一种生防菌株HN-2的正丁醇提取物的制备方法及其橡胶白粉病防治中的应用技术

本发明专利技术提供一种生防菌株HN

【技术实现步骤摘要】
一种生防菌株HN
‑
2的正丁醇提取物的制备方法及其橡胶白粉病防治中的应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，特别涉及一种生防菌株HN
‑
2的正丁醇提取物的制备方法及其橡胶白粉病防治中的应用。

技术介绍

[0002]橡胶树白粉菌(Erysiphe quercicola)属于真菌属半知菌类，为活体专性寄生菌，无法离开植物活体组织培养，其导致的橡胶树白粉病是橡胶树上最具经济破坏性的病害之一。在橡胶树白粉病的化学防治中，常见的化学药剂类型大致分为：无机化合物、三唑类化合物、甲氧基丙烯酸酯衍生物(Strobilurins)等化学药剂。对于橡胶白粉病的防治，采用的硫等无机化合物，大面积使用可能会导致人体中毒，污染环境，并且硫磺粉的使用往往受天气影响，同时，采用十三吗啉、三唑酮、硫磺粉和粉锈宁等化学药剂，易出现抗药性水平提高的现象。
[0003]生物防治是通过利用植物根部以及内生的被称为生防菌的有益微生物，来控制植物病害的发生发展。生防菌可能通过分泌一些化合物来影响植物本身，或是直接对病原物本身产生影响，或者与病原物竞争生存位点，减少病原物的数量等多种调控方式，以达到不同的防治病害效果。对于白粉病的生物防治而言，受不同作物白粉病菌的致病菌种类的差异大的影响，导致目前的白粉病的防治的难度高，致病作用机理复杂。目前，对于利用生防菌株的代谢产物的相关提取物，应用于橡胶白粉病菌的生物防治方面的内容，则未见报导。

技术实现思路

[0004]鉴以此，本专利技术提出一种生防菌株HN
‑
2的正丁醇提取物的制备方法及其橡胶白粉病防治中的应用。
[0005]本专利技术的技术方案是这样实现的：
[0006]本专利技术采用的生防细菌B.velezensis HN
‑
2，命名为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)HN
‑
2，其保藏编号为：CCTCC NO:M 2018382，其已公开在专利号201910239698.5，一种生防菌HN
‑
2及其提取物在制备抑制病原真菌制剂上的应用的专利中。本专利技术通过分离和纯化菌株HN
‑
2代谢产物中的活性成分，进一步深入研究细菌B.velezensis HN
‑
2正丁醇提取物在橡胶白粉病菌防控中的作用机制，为进一步拓展B.velezensis生物控制制剂的开发提供理论基础。
[0007]一种生防菌株HN
‑
2的正丁醇提取物的制备方法，包括如下步骤：
[0008](1)采用生防细菌B.velezensis HN
‑
2，进行扩繁培养后，离心，得到发酵上清液；
[0009](2)采用正丁醇有机溶剂与HN
‑
2发酵上清液，按照0.5
‑
1.5:1的体积比例混合，在10～15℃下低温静置萃取，得到上层正丁醇萃取液；
[0010](3)将正丁醇萃取液进行旋转蒸发，冷冻干燥，得到HN
‑
2发酵活性正丁醇提取物。
[0011]进一步说明，步骤(1)中，所述生防细菌B.velezensis HN
‑
2的扩繁培养为将菌株
HN
‑
2接种于LB液体培养基中，27～28℃，180～200rpm培养48h；所述离心速度为10000rpm。
[0012]进一步说明，步骤(2)中，所述正丁醇有机溶剂与HN
‑
2发酵上清液的体积比为1:1；萃取时间≥12h。
[0013]进一步说明，步骤(3)中，所述旋转蒸发温度为50℃。
[0014]一种根据上述生防菌株HN
‑
2的正丁醇提取物的制备方法制得的HN
‑
2发酵活性正丁醇提取物。
[0015]一种HN
‑
2发酵活性正丁醇提取物在橡胶白粉病防治中的应用，其可用于抑制橡胶白粉病菌的生长。
[0016]一种HN
‑
2发酵活性正丁醇提取物通过对橡胶白粉菌孢子的细胞裂解和细胞质外渗的方式，或通过对抑制细胞壁或细胞膜合成的方式，拮抗橡胶白粉病的生长。
[0017]一种HN
‑
2发酵活性正丁醇提取物在橡胶白粉病防治中的应用，其可用于诱导橡胶树对橡胶白粉病的抗性。
[0018]一种HN
‑
2发酵活性正丁醇提取物通过调控橡胶防御酶活性及防御基因的表达量，诱导橡胶树对橡胶白粉病的抗性。
[0019]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0020]本专利技术通过采用正丁醇为提取溶剂，对生防细菌B.velezensis HN
‑
2的代谢产物中活性成分的进行低温提取，获得的HN
‑
2发酵活性正丁醇提取物，其活性成分，脂肽，具有很强的抗生素活性，用于抑制橡胶白粉病菌的生长，并且，经过实验发现，其可有效调控橡胶防御酶活性及防御基因的表达量，诱导橡胶树对橡胶白粉病的抗性，实现生防细菌B.velezensis HN
‑
2正丁醇提取物广泛应用橡胶白粉菌的防治，为后续贝莱斯芽孢杆菌的开发和利用及橡胶白粉病的防治提供重要基础。
附图说明
[0021]图1为本专利技术实施例的B.velezensis HN
‑
2正丁醇提取物和苯甲
·
丙环唑抑制E.quercicola孢子萌发的柱状图；
[0022]图2为本专利技术实施例的B.velezensis HN
‑
2提取物和苯甲
·
丙环唑对喷洒在叶片上的E.quercicola孢子的形态的影响图；
[0023]其中，组A、B、C分别为在叶面分别喷施水、HN
‑
2提取物(28μg/mL)和苯甲
·
丙环唑(28μg/mL)12小时后，接种E.quercicola；组D、E、F分别为在接种E.quercicola 12小时后，在叶面分别喷施水、HN
‑
2提取物(28μg/mL)和苯甲
·
丙环唑(28μg/mL)；
[0024]组D、E、F：在接种E.quercicola 12小时后，在叶面分别喷施水、HN
‑
2提取物(28μg/mL)或苯甲
·
丙环唑(28μg/mL)
[0025]图3为本专利技术实施例的橡胶叶片在先处理和在后处理的SOD酶的活性的柱状图；
[0026]图4为本专利技术实施例的橡胶叶片在先处理和在后处理的POD酶的活性的柱状图；
[0027]图5为本专利技术实施例的橡胶叶片在先处理和在后处理的CAT酶的活性的柱状图；
[0028]图6为本专利技术实施例的橡胶叶片在先处理和在后处理的APX酶的活性的柱状图；
[0029]图7为本专利技术实施例的橡胶叶片中不同处理后HbLFG1、HbNPR1、HbC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种生防菌株HN
‑
2的正丁醇提取物的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)采用生防细菌B.velezensis HN
‑
2，进行扩繁培养后，离心，得到发酵上清液；(2)采用正丁醇有机溶剂与HN
‑
2发酵上清液，按照0.5
‑
1.5:1的体积比例混合，在10～12℃下低温静置萃取，得到上层正丁醇萃取液；(3)将正丁醇萃取液进行旋转蒸发，冷冻干燥，得到HN
‑
2发酵活性正丁醇提取物。2.如权利要求1所述的一种生防菌株HN
‑
2的正丁醇提取物的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，所述生防细菌B.velezensis HN
‑
2的扩繁培养为将菌株HN
‑
2接种于LB液体培养基中，27～28℃，180～200rpm培养48h；所述离心速度为10000rpm。3.如权利要求1所述的一种生防菌株HN
‑
2的正丁醇提取物的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，所述正丁醇有机溶剂与HN
‑
2发酵上清液的体积比为1:1；萃取时间≥12h。4.如权利要求1所述的一种生防菌株HN
‑
2的正丁醇提取物的制备方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：靳鹏飞，褚凌龙，缪卫国，刘文波，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：