一种cTnI抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种cTnI抗体及其应用，具体的，本发明专利技术提供了一种抗肌钙蛋白I的单域抗体或其抗原结合片段，所述的单域抗体或其抗原结合片段包括互补决定区CDR1和CDR3，其中：CDR1包含如SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列；CDR3包含如SEQ ID NO.8或SEQ ID NO.11所示的氨基酸序列。本发明专利技术的单域抗体或其抗原结合片段可用于制备肌钙蛋白I的检测试剂。剂。剂。

【技术实现步骤摘要】
一种cTnI抗体及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种cTnI抗体及其应用。

技术介绍

[0002]据世界卫生组织(World Health Organization，WHO)报告，心血管疾病(Cardiovascular Disease，CVD)已成为全球疾病死亡的首要原因。在CVD的预防、早期诊断、及时治疗、疗效评价及预后判断中，心肌标志物起到了重要的实验室支撑作用。心肌标志物的临床应用始于1954年，天冬氨酸氨基转移酶/谷草转氨酶(Aspartate Aminotransferase，AST)作为诊断急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction，AMI)的第一个心肌标志物用于临床；随后肌酸激酶MB同工酶(Creatine Phosphokinase MB Isoform,CK
‑
MB)和肌红蛋白(Myoglobin,Mb)广泛应用于AMI的诊断，但上述心肌标志物较低的敏感性和特异性，无法满足临床对于CVD的早期发现、早期诊断和及时治疗的迫切需求。
[0003]目前常用的心肌损伤标志物主要有肌钙蛋白I(cardiac troponin
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I,cTnI)、肌钙蛋白T(cTnT)、肌酸激酶同工酶质量(CK
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MBmass)和肌红蛋白(myoglobin)。肌钙蛋白由3个亚单位组成，它们各自有独立的结构和不同的调节作用。近年来的研究表明，cTnI具有高度的心肌特异性，当心肌细胞受损时，血液中cTnI出现时间早，持续时间长，与心肌损伤程度及预后密切相关。它可作为心肌损伤的一种特异性指标，对心脏病的诊断有十分重要的意义。因此，对cTnI进行纯化并寻找其相应的抗体用于对心脏病患者的诊断已成为当今心脏病诊断研究的前沿学科。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的之一是提供一种结合肌钙蛋白I的单域抗体；
[0005]本专利技术的目的之二是提供一种制备上述抗体的方法。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
[0007]本专利技术第一方面提供了一种抗肌钙蛋白I的单域抗体或其抗原结合片段，所述的单域抗体或其抗原结合片段包括互补决定区CDR1和CDR3，其中：
[0008]CDR1包含如SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列；
[0009]CDR3包含如SEQ ID NO.8或SEQ ID NO.11所示的氨基酸序列。
[0010]在本专利技术中，术语“单域抗体”或“单结构域抗体”是指具有单个可变结构域的抗体，该抗体能够在不存在其他抗体结构域的情况下特异性结合抗原或抗原表位。单域抗体包括例如VNAR抗体，骆驼科动物VHH抗体，VH域抗体和VL域抗体。VNAR抗体由软骨鱼产生，例如护士鲨，沃比贡鲨，多毛狗鱼和竹鲨。骆驼VHH抗体是由几种物种产生的，包括骆驼，美洲驼，羊驼，单峰骆驼和骆驼，它们产生的天然缺乏轻链的重链抗体。
[0011]可变新抗原受体(VNAR)是在软骨鱼中发现的免疫球蛋白新抗原受体(IgNAR)抗体。VNAR抗体仅包含两个CDR(CDR1和CDR3)，还包含两个高变区域(HV)，为HV2和HV4区域。
CDR和HV区在以下N端至C端的顺序中被构架区(FW)围绕：FW1
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CDR1
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FW2
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HV2
‑
FW3 a
‑
HV4
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FW3b
‑
CDR3
‑
FW4。
[0012]如本文所用，术语“CDR”或“互补决定区”意指在重链或轻链多肽的可变区内发现的非邻接抗原结合位点。这些特定区域已描述于：Kabat等人，J.Biol.Chem.，第252卷：第6609
‑
6616页，1977年；Kabat等人，美国卫生与公众服务部，“Sequences of proteins ofimmunological interest”，1991年；Chothia等人，J.Mol.Biol.，第196卷：第901
‑
917页，1987年；Al
‑
Lazikani B.等人，J.Mol.Biol.，第273卷：第927
‑
948页，1997年；MacCallum等人，J.Mol.Biol.，第262卷：第732
‑
745页，1996年；Abhinandan和Martin，Mol.Immunol.，第45卷：第3832
‑
3839页，2008年；Lefranc M.P.等人，Dev.Comp.Immunol.，第27卷：第55
‑
77页，2003年；以及Honegger和Pl
ü
ckthun，J.Mol.Biol.，第309卷：第657
‑
670页，2001年，其中在相互比较时，这些定义包括氨基酸残基的重叠或子集。不过，涉及抗体或其嫁接抗体或变体的CDR时，任一定义的应用均处于如本文定义和使用的术语的范围内。CDR预测算法和界面在本领域中是已知的，包括例如Abhinandan和Martin，Mol.Immunol.，第45卷：第3832
‑
3839页，2008年；Ehrmann F等人，NucleicAcids Res.，第38卷：第D301
‑
D307页，2010年；以及Adolf
‑
Bryfogle J等人，Nucleic Acids Res.，第43卷：第D432
‑
D438页，2015年。本段中引用的参考文献的内容全文以引用方式并入本文，以用于本申请，并且可能包括在本文的一项或多项权利要求中。
[0013]术语“氨基酸”包括标准的20种遗传编码的氨基酸及其相应的“D”形式的立体异构体(与天然的“L”形式相比)、Ω
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氨基酸、其它天然存在的氨基酸、非常规的氨基酸(例如，α,α
‑
双取代氨基酸、N
‑
烃基氨基酸等)和经化学衍生化的氨基酸。
[0014]在明确列举氨基酸，诸如“丙氨酸”或“Ala”或“A”时，术语指L
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丙氨酸和D
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丙氨酸两者，除非另有明确规定。其它非常规的氨基酸也可以是适合于本专利技术多肽的组分，只要多肽保留期望的功能性特性。对于显示的肽，每个编码的氨基酸残基(在适当的情况中)由对应于常规氨基酸俗名的单字母名称代表。
[0015]作为本专利技术的优选的技术方案，所述的单域抗体或其抗原结合片段包括含有氨基酸序列SEQ ID NO.5的CDR1和含有氨基酸序列SEQ ID NO.8的CDR3。
[0016]作为本专利技术的优选的技术方案，所述的单域抗体或其抗原结合片段包括含有氨基酸序列SEQ ID NO.9的CDR1和含有氨基酸序列SEQ ID NO.11的CDR3。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗肌钙蛋白I的单域抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的单域抗体或其抗原结合片段包括互补决定区CDR1和CDR3，其中：CDR1包含如SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列；CDR3包含如SEQ ID NO.8或SEQ ID NO.11所示的氨基酸序列；优选的，所述的单域抗体或其抗原结合片段包括含有氨基酸序列SEQ ID NO.5的CDR1和含有氨基酸序列SEQ ID NO.8的CDR3；优选的，所述的单域抗体或其抗原结合片段包括含有氨基酸序列SEQ ID NO.9的CDR1和含有氨基酸序列SEQ ID NO.11的CDR3。2.根据权利要求1所述的单域抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的单域抗体或其抗原结合片段还包括高变区域HV2和HV4，优选的，HV2包含如SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列；优选的，HV4包含如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列。3.根据权利要求2所述的单域抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述的单域抗体或其抗原结合片段包括如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。4.一种编码如权利要求1
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3任一项所述的单域抗体或其抗原结合片段的DNA分子。5.根据权利要求4所述的DNA分子，其特征在于，所述的DNA分子包含如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。6.一种表达载体，其特征在于，所述的表达载体含有权利要求4或5所述的DNA分子，优选的，所述的表达载体包括质粒、病毒来源的载体，优选的，所述的病毒来源的载体包括慢病毒载体、逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体。7.一种细胞，其特征在于，所述的细胞由权利要求6所述的表达载体转化得到，优选的，所述的细胞包括原核细胞、真核细胞，优选的，所述的原核细胞包括细菌细胞；优选的，所述的真核细胞包括原生生物细胞、动物细胞、植物细胞、真菌细胞，优选的，所述的动物细胞包括哺乳动物细胞、禽类细胞、昆虫细胞。8.一种制备权利要求1
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【专利技术属性】
技术研发人员：赵铁铭，龚紫云，呼和，张剑毅，
申请(专利权)人：深圳海创生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：