一种脂质体药物体内生物分析方法技术

本发明专利技术提供一种脂质体药物体内生物分析方法，采用液液萃取法和LC

【技术实现步骤摘要】
一种脂质体药物体内生物分析方法


[0001]本专利技术属于医药领域，特别涉及一种脂质体药物体内生物分析方法。

技术介绍

[0002]脂质体是由单个双分子层(单层)和/或一系列同心双分子层(多层)构成的囊泡，后者由两亲性的磷脂形成的含水室隔开，封闭中心为水性隔室。
[0003]在脂质体药物中，药物通常包封在脂质体内部，一般而言水溶性药物包封在水性隔室中(1个或多个)，亲脂性药物则包封在脂质双分子层中(1个或多个)。
[0004]脂质体药物不同于乳、微乳和药物
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脂质混合物，药物从脂质体中的释放行为，以及脂质体清除和循环半衰期等其他特性，会因聚乙二醇和/或胆固醇或其他可能的脂质体添加剂的加入而发生改变。
[0005]鉴于脂质体中药物释放与组织和/或细胞对药物和/或脂质体摄取间存在复杂的相互作用，仅简单地测定血浆中总药物浓度可能不能有效地反映药物在预期的靶器官(即作用部位)的生物利用度。

技术实现思路

[0006]为了脂质体药物进入体内后，体内游离药物和脂质体包裹部分的有效测定，对脂质体体内药代行为以及制剂在体内的释放度提供参考，本专利技术提供一种脂质体药物体内生物分析方法，采用液液萃取法和LC
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MS/MS(液相色谱串联质谱)检测总的脂质体药物含量；采用固相萃取法、液液萃取法和LC
‑
MS/MS检测脂质体包裹药物的含量；通过总的脂质体药物含量减去脂质体包裹药物的含量得到游离脂质体药物的含量。
[0007]在一些实施方案中，总的脂质体药物含量的检测包括以下步骤：
[0008]S1
‑
1、向待测样品、空白样品中分别加入内标溶液，得到含内标的待测样品和空白内标对照；
[0009]S1
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2、向所述步骤S1
‑
1得到的含内标的待测样品和空白内标对照分别加入有机相，混合、液液萃取，取含有脂质体药物的液相层，氮气吹干后加入流动相溶解，进行LC
‑
MS/MS分析，根据脂质体药物的浓度定量标准曲线确定总的脂质体药物的含量。
[0010]在一些实施方案中，所述步骤S1
‑
1还包括向另一份空白样品中加入与所述内标溶液等体积的LC
‑
MS/MS的流动相，得到空白对照；所述步骤S1
‑
2还包括将所述步骤S1
‑
1得到的空白对照独立地进行与所述含内标的待测样品和所述空白内标对照同等的操作。
[0011]在一些实施方案中，脂质体包裹药物含量的检测包括以下步骤：
[0012]S2
‑
1、将与所述步骤S1
‑
1等体积的同一来源的另一份待测样品与水混合，加入活化好的固相萃取板中，收集流出液，得到脂质体包裹药物的水溶液；
[0013]S2
‑
2、向所述步骤S2
‑
1得到的脂质体包裹药物的水溶液中加入内标溶液，得到含内标的脂质体包裹药物水溶液；
[0014]S2
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3、向所述步骤S2
‑
2得到的含内标的脂质体包裹药物水溶液加入有机相，混合、
液液萃取，取含有脂质体药物的液相层，氮气吹干后加入流动相溶解，进行LC
‑
MS/MS分析，根据脂质体药物的浓度定量标准曲线确定脂质体包裹药物的含量。
[0015]在一些实施方案中，所述步骤S2
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1还包括将水单独加入活化好的固相萃取板中，收集流出液，得到空白水溶液；所述步骤S2
‑
2还包括向所述步骤S2
‑
1得到的空白水溶液中加入内标溶液，得到含内标的空白水溶液对照；所述步骤S2
‑
3还包括将所述步骤S2
‑
2得到的含内标的空白水溶液对照独立地进行与所述含内标的脂质体包裹药物水溶液同等的操作。
[0016]在一些实施方案中，所述步骤S2
‑
1还包括将另一份水单独加入活化好的固相萃取板中，收集流出液，得到另一份空白水溶液；所述步骤S2
‑
2还包括向所述步骤S2
‑
1得到的另一份空白水溶液中加入流动相，得到空白水溶液对照；所述步骤S2
‑
3还包括将所述步骤S2
‑
2得到的空白水溶液对照独立地进行与所述含内标的脂质体包裹药物水溶液同等的操作。
[0017]在一些实施方案中，所述液液萃取法中用到的有机相选自三氯甲烷、乙酸乙酯、叔丁基甲醚中的一种或者多种；所述固液萃取法中用到的固相选自C18
‑
E、HLB中的一种或者多种；所述LC
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MS/MS用到的流动相选自含0.1％甲酸水溶液、含0.1％甲酸的乙腈溶液、含0.1％甲酸的甲醇溶液和等体积的甲醇与水中的一种或者多种。优选地，所述流动相为体积比为1:1的甲醇与水。
[0018]在一些实施方案中，所述脂质体药物为多柔比星的脂质体制剂。
[0019]在一些实施方案中，所述内标溶液中的内标选自与所述脂质体药物中的药物化学结构相似的物质。
[0020]在一些实施方案中，所述脂质体药物中的药物为多柔比星；所述内标为柔红霉素。
[0021]在一些实施方案中，所述浓度定量标准曲线包括低浓度定量范围标准曲线和高浓度定量范围标准曲线。
[0022]在一些实施方案中，所述低浓度定量范围标准曲线的浓度范围为5.00ng/mL至2500ng/mL；所述高浓度定量范围标准曲线的浓度范围为0.100μg/mL至50.0μg/mL。
[0023]在一些实施方案中，所述待测样品为含有脂质体药物的全血、血浆、血清、尿液、粪便和组织中的一种或多种。
[0024]在一些实施方案中，所述待测样品为经过冷冻的样品时，需要先完全融化后再进行所述总的脂质体药物含量的检测和所述脂质体包裹药物含量的检测。
[0025]本专利技术有效的解决了如何在已取得的体内样品中，不破坏脂质体的程度，真实有效地测定到体内游离药物情况。通过液液萃取法，可以有效保护脂质体，同时利用相似相溶的原理提取脂质体药物。本专利技术采用液液萃取法，根据脂质体脂溶性的特征，采用相似相溶的特点，有效的血浆基质中脂质体药物进行了提取分离并采用LC
‑
MS/MS进行了测定。
[0026]本专利技术解决了如何在已取得的体内样品中，准确测定中脂质体包裹药物的百分比。即通过固相萃取方法，利用脂质体包裹药物体积大，不容易深入C18颗粒内部，较快从固相萃取小柱上流出，从而达到与游离药物分离的目标。本专利技术采用固相萃取法(Solid
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Phase Extraction，简称SPE)，有效地对体内脂质体包裹药物，比如对脂质体包裹多柔比星进行了测定。
[0027]与制剂的包埋率数据对比，本专利技术有利于考察脂质体在体内的释放程度。本专利技术和传统蛋白沉淀测定体内脂质体和游本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脂质体药物体内生物分析方法，其特征在于，采用液液萃取法和LC
‑
MS/MS检测总的脂质体药物含量；采用固相萃取法、液液萃取法和LC
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MS/MS检测脂质体包裹药物的含量；通过总的脂质体药物含量减去脂质体包裹药物的含量得到游离脂质体药物的含量。2.如权利要求1所述的脂质体药物体内生物分析方法，其特征在于，总的脂质体药物含量的检测包括以下步骤：S1
‑
1、向待测样品、空白样品中分别加入内标溶液，得到含内标的待测样品和空白内标对照；S1
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2、向所述步骤S1
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1得到的含内标的待测样品和空白内标对照分别加入有机相，混合、液液萃取，取含有脂质体药物的液相层，氮气吹干后加入流动相溶解，进行LC
‑
MS/MS分析，根据脂质体药物的浓度定量标准曲线确定总的脂质体药物的含量。3.如权利要求2所述的脂质体药物体内生物分析方法，其特征在于，所述步骤S1
‑
1还包括向另一份空白样品中加入与所述内标溶液等体积的LC
‑
MS/MS的流动相，得到空白对照；所述步骤S1
‑
2还包括将所述步骤S1
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1得到的空白对照独立地进行与所述含内标的待测样品和所述空白内标对照同等的操作。4.如权利要求2所述的脂质体药物体内生物分析方法，其特征在于，脂质体包裹药物含量的检测包括以下步骤：S2
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1、将与所述步骤S1
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1等体积的同一来源的另一份待测样品与水混合，加入活化好的固相萃取板中，收集流出液，得到脂质体包裹药物的水溶液；S2
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2、向所述步骤S2
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1得到的脂质体包裹药物的水溶液中加入内标溶液，得到含内标的脂质体包裹药物水溶液；S2
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3、向所述步骤S2
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2得到的含内标的脂质体包裹药物水溶液加入有机相，混合、液液萃取，取含有脂质体药物的液相层，氮气吹干后加入流动相溶解，进行LC
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M...

【专利技术属性】
技术研发人员：高峥贞，张玲玲，卢金莲，
申请(专利权)人：南京美新诺医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：