一种TGFβ1抗原结合分子及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种TGFβ1抗原结合分子及其应用。所述TGFβ1抗原结合分子包括免疫球蛋白的单可变结构域，所述单可变结构域包含CDR1、CDR2和CDR3，所述CDR1包含如SEQ ID NO:2、5、8、11、14、17、28或32

【技术实现步骤摘要】
一种TGF
β
1抗原结合分子及其应用


[0001]本专利技术属于抗体药物领域，具体涉及一种TGFβ1抗原结合分子、多特异性抗原结合分子、药物组合物及其在制备诊断、预防和/或治疗癌症的药物中的应用和利用其免疫检测或者测定TGFβ1的方法，本专利技术还涉及与所述TGFβ1抗原结合分子和所述多特异性抗原结合分子相关的分离的核酸、重组表达载体、转化体及制备方法，以及包含所述TGFβ1抗原结合分子、所述多特异性抗原结合分子和/或所述药物组合物的试剂盒和套装药盒。

技术介绍

[0002]TGFβ(transforming growth factor beta，转化生长因子β)是一种多向性、多效性的细胞因子，以自分泌或旁分泌的方式通过细胞表面的受体信号途径调节细胞的增殖、分化、凋亡，对细胞外基质的合成、创伤的修复、免疫功能等有重要的调节作用。TGFβ有三种同分异构体TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3：TGFβ1在肾脏的表达最多，分布于肾小球、肾小管，活性最强；TGFβ2只表达于肾小球旁器；TGFβ3分布与TGFβ1相似，但数量较少，新合成的TGFβ以非共价键与潜活性相关蛋白形成没有活性的休眠复合体，储存在血小板的α颗粒中。在强酸、强碱、高温、纤溶酶、组织蛋白酶作用下，TGFβ脱去潜活性相关蛋白而活化，与靶细胞膜上的受体结合，从而发挥生物效应。
[0003]转化生长因子β1(TGFβ1)是具有负调控生长功能的细胞因子之一，它可使许多细胞生长发生停滞，其主要方式是通过阻止G1期细胞进入S期。还已知TGFβ1对不同的免疫细胞类型具有强烈的免疫抑制作用，包括抑制细胞毒性T淋巴细胞(Ranges等，J.Exp.Med.，166:991，1987；Espevik等，J.Immunol.，140:23121988)。
[0004]目前存在单抗类的临床产品GC1008，一种能够中和TGFβ的所有亚型的“泛”TGFβ抗体，其在临床开发中用于治疗恶性肿瘤和纤维化疾病，但在体内观察到明显的毒性，因此，开发新的有效针对TGFβ1的特异性单结构域抗体具有重要价值。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中靶向TGFβ1的抗体特亲和力不高、异性差、毒副作用较大及疗效欠佳的缺陷，本专利技术提供了一种TGFβ1抗原结合分子及其应用。所述TGFβ1抗原结合分子对人TGFβ1以外的TGFβ亚型几乎没有结合能力，对TGFβ1有较强的亲和力。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术提供的一个技术方案：一种TGFβ1抗原结合分子，所述TGFβ1抗原结合分子包括免疫球蛋白的单可变结构域，所述单可变结构域包含CDR1、CDR2和CDR3，所述CDR1包含如SEQ ID NO:2、5、8、11、14、17、28或32
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33中任一个所示的氨基酸序列，所述CDR2包含如SEQ ID NO:3、6、9、12、15和18中任一个所示的氨基酸序列，所述CDR3包含如SEQ ID NO:4、7、10、13、16、19、30、31、34和35中任一个所示的氨基酸序列。
[0007]在本专利技术一较佳实施方案中，所述单可变结构域包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:2
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4所示的CDR1
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CDR3；或所述单可变结构域包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:5
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7所示的CDR1
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CDR3；或所述单可变结构域包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:8
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10所示的CDR1
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CDR3；或所述单可变结构域包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:11
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13所示的CDR1
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CDR3；或所述单可变结构域包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:14
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16所示的CDR1
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CDR3；或所述单可变结构域包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:17
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19所示的CDR1
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CDR3；或所述单可变结构域包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:28、9和30所示的CDR1
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CDR3；或所述单可变结构域包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:29、9和31所示的CDR1
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CDR3；或所述单可变结构域包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:32、18和34所示的CDR1
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CDR3；或所述单可变结构域包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:33、18和35所示的CDR1
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CDR3。
[0008]在本专利技术一较佳实施方案中，所述单可变结构域包含如SEQ ID NO:20
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27和36
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39中任一个所示的氨基酸序列或其变体；其中，所述变体与其所源自的序列相比具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性并至少保持所述TGFβ1抗原结合分子的功能。
[0009]在本专利技术一较佳实施方案中，所述TGFβ1抗原结合分子的构型为VHH或HCAb。
[0010]在本专利技术一较佳实施方案中，所述HCAb中的Fc为hIgG1、hIgG2、hIgG3、hIgG4的Fc或其突变。优选地，所述Fc为hIgG1的Fc。更优选地，所述Fc的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0011]为解决上述技术问题，本专利技术提供的另一个技术方案为：一种多特异性抗原结合分子，其包含本专利技术所述的TGFβ1抗原结合分子。
[0012]为解决上述技术问题，本专利技术提供的另一个技术方案：一种分离的核酸，其编码如本专利技术所述的TGFβ1抗原结合分子。
[0013]为解决上述技术问题，本专利技术提供的另一个技术方案：一种重组表达载体，其包含如本专利技术所述的分离的核酸。
[0014]在本专利技术一较佳实施方案中，所述重组表达载体为质粒、粘粒、噬菌体、病毒载体或哺乳动物载体，所述病毒载体优选逆转录病毒载体、慢病毒载体、腺病毒载体或腺相关病毒载体，所述哺乳动物载体例如pcDNA3.4。
[0015]为解决上述技术问题，本专利技术提供的另一个技术方案：一种转化体，其包含如本专利技术所述的重组表达载体。优选地，所述转化体的宿主细胞为原核细胞或真核细胞。更优选地，所述真核细胞为酵母细胞或哺乳动物细胞；其中，所述哺乳动物细胞例如为HEK293细胞或CHO细胞。
[0016]为解决上述技术问题，本专利技术提供的另一个技术方案：一种TGFβ1抗原结合分子或多特异性抗原结合分子的制备方法，其包含以下步骤：
[0017]培养如本专利技术所述的转化体，从培养物中获得所述TGFβ1抗原结合分子或所述多特异性抗原结合分子。
[0018]为解决上述技术问题，本专利技术提供的另一个技术方案：一种药物组合物，其包含如本专利技术所述的TGFβ1抗原结合分子和/或如本专利技术所述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种TGFβ1抗原结合分子，所述TGFβ1抗原结合分子包括免疫球蛋白的单可变结构域，所述单可变结构域包含CDR1、CDR2和CDR3，所述CDR1包含如SEQ ID NO:2、5、8、11、14、17、28或32
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33中任一个所示的氨基酸序列，所述CDR2包含如SEQ ID NO:3、6、9、12、15和18中任一个所示的氨基酸序列，所述CDR3包含如SEQ ID NO:4、7、10、13、16、19、30、31、34和35中任一个所示的氨基酸序列。2.如权利要求1所述的TGFβ1抗原结合分子，其特征在于，所述单可变结构域包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:2
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4所示的CDR1
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CDR3；或所述单可变结构域包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:5
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7所示的CDR1
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CDR3；或所述单可变结构域包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:8
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10所示的CDR1
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CDR3；或所述单可变结构域包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:11
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13所示的CDR1
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CDR3；或所述单可变结构域包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:14
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16所示的CDR1
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CDR3；或所述单可变结构域包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:17
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19所示的CDR1
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CDR3；或所述单可变结构域包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:28、9和30所示的CDR1
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CDR3；或所述单可变结构域包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:29、9和31所示的CDR1
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CDR3；或所述单可变结构域包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:32、18和34所示的CDR1
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CDR3；或所述单可变结构域包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO:33、18和35所示的CDR1
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CDR3。3.如权利要求1或2中所述的TGFβ1抗原结合分子，其特征在于，所述单可变结构域包含如SEQ ID NO:20
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27和36
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39中任一所示的氨基酸序列或其变体；其中，所述变体与其所源自的序列相比具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性并至少保持所述TGFβ1抗原结合分子的功能。4.如权利要求1
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3中任一项的TGFβ1抗原结合分子，其特征在于，所述TGFβ1抗原结合分子的构型为VHH或HCAb；优选地，所述HCAb中的Fc为hIgG1、hIgG2、hIgG3、hIgG4的Fc或其突变；更优选地，所述Fc为hIgG1的Fc；进一步更优选地，所述Fc的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。5.一种多特异性抗原结合分子，其包含如权利要求1
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【专利技术属性】
技术研发人员：郎国竣，孔超，谭永聪，刘亚茹，胡宇豪，闫鑫甜，
申请(专利权)人：三优生物医药上海有限公司，
类型：发明
国别省市：