核苷类药物生物转化研究中排除内源性物质干扰的方法技术

本发明专利技术公开了一种核苷类药物生物转化研究中排除内源性物质干扰的方法。本发明专利技术在对核苷类似物进行生物转化研究的过程中，将放射性同位素标记的核苷类似物作为示踪剂，使用高效液相联用放射性同位素/高分辨质谱进行分析，可以将核苷类似物的代谢产物进行初步的识别，对于与内源性物质相同的代谢产物，进行衍生化反应，然后再使用高效液相联用放射性同位素/高分辨质谱进行分析，可以此结果用于验证核苷类似物的代谢产物，排除内源性物质的干扰，有效提高核苷类似物生物转化研究的效率及准确性。性。性。

【技术实现步骤摘要】
核苷类药物生物转化研究中排除内源性物质干扰的方法


[0001]本专利技术涉及药学领域，尤其涉及一种核苷类药物生物转化研究中排除内源性物质干扰的方法。

技术介绍

[0002]核苷类药物是临床上用于治疗病毒感染性疾病、肿瘤、艾滋病的一类重要的药物。越来越多的核苷类似物进入药物研发阶段，在核苷类似物研发过程种，对于核苷类似物进行药性评价非常重要，很多时候，是药物研发成败的关键。药性评价中非常重要的一个方面是需要对核苷类似物进行分析及生物转化研究。核苷类似物生物转化研究，现行方法一般为液质联用高分辨质谱来进行。因为核苷类似物母核一般为核苷母核，在分析过程中，会被内源性物质干扰，对核苷类似物(或者说核苷类药物)生物转化研究带来困难。

技术实现思路

[0003]为了解决核苷类似物生物转化研究中内源性物质干扰的问题，本专利技术公开了一种核苷类药物生物转化研究中排除内源性物质干扰的方法，包括以下步骤：
[0004]S1、采用放射性同位素标记待测核苷类药物；
[0005]S2、对所述步骤S1中标记了放射性同位素的待测核苷类药物进行生物转化试验；
[0006]S3、对经过所述步骤S2的生物转化试验产生的样品和空白对照分别用高效液相联用放射性同位素/高分辨质谱检测，找出与空白对照同一保留时间的带有放射性同位素的特征峰作为待分析的拟代谢产物，以及找出与所述步骤S2的生物转化试验产生的样品同一保留时间的空白对照的特征峰作为内源性物质；
[0007]S4、分别富集所述步骤S3中的待分析的拟代谢产物和内源性物质，并分别进行衍生化反应，分别得到衍生化拟代谢产物和衍生化内源性物质；
[0008]S5、用高效液相联用放射性同位素/高分辨质谱分别检测所述步骤S4中的衍生化拟代谢产物和衍生化内源性物质来进行判断，判断原则为：若所述衍生化拟代谢产物的保留时间均与所述衍生化内源性物质的保留时间对应，则所述内源性物质中含有与所述待分析的拟代谢产物相同的物质；若所述衍生化拟代谢产物的保留时间部分与所述衍生化内源性物质的保留时间对应，则所述待分析的拟代谢产物包含第一类物质和第二类物质，且所述内源性物质包含所述第一类物质但不包含所述第二类物质；若所述衍生化拟代谢产物的保留时间均不与所述衍生化内源性物质的保留时间对应，则所述内源性物质中不含有与所述待分析的拟代谢产物相同的物质，排除了所述内源性物质的干扰。在本专利技术中术语“生物转化试验”可以理解为包含了文字上的简单替换，比如“生物转化实验”、“生物转化研究”等。
[0009]在一些实施方案中，所述步骤S1中：放射性同位素选自C
‑
14、H
‑
3、I
‑
125中的一种或多种。
[0010]在一些实施方案中，所述步骤S1中：放射性同位素标记在待测核苷类药物的不被
代谢成小分子的部位。
[0011]在一些实施方案中，所述步骤S1中：待测核苷类药物的不被代谢成小分子的部位选自腺嘌呤，鸟嘌呤，胸腺嘧啶，尿嘧啶及其衍生物。
[0012]在一些实施方案中，所述步骤S2中：生物转化试验选自动物体内生物转化研究、人体内生物转化研究和体外基质生物转化研究中的一种或者多种；所述体外基质选自血浆、肝细胞、肝微粒体、肝S9中的一种或者多种。
[0013]在一些实施方案中，所述步骤S3中：所述空白对照用于排除基质干扰；所述基质干扰包括内源性物质干扰；
[0014]所述同一保留时间和所述保留时间对应均包含分析化学领域允许的时间误差范围。
[0015]在一些实施方案中，所述高效液相联用放射性同位素检测器/高分辨质谱指高效液相通过三通分流，分别进入放射性同位素检测器和高分辨质谱检测器。
[0016]在一些实施方案中，所述步骤S4中：所述衍生化反应选自甲基化反应、酯化反应、酰化反应中的一种或者多种。进一步地，所述酰化反应为乙酰化反应。
[0017]在一些实施方案中，还包括步骤S6、采用质谱对所述待测核苷类药物经所述生物转化试验得到的尚未鉴定出的代谢产物重新进行物质种类鉴定。
[0018]在一些实施方案中，所述步骤S6中：尚未鉴定出的代谢产物为排除所述步骤S5中衍生化拟代谢产物的保留时间与衍生化内源性物质的保留时间对应的特征峰表示的物质。
[0019]本专利技术在对核苷类似物进行生物转化研究的过程中，将放射性同位素标记的核苷类似物作为示踪剂，使用高效液相联用放射性同位素/高分辨质谱进行分析，可以将核苷类似物的代谢产物进行初步的识别，对于与内源性物质相同的代谢产物，进行衍生化反应，比如乙酰化和甲基化，然后再使用高效液相联用放射性同位素/高分辨质谱进行分析，可以此结果用于验证核苷类似物的代谢产物，排除内源性物质的干扰，有效提高核苷类似物生物转化研究的效率及准确性。
[0020]以下将结合附图对本专利技术的构思、具体结构及产生的技术效果作进一步说明，以充分地了解本专利技术的目的、特征和效果。
附图说明
[0021]图1是本专利技术一个具体实施方式的流程图。
[0022]图2是放射性同位素标记的化合物A给药到小鼠体内后尿液样品中放射性代谢物谱图和质谱数据(乙酰化前)。其中，I是放射性同位素标记的化合物A经生物转化试验产生的样品的放射性图谱，主要为代谢产物B；II是I图尿液样品高效液相联用高分辨质谱图谱，I图同位素峰B相同保留时间下可通过质谱检测到内源性物质C。
[0023]图3是代谢产物B和内源性物质C乙酰化后的图谱。其中，I是代谢产物B乙酰化后的放射性图谱；II是内源性物质C乙酰化产物的高分辨质谱图谱。
具体实施方式
[0024]为了使专利技术实现的技术手段、创造特征、达成目的和功效易于明白了解，下结合具体图示，进一步阐述本专利技术。但本专利技术不仅限于以下实施的案例。
[0025]须知，本说明书所附图式所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本专利技术可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本专利技术所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本专利技术所揭示的
技术实现思路
得能涵盖的范围内。
[0026]实施例1
[0027]如图1所示，本实施例的具体技术流程如下：
[0028]1.选择合适核素，一般为C
‑
14或H
‑
3，选择合适的位点，一般为不被代谢成小分子的部位，同时考虑标记合成的难易程度，对核苷类似物(或者具体为核苷类药物)进行放射性同位素标记。
[0029]2.将放射性同位素标记的化合物作为示踪剂，对核苷类似物进行体外或体内生物转化研究，比如动物或人体内生物转化研究和体外基质(血浆，肝细胞，肝微粒体，肝S9等)生物转化研究。
[0030]3.对生物转化实验产生的样品用高效液相联用放射性同位素/高分辨质谱进行分析。以放射性同位素峰为指征，结合高分辨质谱特征，寻找可能的代谢产物。对于某本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种核苷类药物生物转化研究中排除内源性物质干扰的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、采用放射性同位素标记待测核苷类药物；S2、对所述步骤S1中标记了放射性同位素的待测核苷类药物进行生物转化试验；S3、对经过所述步骤S2的生物转化试验产生的样品和空白对照分别用高效液相联用放射性同位素/高分辨质谱检测，找出与空白对照同一保留时间的带有放射性同位素的特征峰作为待分析的拟代谢产物，以及找出与所述步骤S2的生物转化试验产生的空白对照样品同一保留时间的特征峰作为内源性物质；S4、分别富集所述步骤S3中的待分析的拟代谢产物和内源性物质，并分别进行衍生化反应，分别得到衍生化拟代谢产物和衍生化内源性物质；S5、用高效液相联用放射性同位素/高分辨质谱分别检测所述步骤S4中的衍生化拟代谢产物和衍生化内源性物质来进行判断，判断原则为：若所述衍生化拟代谢产物的保留时间均与所述衍生化内源性物质的保留时间对应，则所述内源性物质中含有与所述待分析的拟代谢产物相同的物质；若所述衍生化拟代谢产物的保留时间部分与所述衍生化内源性物质的保留时间对应，则所述待分析的拟代谢产物包含第一类物质和第二类物质，且所述内源性物质包含所述第一类物质但不包含所述第二类物质；若所述衍生化拟代谢产物的保留时间均不与所述衍生化内源性物质的保留时间对应，则所述内源性物质中不含有与所述待分析的拟代谢产物相同的物质，排除了所述内源性物质的干扰。2.如权利要求1所述的核苷类药物生物转化研究中排除内源性物质干扰的方法，其特征在于，所述步骤S1中：放射性同位素选自C
‑
14、H
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3、I
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125中的一种或多种。3.如权利要求1所述的核苷类药物生物转化研究中排除内源性物质干扰的方法，其特征在于，所述步骤S1中：...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭莲，周小菊，
申请(专利权)人：南京美新诺医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：