突变的TTN基因及肥厚型心肌病检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及人类遗传学和内科心血管技术领域，具体涉及了一种突变的TTN基因，在基因组位置chr2:179610658处，碱基T突变为碱基G；参考基因组版本是GRCh37。本发明专利技术还涉及一种肥厚型心肌病检测试剂盒，包括用于扩增突变的TTN基因的引物。本发明专利技术提供的突变的TTN基因可以作为临床辅助诊断的生物标志物；检测该变异的携带者，为受试者提供优生优育指导和遗传咨询，减少患儿出生，对肥厚型心肌病的早期诊断，或者辅助临床判断具有重要意义。或者辅助临床判断具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
突变的TTN基因及肥厚型心肌病检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及人类遗传学和内科心血管
，尤其涉及突变的TTN基因及肥厚型心肌病检测试剂盒。

技术介绍

[0002]肥厚型心肌病(HCM)是一种最常见的遗传性心脏病，属常染色体显性遗传，临床表现为心室肌肥厚(尤其是室间隔非对称性肥厚)、心律失常以及运动耐量受损及猝死。
[0003]TTN基因是肌联蛋白编码基因，表达于心肌和骨骼肌，蛋白分子量大，长度跨越肌节的1/2，是一种重要的结构蛋白。TTN基因突变可导致扩张型心肌病、HCM及多种心肌病。致病突变的类型主要为截短变异。
[0004]从分子水平揭示与TTN基因相关的肥厚型心肌病的发病机制，能够肥厚型心肌病的临床治疗提供理论依据，但是目前仍存在大量未知的TTN基因突变位点，进一步发现新的TTN基因的突变位点将有助于进一步研究肥厚型心肌病，对肥厚型心肌病的早期诊断，或者辅助临床判断具有重要意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是针对肥厚型心肌病，提供一种突变的TTN基因及肥厚型心肌病检测试剂盒。
[0006]本专利技术提供的技术方案如下：
[0007]一、本专利技术提供一种突变的TTN基因，在基因组位置chr2:179610658处，碱基T突变为碱基G；参考基因组版本是GRCh37。
[0008]优选地，在基因组位置chr2:179610620
‑
chr2:179610669处，突变的TTN基因的序列为SEQ ID NO:2。r/>[0009]二、本专利技术还提供了肥厚型心肌病检测试剂盒，包括用于扩增突变的TTN基因的引物。
[0010]优选地，引物的序列为SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6。
[0011]三、本专利技术的原理和有益效果在于：
[0012]本专利技术公开的突变的TTN基因可以作为临床辅助诊断肥厚型心肌病的生物标志物，对肥厚型心肌病的早期诊断，或者辅助临床判断具有重要意义；基于突变的TTN基因开发的检测试剂盒，可以检测出具有突变的TTN基因的患者，为受试者提供优生优育指导和遗传咨询，减少患儿出生。
附图说明
[0013]图1为实施例1的家系图；
[0014]图2为实施例1中先证者的Sanger测序图；
[0015]图3为实施例1家系中先证者母亲的Sanger测序图。
具体实施方式
[0016]下面通过具体实施方式进一步详细说明：
[0017]实施例1
‑
先证者验证实验
[0018]样本来源：中国医学科学院阜外医院，在先证者(男，46岁)及其家属自愿签署知情同意书的前提下，寄送5
‑
10mL全血样本，建立病历资料库，详细记录先证者病情、家系情况等资料。本研究已得到本单位伦理委员会批准。
[0019]采用Sanger测序法对先证者及其家属的TTN基因进行基因检测，具体步骤如下：
[0020]S1、提取基因组DNA；
[0021]采用江苏百世诺医疗科技有限公司的磁珠法全血基因组DNA提取试剂对先证者及其家属的人类全血EDTA抗凝样本进行全基因组DNA的提取，对DNA的浓度和纯度进行检测。
[0022]S2、准备PCR反应体系：
[0023]设计包含目的片段的特异性扩增引物：
[0024]上游引物(TTN
‑
133379
‑
E46P8F，SEQ ID NO:5)：5'TTGAAATGCCTCCTCGCTT 3'；
[0025]下游引物(TTN
‑
133379
‑
E46P8R，SEQ ID NO:6)：5'CCATCTTTGTACCAGTAAACCGT 3'；
[0026]长度：526bp。
[0027]扩增试剂使用江苏康为世纪生物科技有限公司生产的2
×
Taq Master Mix(Dye)。扩增体系：2
×
Taq Master Mix(Dye)25μL；上下游引物(10μM)各1μL；DNA模板<0.5μg；用ddH2O补至50μL。
[0028]PCR扩增条件：94℃预变性2min；95℃变性32s，61℃退火25s，70℃延伸30s，共32循环。70℃终延伸2min。
[0029]产物检测：取2μL的PCR产物，使用1.5％的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，选用1000bp Marker作为参考，检测验证扩增产物为预期的大小。
[0030]S3、采用3730XL Genetic Analyzer全自动测序仪对PCR产物进行测序。从NCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)数据库获得参考序列和测序结果进行比对。
[0031]实验结果：
[0032](1)本实施例发现先证者携带突变的TTN基因，具体检测结果如下表1所示：
[0033]表1突变的TTN基因的具体检测结果
[0034]基因基因组位置转录本号碱基改变氨基酸改变参考基因组版本外显子号TTNchr2:179610658NM_133379c.16469T>Gp.Leu5490TerGRCh37/hg19Exon46
[0035]在基因组位置chr2:179610620
‑
chr2:179610669处，野生型TTN基因的序列为SEQ ID NO:1：TTTAAGCAGTTTAATGGAAGAATTGGTCTTAAAGAGCAACTACACAGACA，T为基因组位置chr2:179610658处突变前碱基。
[0036]在基因组位置chr2:179610620
‑
chr2:179610669处，突变的TTN基因的序列为SEQ ID NO:2：TTTAAGCAGTTGAATGGAAGAATTGGTCTTAAAGAGCAACTACACAGACA，G为基因组位置chr2:179610658处突变后碱基；
[0037]野生型TTN基因编码DNA的参考序列为SEQ ID NO:3：
[0038]ATGACAACTCAAGCACCGACGTTTACGCAGCCGTTACAAAGCGTTGTGGTACTGGAGGGTAGTACCGCAACCTTTGAGGCTCACATTAGTGGTTTTCCAGTTCCTGAGGTGAGCTGGTTTAGGGATGGCCAGGTGATTTCCACTTCCACTCTGCCCGGCGTGCAGATCTCCTTTAGCGATGGCCGCGCTAAACTGACGATCCCCGCCGTGACTAAAGCCA
ACAGTGGACGATATTCCCTGAAAGCCACCAATGGATCTGGACAAGCGACTAGTACTGCTGAGCTTCTCGTGAAAGCTGAGACAGCACCACCCAACTTCGTTCAACGACT本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种突变的TTN基因，其特征在于，在基因组位置chr2:179610658处，碱基T突变为碱基G；参考基因组版本是GRCh37。2.根据权利要求1所述的突变的TTN基因，其特征在于，在基因组位置chr2:179610620
‑
chr2:1796...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘哲，梁庆渊，赵娜娜，赖开生，刘昕超，高璇，李方玉，侯青，惠汝太，
申请(专利权)人：百世诺北京医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：