一种组织中的药物分析方法技术

本发明专利技术提供一种组织中的药物分析方法，采用定量全身放射性自显影技术(QWBA)和组织包埋切片对离体组织中的药物分布情况进行定量分析检测。本发明专利技术避免了纵向切片后的横向切片，节省实验时间，精准定位皮肤各层结构，直观观察到药物在皮肤角质层、表皮层、真皮层、皮下组织的分布情况。对于其他组织也有类似效果。组织的分布情况。对于其他组织也有类似效果。组织的分布情况。对于其他组织也有类似效果。

【技术实现步骤摘要】
一种组织中的药物分析方法


[0001]本专利技术属于医药领域，特别涉及一种组织中的药物分析方法。

技术介绍

[0002]皮肤给药经皮吸收，是指药物从特殊设计的装置中释放，通过完整的皮肤吸收，进入全身血液系统的一种给药剂型，通常称为经皮给药系统或经皮治疗系统。主要特点为：
[0003]①
避免药物在胃肠道的灭活及肝的首关效应；
[0004]②
使血药浓度平稳并能较长时间保持在有效浓度范围之内；
[0005]③
减少药物对胃肠道的刺激性；
[0006]④
提高安全性，可随时停止用药。
[0007]皮肤的结构：皮肤由表皮、真皮和皮下脂肪组织构成。真皮及皮下组织对药物穿透的阻力很小，且微血管发达，药物由此吸收进入体循环。
[0008]常规皮肤涂抹给药后各层皮肤组织难以分离，需对所有皮肤组织进行纵向切片后再横向切片选取需要的部分(比如特定的选真皮层)，耗费时间，取样无法精准定位到需要的皮层。皮肤涂抹给药后，纵向切片时药物易污染纵切面上的皮肤组织，此时再使用横向切片选取需要部分匀浆进行药物检测，无法判断其检测结果是否有污染部分及污染的程度，从而导致数据结果不准确。
[0009]除皮肤给药后分析药物分布情况外，在其他分层的组织中也需要分析药物分布情况，尤其是患有肿瘤的分层的组织。

技术实现思路

[0010]为了节省实验时间，精准定位、直观观察到药物在组织中的分布情况，本专利技术提供一种组织中的药物分析方法。该方法采用定量全身放射性自显影技术(QWBA)和组织包埋切片对离体组织中的药物分布情况进行定量分析检测。
[0011]在一些实施方式中，包括以下步骤：
[0012]S1、取用放射性标记的药物作用后的目标组织，冷冻定型；
[0013]S2、目标组织样品包埋；
[0014]S3、标准曲线用样品的制备：将
14
C
‑
葡萄糖用血浆配置至设定浓度后，加入羧甲基纤维素钠包埋块包裹的孔中，冷冻，包埋，得到所述标准曲线用样品；
[0015]S4、质控样品的制备：将
14
C
‑
葡萄糖用血浆配置至设定浓度后，加入目标组织样品所在的羧甲基纤维素钠包埋块包裹的空白孔中，冷冻，包埋，得到所述质控样品；
[0016]S5、切片与脱水；
[0017]S6、曝光与显影：曝光后，用激光扫描成像仪扫描得到放射性自显影图像；
[0018]S7、数据分析：使用图像分析软件对所述步骤S6得到的放射性自显影图像中的放射性浓度定量。
[0019]进一步地，羧甲基纤维素钠包埋块中的羧甲基纤维素钠为2.2％
‑
3％羧甲基纤维
素钠(w/v)。优选地，为2.5％羧甲基纤维素钠(w/v)。
[0020]在一些实施方式中，所述步骤S7包括以下步骤：
[0021]S7.1、用液体闪烁计数仪测定所述标准曲线用样品的放射性浓度，得到所述标准曲线用样品的理论值；用所述图像分析软件圈选所述标准曲线用样品的单位面积灰度值与所述标准曲线用样品的理论值进行配对定量，得到标准曲线和线性回归方程式：y＝a
×
x；y表示单位面积灰度值，x表示校正浓度，a表示系数；
[0022]S7.2、用液体闪烁计数仪测定所述质控样品的放射性浓度，得到所述质控样品的理论值；用所述图像分析软件圈选所述质控样品的单位面积灰度值，根据所述步骤S7.1得到的线性回归方程式计算，得到所述质控样品的校正浓度；
[0023]S7.3、标准曲线及质控样品的接受标准包括1)
‑
3)条：1)单个所述质控样品的校正浓度与所述质控样品的理论值的偏差在可接受范围以内，则该质控样品合格；2)至少2/3的所述质控样品合格；3)标准曲线的决定系数≥0.9；所述可接受的范围为
±
15％；只有满足所述接受标准的1)
‑
3)条时，才对所述目标组织样品用所述图像分析软件进行定量分析。在一些实施方式中，所述步骤S7还包括步骤S7.4、用所述图像分析软件圈选分析区域时，排除切片外圈非目标组织外表面的区域的放射性残留物。
[0024]在一些实施方式中，a为1.35030。
[0025]在一些实施方式中，所述目标组织为皮肤；所述步骤S1为取用所述放射性标记的药物以皮肤给药的方式作用后的所述皮肤，冷冻定型。进一步地，所述步骤S7还包括步骤S7.4、用所述图像分析软件圈选分析区域时，排除切片外圈非角质层的区域的放射性残留物。进一步地，所述步骤S1取得的皮肤样品放入干冰中冷冻定型。
[0026]在一些实施方式中，所述步骤S2目标组织样品包埋中将所述步骤S1中得到的冷冻定型的目标组织的纵切面朝上置于包埋容器中。进一步地，所述步骤S2目标组织样品包埋中将所述步骤S1中得到的冷冻定型的目标组织垂直置于包埋容器中，且纵切面朝上。
[0027]在一些实施方式中，所述步骤S3中的标准曲线的定量范围为0.5
‑
8000nCi/g。进一步地，所述步骤S3中的标准曲线的定量范围为1
‑
8000nCi/g。
[0028]在一些实施方式中，所述步骤S4中的质控样品的浓度包含3个梯度，分别是：所述步骤3中的标准曲线用样品的最低浓度的2
‑
4倍(优选3倍)、所述步骤3中的标准曲线用样品的最高浓度的10％
±
2％和所述步骤3中的标准曲线用样品的最高浓度的75％
±
5％。
[0029]优选地，所述步骤S4中的质控样品的浓度包含3个梯度，分别是：所述步骤3中的标准曲线用样品的最低浓度的3倍、所述步骤3中的标准曲线用样品的最高浓度的10％和所述步骤3中的标准曲线用样品的最高浓度的75％。
[0030]在一些实施方式中，所述步骤S5中对目标组织样品所在的羧甲基纤维素钠包埋块的切片为平行于所述目标组织的纵切面进行的切片。
[0031]在一些实施方式中，所述步骤S7中的图像分析软件为AIDA图像分析软件。
[0032]本专利技术的有益效果有：
[0033]1、QWBA的应用，避免了纵向切片后的横向切片，节省实验时间，精准定位皮肤各层结构，直观观察到药物在皮肤角质层、表皮层、真皮层、皮下组织的分布情况。对于其他组织也有类似效果。
[0034]2、可以直观观察到药物的分布情况，避免采集时药物污染样品而导致的样品药物
浓度虚高，避免数据失真。即可以在步骤S7.4、用图像分析软件圈选分析区域时，排除切片外圈非角质层的区域的放射性残留物，从而有效避免了采集时药物污染样品而导致的样品药物浓度虚高，避免数据失真。
[0035]以下将结合附图对本专利技术的构思、具体结构及产生的技术效果作进一步说明，以充分地了解本专利技术的目的、特征和效果。
附图说明
[0036]图1是实施例1的标准曲线。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种组织中的药物分析方法，其特征在于，采用定量全身放射性自显影技术和组织包埋切片对离体组织中的药物分布情况进行定量分析检测。2.如权利要求1所述的组织中的药物分析方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、取用放射性标记的药物作用后的目标组织，冷冻定型；S2、目标组织样品包埋；S3、标准曲线用样品的制备：将
14
C
‑
葡萄糖用血浆配置至设定浓度后，加入羧甲基纤维素钠包埋块包裹的孔中，冷冻，包埋，得到所述标准曲线用样品；S4、质控样品的制备：将
14
C
‑
葡萄糖用血浆配置至设定浓度后，加入目标组织样品所在的羧甲基纤维素钠包埋块包裹的空白孔中，冷冻，包埋，得到所述质控样品；S5、切片与脱水；S6、曝光与显影：曝光后，用激光扫描成像仪扫描得到放射性自显影图像；S7、数据分析：使用图像分析软件对所述步骤S6得到的放射性自显影图像中的放射性浓度定量。3.如权利要求2所述的组织中的药物分析方法，其特征在于，所述步骤S7包括以下步骤：S7.1、用液体闪烁计数仪测定所述标准曲线用样品的放射性浓度，得到所述标准曲线用样品的理论值；用所述图像分析软件圈选所述标准曲线用样品的单位面积灰度值与所述标准曲线用样品的理论值进行配对定量，得到标准曲线和线性回归方程式：y＝a
×
x；y表示单位面积灰度值，x表示校正浓度，a表示系数；S7.2、用液体闪烁计数仪测定所述质控样品的放射性浓度，得到所述质控样品的理论值；用所述图像分析软件圈选所述质控样品的单位面积灰度值，根据所述步骤S7.1得到的线性回归方程式计算，得到所述质控样品的校正浓度；S7.3、标准曲线及质控样品的接受标准包括1)
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：李林，雷苇，张玲玲，
申请(专利权)人：南京美新诺医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：