一种预测癫痫患儿对丙戊酸耐药性的生物标记物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种预测癫痫患儿对丙戊酸耐药性的生物标记物及其应用，该生物标记物为p21的mRNA表达水平，该生物标记物对于研究癫痫患者对丙戊酸耐药的发生机制具有深远的意义。义。

【技术实现步骤摘要】
一种预测癫痫患儿对丙戊酸耐药性的生物标记物及其应用


[0001]本专利技术属于疾病诊断及预测的生物标志物领域，更具体地，涉及一种预测癫痫患儿对丙戊酸耐药性的生物标记物及其应用。

技术介绍

[0002]癫痫是一种由大脑神经元异常放电引起的慢性疾病，为全球重点防治的五大神经、精神疾病之一。全球约有7000万患者，其中我国患病人数约有1000万，且每年新增人数高达40万。癫痫的反复发作直接损害患者大脑、影响智力，进而导致意识障碍及性格异常，对患者家庭和社会造成严重的精神和经济负担。
[0003]药物是治疗癫痫的主要方法，但近40
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50％的癫痫患者对第一次抗癫痫药物单药治疗无效，30％的患者正确使用2种以上抗癫痫药物治疗后仍无法控制癫痫的发作，称为药物难治性癫痫。药物难治性癫痫是目前抗癫痫治疗急需解决的难点，主要体现在：1)虽然近来不断有新的抗癫痫药物应用于临床，但难治性癫痫的患病率并无变化；2)难治性癫痫的最终诊断通常需要2年以上，在此期间癫痫的反复发作加重患者的脑功能损伤，并延误综合治疗(如手术)的最佳治疗时机。因此，引入药物治疗评估方面的生物标志物以早期预测难治性癫痫具有重要的临床意义。
[0004]丙戊酸是传统的抗癫痫药物，在临床上应用超过50年，因其具有广泛的抗癫痫作用，目前仍是多种类型癫痫的一线用药。目前，丙戊酸耐药是目前临床上抗癫痫治疗的难点，难治性癫痫患者大多服用2种以上的抗癫痫药物，而丙戊酸往往应用于联合用药的治疗中。研究发现丙戊酸存在明显的个体差异，部分患者对丙戊酸治疗抵抗，而对丙戊酸治疗不敏感的特发性全身性癫痫患者100％后期被诊断为药物难治性癫痫，说明丙戊酸不敏感是预后不良的重要因素。因此，寻找丙戊酸疗效差异的生物标记物对预测药物难治性癫痫具有重要意义。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的至少一个缺陷或改进需求，本专利技术提供了一种预测癫痫患儿对丙戊酸耐药性的生物标记物及其应用，其目的在于预测了一种癫痫患儿对丙戊酸耐药性的潜在生物标记物，该生物标记物对于研究丙戊酸耐药的发生机制具有指导意义。
[0006]为实现上述目的，按照本专利技术的一个方面，提供了一种预测癫痫患儿对丙戊酸耐药性的生物标记物，其特征在于，所述标记物为p21的mRNA表达水平。
[0007]优选的，所述生物标记物在丙戊酸耐药癫痫患儿中的水平明显高于丙戊酸敏感癫痫患儿中的水平。
[0008]按照本专利技术的另一个方面，还提供了一种上述生物标记物在作为预测癫痫患儿对丙戊酸耐药性的标记物中的应用。
[0009]总体而言，通过本专利技术所构思的以上技术方案与现有技术相比，能够取得下列有益效果：
[0010]本专利技术通过应用丙戊酸敏感和丙戊酸耐药的癫痫患儿全血转录组结合癫痫大鼠的转录组进行整合分析，探索能够预测癫痫患儿对丙戊酸反应性的生物标记物，对于研究癫痫患者对丙戊酸耐药的发生机制，以及预测药物难治性癫痫具有重要意义。
附图说明
[0011]图1是本专利技术实施例提供的丙戊酸敏感组(n＝3)和耐药组(n＝3)转录组学分析；其中A)全血转录组学
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热图；B)全血转录组学
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信号通路富集分析；C)海马组织转录组学
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热图；D)海马组织转录组学
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信号通路富集分析图；
[0012]图2是本专利技术实施例提供的丙戊酸敏感组(n＝3)和耐药组(n＝3)大鼠全血和海马组织的共同差异基因；其中A)韦恩图；B)全血和海马组织中12个共同差异基因的表达情况(P<0.05)；
[0013]图3是本专利技术实施例提供的p21和plek2基因在丙戊酸敏感和耐药大鼠全血、海马组织和患儿全血中的表达情况；其中A)p21；B)plek2；
[0014]图4是本专利技术实施例提供的p21和plek2基因在戊四唑致痫大鼠、丙戊酸敏感和耐药大鼠海马组织中的表达情况(n＝6)；其中A)p21；B)plek2图；
[0015]图5是本专利技术实施例提供的p21在戊四唑致痫大鼠、丙戊酸敏感和耐药大鼠海马组织中的表达情况(n＝5)；其中A)尼氏染色(海马DG区)；B)Western blot曝光图；C)蛋白表达统计分析图。
具体实施方式
[0016]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。此外，下面所描述的本专利技术各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
[0017]实施例1：预测癫痫患儿对丙戊酸耐药性的生物标记物的筛选
[0018]本专利技术第一实施例提供一种预测癫痫患儿对丙戊酸耐药性的生物标记物，该生物标记物的筛选方法如下：
[0019]本实施例用到的主要试剂如下表所示：
[0020][0021][0022]本实施例用到的主要仪器如下表所示：
[0023][0024]本实施例用到的测序接头引物如下表所示：
[0025][0026](一)样本采集
[0027]对大鼠腹腔注射戊四唑28天，建立慢性癫痫大鼠模型，随后给予连续口服丙戊酸14天，分别筛分出丙戊酸敏感和丙戊酸耐药两组大鼠作为样本采集对象，每一组各大鼠3只，样本量n＝3。收集口服丙戊酸第14天的两组大鼠的全血和海马组织样本，
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80℃保存。
[0028](二)抽提样本中总RNA及其质量检测
[0029]本实施例中采用Trizol(Invitrogen公司)法提取全血/组织中的总RNA，提取步骤如下：
[0030](1)提取海马组织RNA时，研钵高温高压灭菌，每50
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100mg组织液氮研磨后，将粉末用液氮遇冷的药匙转移至预先装有1ml Trizol的EP管中，充分混匀(粉末总体积不能超过Trizol体积的10％)用1ml Trizol试剂裂解；
[0031]提取全血RNA时，在0.5ml小鼠全血中加入3ml的Trizol，震荡摇匀，
[0032](2)将上述裂解液，室温15
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30℃静置5min；
[0033](3)加入0.2ml氯仿，震荡摇均匀，室温静置5min后，12000rpm 4℃离心15min；
[0034](4)将上清液移至新的1.5ml离心管中，加入等体积
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20℃预冷的异丙醇，颠倒混匀，冰上静置10min；然后12000rpm 4℃离心10min，弃上清；
[0035](5)向沉淀中加入1ml 70％DEPC
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EtOH清洗沉淀，12000rpm 4℃离心15min，弃上清保留沉淀，室温干燥10min；
[0036](6)加入30μl RNase
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free水溶解RNA沉淀。
[0037]基因组DNA的去除：本实施例使用DNase I(TaKara)去本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种预测癫痫患儿对丙戊酸耐药性的生物标记物，其特征在于，所述生物标记物为p21的mRNA表达水平。2.如权利要求1所述的生物标记物，所述生物标记物在丙戊...

【专利技术属性】
技术研发人员：王燕，李友宾，李智平，王广飞，卢金淼，李小霞，谭佳佳，熊忠玉，
申请(专利权)人：海南医学院，
类型：发明
国别省市：