miRNA标志物在制备糖尿病认知障碍诊断产品中的应用及方法技术

本发明专利技术公开了miRNA标志物在制备糖尿病认知障碍诊断产品中的应用，所述miRNA标志物为所述血清外泌体miR

【技术实现步骤摘要】
miRNA标志物在制备糖尿病认知障碍诊断产品中的应用及方法


[0001]本专利技术属于生物医学
，具体涉及miRNA标志物在制备糖尿病认知障碍诊断产品中的应用及方法。

技术介绍

[0002]随着人口老龄化的加剧，糖尿病和认知功能障碍等慢性病在全国范围内愈发流行。认知障碍是指记忆、视空间、语言、执行、人格行为等方面受损，按严重程度分为轻度认知障碍(MCI)和痴呆。调查显示，我国60岁以上人群约有1500万的痴呆患者，占全世界痴呆患者总人数的20％。研究发现，约1/10的痴呆发生与糖尿病相关。2020年中国老年人群的最新研究数据显示，痴呆和MCI患者数量已分别高达1500万和3800万；且与一般人群相比，老年糖尿病患者中MCI及痴呆患病率均显著升高。114项前瞻性研究的荟萃分析显示，2型糖尿病可使认知障碍风险增加1.25
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1.91倍。糖尿病认知障碍起病隐匿，病程较长且不可逆，早期发现并干预疾病，是延缓认知减退进程、降低晚年痴呆率的关键。然而糖尿病认知障碍早期临床诊断缺少特异的无创生物标志物，阻碍了疾病的早期诊断。
[0003]脂肪组织是人体最大的内分泌器官，分泌多种激素、细胞因子与大脑发生交互作用，影响认知功能。脂肪功能紊乱与糖尿病及认知障碍的发生密切相关。脂肪组织同样可分泌外泌体，一种可包含多种生物活性物质，包括核酸、蛋白质以及脂质，直径大约为30
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150nm之间的双层膜性囊泡，调控其他组织器官的生理病理功能，但是其是否能够介导脂肪组织与大脑的信息交流，进而参与糖尿病认知功能障碍的发生尚不明确。
[0004]miRNA是一类内源性的，在进化上高度保守的，长约19
‑
23个核苷酸的单链RNA分子，通过靶向mRNA的3'UTR在翻译水平对基因表达进行调节。近年来大量研究表明，miRNA可被包裹在外泌体中并释放到循环系统，其包含的miRNA也被证明可以作为肿瘤等疾病的指纹图谱和生物标志物，具有创伤小、稳定性好、灵敏度高、便于检测等优点，是完全符合精准医学的新型医疗模式要求的新一代疾病标志物。但目前尚没有关于血清外泌体miRNA作为标志物诊断糖尿病认知障碍的应用。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术期望提供miRNA标志物在制备糖尿病认知障碍诊断产品中的应用及方法，通过对脂肪外泌体样本miRNA表达谱的检测，筛选出一种可用于诊断糖尿病认知障碍的标志物miR
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3p，其在糖尿病患者血清外泌体中的水平显著高于非糖尿病组，且与糖尿病患者认知评分呈显著负相关，具有制备相关诊断产品，用于辅助早期诊断糖尿病认知障碍的重要价值。
[0006]为达到上述目的，本专利技术的技术方案是这样实现的：
[0007]miRNA标志物在制备糖尿病认知障碍诊断产品中的应用，所述miRNA标志物为所述血清外泌体miR
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3p，其序列为AUAAAGCUAGAUAACCGAAAGU。
[0008]这里，血清外泌体miR
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3p亦为精准医疗的靶点，为通过降低患者脂肪组织外泌体中miR
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3p的水平，从而治疗糖尿病认知障碍提供实验和理论基础。
[0009]进一步地，所述诊断产品为糖尿病认知障碍诊断试剂盒。
[0010]进一步地，所述糖尿病认知障碍诊断试剂盒中包括miR
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3p标准品，序列为AUAAAGCUAGAUAACCGAAAGU。
[0011]这里，将miRNA标志物miR
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3p作为标准品，因其与糖尿病患者认知评分呈显著负相关，具有制备相关诊断产品，用于辅助早期诊断糖尿病认知障碍的重要价值。
[0012]进一步地，所述糖尿病认知障碍诊断试剂盒还包括逆转录引物。
[0013]进一步地，所述逆转录引物序列为GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACACTTTC。
[0014]进一步地，所述糖尿病认知障碍诊断试剂盒还包括逆转录试剂。
[0015]进一步地，所述逆转录试剂为5
×
miRNA RT solution mix、miRNA RT Enzyme Mix。
[0016]这里，所述试剂盒中可配置适量的RNase
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Free ddH2O，以便客户使用。
[0017]本专利技术还另外提供miRNA标志物在制备糖尿病认知障碍诊断产品中的应用方法，根据上述miRNA标志物在诊断产品中的应用，包括以下步骤：
[0018]1)收集血清样本并分离血清外泌体；
[0019]2)提取血清外泌体RNA；
[0020]3)使用糖尿病认知障碍诊断试剂盒，对提取的RNA及miR
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3p标准品进行逆转录，获得cDNA并进行qPCR荧光定量检测。
[0021]这里，根据qPCR荧光定量检测结果，辅助诊断糖尿病认知障碍病程。
[0022]进一步地，所述方法还包括：
[0023]所述步骤3)中qPCR荧光定量引物序列分别为F：CGCGCGATAAAGCTAGATAACC；R：AGTGCAGGGTCCGAGGTATT。
[0024]本专利技术有益效果如下：1)本专利技术通过对脂肪外泌体样本miRNA表达谱的检测，筛选出一种可用于诊断糖尿病认知障碍的标志物miR
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3p，其在糖尿病患者血清外泌体中的水平显著高于非糖尿病组，且与糖尿病患者认知评分呈显著负相关，具有制备相关诊断产品，用于辅助早期诊断糖尿病认知障碍的重要价值；2)本专利技术还为糖尿病认知损伤提供了一种精准医疗的靶点，通过降低患者脂肪组织外泌体中miR
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3p的水平，从而为治疗糖尿病认知障碍提供实验和理论基础。
附图说明
[0025]图1为本专利技术实施例1中脂肪组织外泌体镜检图；
[0026]图2为本专利技术实施例1中脂肪组织外泌体Nanosight分析图；
[0027]图3为本专利技术实施例1中小鼠脑区PKH26的荧光强度分布图；
[0028]图4为本专利技术实施例1中小鼠脑区PKH26荧光分布图；
[0029]图5为本专利技术实施例1中小鼠水迷宫上台潜伏时间对照图；
[0030]图6为本专利技术实施例1中小鼠处于目的象限时间对照图；
[0031]图7为本专利技术实施例2中小鼠脂肪组织外泌体差异表达的miRNA检测结果图；
[0032]图8为本专利技术实施例2中小鼠海马差异表达的miRNA检测结果图；
[0033]图9为本专利技术实施例2中小鼠脂肪组织外泌体与海马差异表达的miRNA分析对比图；
[0034]图10为本专利技术实施例3中糖尿病及非糖尿病受试者血清外泌体中miR
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3p含量检测图。
具体实施方式
[0035]为了能够更加详尽地了解本专利技术的特点与
技术实现思路
，下面结合附图对本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.miRNA标志物在制备糖尿病认知障碍诊断产品中的应用，其特征在于，所述miRNA标志物为所述血清外泌体miR
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3p，其序列为AUAAAGCUAGAUAACCGAAAGU。2.根据权利要求1所述的miRNA标志物在制备糖尿病认知障碍诊断产品中的应用，其特征在于，所述诊断产品为糖尿病认知障碍诊断试剂盒。3.根据权利要求2所述的miRNA标志物在制备糖尿病认知障碍诊断产品中的应用，其特征在于，所述糖尿病认知障碍诊断试剂盒中包括miR
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3p标准品，序列为AUAAAGCUAGAUAACCGAAAGU。4.根据权利要求3所述的miRNA标志物在制备糖尿病认知障碍诊断产品中的应用，其特征在于，所述糖尿病认知障碍诊断试剂盒还包括逆转录引物。5.根据权利要求4所述的miRNA标志物在制备糖尿病认知障碍诊断产品中的应用，其特征在于，所述逆转录引物序列为GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACACTTTC。6.根据权利要求3所述的miRNA标志...

【专利技术属性】
技术研发人员：毕艳，王进，
申请(专利权)人：南京鼓楼医院，
类型：发明
国别省市：