一步地，所述HRP
‑
羊抗鼠IgG二抗稀释度为(1:4000)～(1:16000)。
[0016]本专利技术还提供了上述任一项所述的ELISA试剂盒的使用方法，包括如下步骤：
[0017]1)纯化多抗包被：用包被液将β
‑
淀粉样多肽1
‑
42多克隆抗体稀释，4℃过夜，每孔100μL，4℃冰箱过夜；
[0018]2)封闭：每孔加200μL封闭液，于37℃孵育0.5～1.5h；
[0019]3)加抗原：每孔加100μL样品，于37℃孵育1～2h；
[0020]4)加纯化单抗：用封闭液将β
‑
淀粉样多肽1
‑
42单克隆抗体稀释，37℃孵育1～2h，每孔100μL；
[0021]5)加酶标二抗：用封闭液将HRP
‑
羊抗鼠IgG本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种β
‑
淀粉样多肽1
‑
42单克隆抗体，其特征在于，所述β
‑
淀粉样多肽1
‑
42单克隆抗体重链氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，所述β
‑
淀粉样多肽1
‑
42单克隆抗体轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。2.如权利要求1所述的β
‑
淀粉样多肽1
‑
42单克隆抗体，其特征在于，所述β
‑
淀粉样多肽1
‑
42单克隆抗体是由杂交瘤细胞株Aβ
‑
8A10分泌得到，所述杂交瘤细胞株Aβ
‑
8A10已在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)进行保藏；地址：中国武汉武汉大学；保藏日期：2021年12月30日；保藏编号为：CCTCC NO：C2021302。3.如权利要求1所述的β
‑
淀粉样多肽1
‑
42单克隆抗体，其特征在于，编码所述β
‑
淀粉样多肽1
‑
42单克隆抗体重链核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；编码所述β
‑
淀粉样多肽1
‑
42单克隆抗体轻链核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。4.一种ELISA试剂盒，其特征在于，所述ELISA试剂盒包括权利要求1～3任一项所述的β
‑
淀粉样多肽1
‑
42单克隆抗体、β
‑
淀粉样多肽1
‑
42多克隆抗体、酶标板、封闭液、HRP
‑
羊抗鼠IgG二抗、显色液、终止液、包被液和洗涤液。5.如权利要求4所述的ELISA试剂盒，其特征在于，所述β
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：王小川，王喆，曾宽，吴刚，
申请(专利权)人：武汉天德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：