本发明专利技术公开了一种发酵辣木叶的制备方法及其在水产养殖中的应用，包括将解淀粉芽孢杆菌和酪酸芽孢杆菌35℃LB培养基培养18～20h，调整菌液浓度为107cfu/mL
【技术实现步骤摘要】
一种发酵辣木叶的制备方法及其在水产养殖中的应用
[0001]本专利技术涉及一种发酵辣木叶的制备方法，以及将该发酵辣木叶作为饲料原料应用于水产养殖中，具体为一种发酵辣木叶的制备方法及其在水产养殖中的应用，属于水产养殖
技术介绍
[0002]辣木(Moringa Oleifera)属于辣木科辣木属植物，源起于印度北部喜马拉雅，共有13个品种。辣木中不仅含有丰富的蛋白质、粗纤维、矿物质、维生素等，而且具有较高的医用价值和药用价值，对治疗多种疾病有一定的作用，因此国际上称之为“奇迹之树”、“植物钻石”。辣木叶含有丰富的营养成分，目前已经被广泛的应用于畜牧业，但由于辣木叶中含有一些抗营养因子，不利于水产动物的摄食及消化吸收，因此，限制其在水产饲料中的应用。
[0003]生物发酵技术不仅可以利用微生物降低植物性原料中的抗营养因子，而且通过微生物发酵可以有效提高蛋白质水平及有效物质含量。研究表明，利用发酵技术制作发酵饲料，在发酵过程中，能产生维生素、有机酸等未知因子，可以有效的降解饲料中的一些抗营养因子，能有效的提高动物采食量，增强其免疫能力。在水产养殖业中使用发酵饲料，可以提高养殖动物的消化、免疫能力，减少了池塘中的粪便、残饵对池塘水体的污染。
[0004]本专利技术拟利用微生物对辣木叶进行发酵，提高其营养价值，并探索其作为水生动物新型水产饲料添加剂的可行性。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的在于克服辣木叶直接饲喂水产动物时，水生动物不摄食并且营养物质消化吸收差的弱点，提供了一种用有益菌发酵辣木叶的方法，通过微生物发酵处理，提高辣木叶的营养价值，以及将辣木叶作为水产动物饲料添加剂应用于水产养殖业中。
[0006]本专利技术通过以下技术方案来实现上述目的，一种发酵辣木叶的制备方法，包括以下步骤，
[0007](1)菌种的活化和菌液制备
[0008]选择枯草芽孢杆菌S1X
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15、枯草芽孢杆菌IIIA
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2、解淀粉芽孢杆菌JSSW
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LA 和酪酸芽孢杆菌JSIM
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MCB20040312分别接种到LB固体培养基中，35℃培养24h，使菌种活化；将活化后的菌种接种到LB液体培养基中35℃培养18～20小时后，使用灭菌的PBS稀释菌液，将菌液浓度调整至1
×
107CFU/mL～1
×
108CFU/ mL；
[0009](2)辣木叶预处理
[0010]将辣木叶低温冷冻干燥后，粉碎，过80～100目筛，待用；
[0011](3)发酵条件的选择
[0012]取步骤(2)中粉碎过筛后的辣木叶分别以料水比为1:7.5、1:10、1:12.5 加入蒸馏水混合后，调节pH值至8.6，121℃的高压灭菌30min，待灭菌完成冷却至室温，将步骤(1)中
枯草芽孢杆菌S1X
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15、枯草芽孢杆菌IIIA
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2、解淀粉芽孢杆菌JSSW
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LA和酪酸芽孢杆菌JSIM
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MCB20040312的菌液按2％～5％的接种量分别接种到料水比为1:7.5、1:10、1:12.5的灭菌后的辣木叶水溶液中，控制发酵温度分别为30℃、35℃和40℃，发酵时间选择24小时、48小时和72小时，按L9(34)正交表进行正交试验，结果显示解淀粉芽孢杆菌JSSW
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LA和酪酸芽孢杆菌JSIM
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MCB20040312在料水比1:10、时间48h、温度30℃条件下，辣木叶发酵最佳；
[0013](4)发酵辣木叶成品的制备
[0014]根据步骤(3)的试验结果，将经解淀粉芽孢杆菌JSSW
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LA和酪酸芽孢杆菌 JSIM
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MCB20040312发酵的辣木叶在
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80℃条件预冷2h，在
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50℃～
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60℃条件下真空干燥后进行超微粉碎，得到发酵辣木叶成品。
[0015]优选地，所述解淀粉芽孢杆菌JSSW
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LA保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CCTCCM2015602，酪酸芽孢杆菌JSIM
‑ꢀ
MCB20040312保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO:1647。
[0016]优选地，所述LB固体培养基组成包含蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L，NaCl 5g/ L，琼脂15～20g/L，以蒸馏水定容配置，pH7～7.2；LB液体培养基组成包含蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L，NaCl 5g/L，以蒸馏水定容配置，pH7～7.2，粉碎机型号为CWJZ
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30，购自广州旭朗机械设备有限公司。
[0017]优选地，所述步骤(1)中所述枯草芽孢杆菌S1X
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15、枯草芽孢杆菌IIIA
‑ꢀ
2、解淀粉芽孢杆菌JSSW
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LA和酪酸芽孢杆菌JSIM
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MCB20040312的菌液浓度相同，菌种在LB液体培养基中的培养时间为18h，所述步骤(3)中所述枯草芽孢杆菌S1X
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15、枯草芽孢杆菌IIIA
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2、解淀粉芽孢杆菌JSSW
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LA和酪酸芽孢杆菌 JSIM
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MCB20040312的菌液接种量相同。
[0018]一种发酵辣木叶的制备方法在水产养殖中的应用。
[0019]优选地，所述饲料中发酵辣木叶的有效添加量为0.5％～1％。
[0020]本专利技术的有益效果是：
[0021]1、本专利技术通过双菌种发酵辣木叶，发酵周期短，发酵条件易控制，操作简便，易于标准化生产；
[0022]2、本专利技术通过发酵辣木叶工艺制备，能有效提高发酵后辣木叶的营养价值，降低辣木叶中的抗营养因子。与未发酵的辣木叶相比，经发酵后辣木叶粉比未发酵辣木叶粉蛋白质含量、总酚含量、黄酮、小肽和氨基酸含量显著提高，分别提高了36.45％、358.91％、171.43％、77.63％和66.47％，经发酵后辣木叶单宁含量比未发酵辣木叶粉单宁含量显著降低，降低了17.39％；
[0023]3、饲料中发酵辣木叶添加量为0.5％～1％时，可显著提高克氏原螯虾的增重率和特定生长率，说明本专利技术制备的辣木叶应用于水产动物养殖时，显著提高了水产动物的生长，证明了将发酵辣木叶作为水产动物饲料添加剂的可行性。
附图说明
[0024]图1为本专利技术不同发酵菌种下发酵辣木叶蛋白质、总酚含量图。
[0025]图2为本专利技术解淀粉芽孢杆菌JSSW
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LA、酪酸芽孢杆菌JSIM
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MCB20040312发酵辣木叶蛋白质、总酚含量图。
具体实施方式
[0026]下面将结合本专利技术实施例中本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种发酵辣木叶的制备方法，其特征在于：包括以下步骤，(1)菌种的活化和菌液制备选择枯草芽孢杆菌S1X
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15、枯草芽孢杆菌IIIA
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2、解淀粉芽孢杆菌JSSW
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LA和酪酸芽孢杆菌JSIM
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MCB20040312分别接种到LB固体培养基中，35℃培养24h，使菌种活化；将活化后的菌种接种到LB液体培养基中35℃培养18～20小时后，使用灭菌的PBS稀释菌液，将菌液浓度调整至1
×
107CFU/mL～1
×
108CFU/mL；(2)辣木叶预处理将辣木叶低温冷冻干燥后，粉碎，过80～100目筛，待用；(3)发酵条件的选择取步骤(2)中粉碎过筛后的辣木叶分别以料水比为1:7.5、1:10、1:12.5加入蒸馏水混合后，调节pH值至8.6，121℃的高压灭菌30min，待灭菌完成冷却至室温，将步骤(1)中枯草芽孢杆菌S1X
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15、枯草芽孢杆菌IIIA
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2、解淀粉芽孢杆菌JSSW
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LA和酪酸芽孢杆菌JSIM
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MCB20040312的菌液按2％～5％的接种量分别接种到料水比为1:7.5、1:10、1:12.5的灭菌后的辣木叶水溶液中，控制发酵温度分别为30℃、35℃和40℃，发酵时间选择24小时、48小时和72小时，按L9(34)正交表进行正交试验，结果显示解淀粉芽孢杆菌JSSW
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LA和酪酸芽孢杆菌JSIM
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MCB20040312在料水比1:10、时间48h、温度30℃条件下，辣木叶发酵最佳；(4)发酵辣木叶成品的制备根据步骤(3)的试验结果，将经解淀粉芽孢杆菌JSSW
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LA和酪酸芽孢杆菌JSIM
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MCB20040312发酵的辣木叶在
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【专利技术属性】
技术研发人员：刘波，骆薇竹，周群兰，孙存鑫，戈贤平，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院淡水渔业研究中心，
类型：发明
国别省市：
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