本发明专利技术提供了一种双歧杆菌发酵溶胞产物、制备方法及其应用，属于化妆品技术领域。其中，双歧杆菌发酵溶胞产物，包括：长双歧杆菌、动物双歧杆菌和青春双歧杆菌进行混合发酵的发酵液经离心得到的滤液，以及所述长双歧杆菌、动物双歧杆菌和青春双歧杆菌进行混合发酵的菌体经酶解得到的溶胞物母液。本发明专利技术菌体酶解所得溶胞物母液和发酵滤液的结合能够最大限度地降低可溶性小分子在产品生产过程中的损失，作为化妆品原料保证多糖、多肽的浓度适合用于皮肤吸收及护理，甚至可以直接涂抹于皮肤表面使用。使用。使用。
【技术实现步骤摘要】
一种双歧杆菌发酵溶胞产物、制备方法及其应用
[0001]本专利技术属于化妆品
，具体涉及一种双歧杆菌发酵溶胞产物、制备方法及其应用。
技术介绍
[0002]双歧杆菌发酵溶胞产物，是经双歧杆菌发酵后处理得到的生理溶胞产物，主要成分为细胞代谢产物、胞质片段、多糖、蛋白质与多肽等。大量的体外实验证实了双歧杆菌发酵溶胞产物中的多种氨基酸、蛋白质和各类分子介质具有调节平衡肌肤、调节免疫机能的功效，也同样是人类皮肤细胞的营养分子，具有一定的抗皱、紧致、修护、防晒、抗氧化、抗衰老作用，并能够防止紫外线等外源刺激的损害，促进损伤DNA的修复，这些优势使得双歧杆菌发酵溶胞产物广泛应用于护肤产品中以改善肤质，具有极大的市场前景。但目前用于化妆品原料的双歧杆菌发酵溶胞产物制备工艺存在功效活性成分如蛋白和易于皮肤吸收的小分子多肽含量较少等问题，影响发酵产物溶胞物的品质。
技术实现思路
[0003]针对现有技术的不足，本专利技术的第一个目的是，提供一种双歧杆菌发酵溶胞产物，以提高功效活性成分含量。
[0004]为解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案是：一种双歧杆菌发酵溶胞产物，包括：长双歧杆菌、动物双歧杆菌和青春双歧杆菌进行混合发酵的发酵液经离心得到的滤液，以及所述长双歧杆菌、动物双歧杆菌和青春双歧杆菌进行混合发酵的菌体经酶解得到的溶胞物母液。
[0005]在本专利技术的一些实施例中，所述滤液与溶胞物母液的体积比为1：（1~10），例如，所述滤液与溶胞物母液的体积比可以为1：1、1：2、1：3、1：4、1：5、1：6、1：7、1：8、1：9或1：10等。
[0006]在本专利技术的一些实施例中，所述混合发酵是以长双歧杆菌、动物双歧杆菌和青春双歧杆菌为菌种，经一级扩增、二级扩增和微氧发酵得到发酵液。
[0007]在本专利技术的一些实施例中，所述一级扩增是分别将长双歧杆菌、动物双歧杆菌、青春双歧杆菌接种于无菌三角瓶中，厌氧培养，制成一级种子液。作为优选，所述一级扩增的条件为：pH 6.0~7.0，培养温度37℃，培养时间24~48小时。例如，pH可以选择6.0、6.1、6.2、6.5、6.7、6.8或7.0等；培养时间可以选择24小时、27小时、30小时、32小时、35小时、40小时、42小时、46小时或48小时等。
[0008]在本专利技术的一些实施例中，所述二级扩增是将一级种子液混合接种至发酵罐中，扩增培养后分离菌体，重悬，得二级种子液。作为优选，所述二级扩增的条件为：一级种子液的接种量为1%~2%，pH 6.0~7.0，培养温度37℃，培养时间2~3天，溶解氧0~5%，采用TPY液体培养基进行重悬，重悬的体积比为1：（50~100）。例如，一级种子液的接种量可以为1%、1.5%或2%等；pH可以为6.0、6.1、6.2、6.5、6.7、6.8或7.0等；培养时间可以为2天、2.5天或3天等；溶解氧可以为0%、1%、2%、2.5%、3%、3.5%、4%、4.5%或5%等。
[0009]在本专利技术的一些实施例中，所述微氧发酵是二级种子液转接至发酵培养基内进行微氧发酵。作为优选，所述微氧发酵的条件为：二级种子液的接种量为1~3%，初始600nm吸光度0.1~0.2，温度37℃，pH 6.0~7.0，扩增时间2~3天，溶解氧0%~10%。例如，二级种子液的接种量可以为1%、1.5%、2%、2.5%或3%等；初始600nm吸光度可以为0.1、0.15或0.2等；pH可以为6.0、6.1、6.2、6.5、6.7、6.8或7.0等；扩增时间可以为2天、2.5天或3天等；溶解氧可以为0%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或10%等。
[0010]在本专利技术的一些实施例中，所述发酵培养基包括：葡萄糖4~6g/L、酸水解酪蛋白8~12g/L、特征提取液400~600mL/L、氨基酸0.1~0.3g/L、磷酸氢二钾1~3g/L、氯化镁0.4~0.6g/L、氯化钙0.1~0.2/L、硫酸锰0.04~0.06g/L、乙酸钠4~6g/L、半胱氨酸0.4~0.6g/L。
[0011]在本专利技术的一些实施例中，所述特征提取液为白芷提取液、玫瑰提取液、薰衣草提取液、茉莉提取液、迷迭香提取液、三七提取液、人参提取液、何首乌提取液、灵芝提取液、黄芪提取液、铁皮石斛提取液、枸杞提取液、红景天提取液、茯苓提取液、苁蓉提取液、猕猴桃提取液、龙眼提取液、西红柿提取液、胡萝卜提取液和洋葱提取液中的一种或几种的组合。上述特征提取液可以两种以上以任意比例组合，维持在发酵培养基中总的加入量为400~600mL/L即可，例如：特征提取液为玫瑰提取液和薰衣草提取液的组合，二者的体积比可以为（0.01%
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99.99%）：（0.01%
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99.99%）。其中上述特征提取液可通过常规的中药提取方法包括但不限于：煎煮法、乙醇提取法或超微粉碎法等制备获得，或购买相应原料的膏状提取物或粉状提取物等加水溶解获得。
[0012]在本专利技术的一些实施例中，所述氨基酸为甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸（蛋氨酸）、脯氨酸、色氨酸、丝氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、天门冬酰胺、谷氨酰胺、苏氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸的一种或几种的组合。上述氨基酸可以两种以上以任意比例组合，维持在发酵培养基中总的加入量为0.1~0.3g/L即可，例如：氨基酸为亮氨酸和异亮氨酸的组合，亮氨酸和异亮氨酸的质量比可以为（0.01%
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99.99%）：（0.01%
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99.99%）。本专利技术发酵培养基以氨基酸作为生长因子，可促进菌体生长和增加双歧杆菌发酵溶胞产物中活性物的含量。
[0013]基于上述混合发酵，长双歧杆菌、动物双歧杆菌和青春双歧杆菌经二级扩增及混合发酵后所得发酵液的菌体成分可保证极高的溶胞物功效活性成分含量，以用于溶胞产物的制备。
[0014]在本专利技术的一些实施例中，所述酶解是将混合发酵得到的菌体进行重悬，使用蛋白酶温水浴酶解，得到溶胞物母液。
[0015]在本专利技术的一些实施例中，所述重悬是采用无菌水对菌体进行洗涤并重悬。
[0016]在本专利技术的一些实施例中，所述蛋白酶为溶菌酶、中性蛋白酶、糜蛋白酶和风味蛋白酶的一种或多种的组合，其中，溶菌酶的酶活力为20000U/mg，使用量为溶胞物母液质量的0.1~0.3%，例如，使用量可以为0.1%、0.15%、0.2%、0.25%或3%等；中性蛋白酶的酶活力为50U/mg，使用量为溶胞物母液质量的0.1~0.3%，例如，使用量可以为0.1%、0.15%、0.2%、0.25%或3%等；糜蛋白酶的酶活力为800U/mg，使用量为溶胞物母液质量的0.1~0.3%，例如，使用量可以为0.1%、0.15%、0.2%、0.25%或3%等；风味蛋白酶的酶活力为20U/mg，使用量为溶胞物母液质量的0.1~0.3%，例如，使用量可以为0.1%、0.15%、0.2%、0.25%或3%等。上述蛋白酶的总用量不超过溶胞物本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种双歧杆菌发酵溶胞产物，其特征在于：包括：长双歧杆菌、动物双歧杆菌和青春双歧杆菌进行混合发酵的发酵液经离心得到的滤液，以及所述长双歧杆菌、动物双歧杆菌和青春双歧杆菌进行混合发酵的菌体经酶解得到的溶胞物母液，所述滤液与溶胞物母液的体积比为1：（1~10）。2.如权利要求1所述的一种双歧杆菌发酵溶胞产物，其特征在于：所述混合发酵是以长双歧杆菌、动物双歧杆菌和青春双歧杆菌为菌种，经一级扩增、二级扩增和微氧发酵得到发酵液；所述一级扩增是分别将长双歧杆菌、动物双歧杆菌、青春双歧杆菌接种于无菌三角瓶中，厌氧培养，制成一级种子液；所述二级扩增是将一级种子液混合接种至发酵罐中，扩增培养后分离菌体，重悬，得二级种子液；所述微氧发酵是二级种子液转接至发酵培养基内进行微氧发酵。3.如权利要求2所述的一种双歧杆菌发酵溶胞产物，其特征在于：所述一级扩增的条件为：pH 6.0~7.0，培养温度37℃，培养时间24~48小时；所述二级扩增的条件为：一级种子液的接种量为1%~2%，pH 6.0~7.0，培养温度37℃，培养时间2~3天，溶解氧0~5%，采用TPY液体培养基进行重悬，重悬的体积比为1：（50~100）；所述微氧发酵的条件为：二级种子液的接种量为1~3%，初始600nm吸光度0.1~0.2，温度37℃，pH 6.0~7.0，扩增时间2~3天，溶解氧0%~10%。4.如权利要求3所述的一种双歧杆菌发酵溶胞产物，其特征在于：所述微氧发酵的培养基组成包括：葡萄糖4~6g/L、酸水解酪蛋白8~12g/L、特征提取液400~600mL/L、氨基酸0.1~0.3g/L、磷酸氢二钾1~3g/L、氯化镁0.4~0.6g/L、氯化钙0.1~0.2/L、硫酸锰0.04~0.06g/L、乙酸钠4~6g/L、半胱氨酸0.4~0.6g/L；所述特征提取液为白芷提取液、玫瑰提取液、薰衣草提取液、茉莉提取液、迷迭香提取液、三七提取液、人参提取液、何首乌提取液、灵芝提取液、黄芪提取液、铁皮石斛提取液、枸杞提取液、红景天提取液、茯苓提取液、苁蓉提取液、猕猴桃提取液、龙眼提取液、西红柿提取液、胡萝卜提取液和洋葱提取液中的一种或几种...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨平，刘新琳，谢小保，郑雅莉，施庆珊，陶宏兵，邓小锋，杨丽华，
申请(专利权)人：广东迪美新材料科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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