杂交瘤细胞hEGF-3A8及其产生的单克隆抗体和应用制造技术

本发明专利技术涉及一种杂交瘤细胞hEGF

【技术实现步骤摘要】
杂交瘤细胞hEGF
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3A8及其产生的单克隆抗体和应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种杂交瘤细胞hEGF
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3A8及其产生的单克隆抗体和应用。

技术介绍

[0002]人表皮生长因子(hEGF)是一种强有力的细胞分裂促进因子，临床上可用于烧烫伤、溃疡、各类创伤以及角膜损伤等的治疗。并且，血清中表皮生长因子的水平，与癌基因的表达也存在相关性。
[0003]当前，人表皮生长因子的来源，主要通过基因重组技术，利用大肠杆菌、酵母菌等生产发酵获得。重组人表皮生长因子(rhEGF)作为小分子多肽类物质，能够应用的关键所在，是它的高纯度、高活性。
[0004]早在1988年，瑞士成功上市了商品名为“Gentel”的rhEGF用于治疗眼科疾病。在所有生物技术产品的生产过程中，分离纯化加工技术成为重要的关键步骤，是生物制品产业的制约环节，因此生物大分子药物的分离纯化制约着其产业化，基因工程药物的分离纯化后处理可占整个生产成本的70％以上。
[0005]Wong等人专利报道了从E.co本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种杂交瘤细胞hEGF
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3A8，其特征在于，保藏编号为CCTCC NO:C2021301。2.一种如权利要求1所述杂交瘤细胞hEGF
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3A8的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：(1)制备重组人表皮生长因子抗原工作液；(2)采用重组人表皮生长因子抗原工作液，免疫6～8周龄的雌性小鼠，每次免疫的间隔时间为14天，8次免疫后断尾取血测定效价，选择效价大于等于1:6400的小鼠准备融合；(3)取效价符合标准的小鼠的脾细胞和小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞进行融合，间接ELISA法测定培养上清，选取阳性孔的杂交瘤细胞，通过有限稀释法对阳性孔进行亚克隆，直至建立产生单一抗人表皮生长因子的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。3.一种由权利要求1所述杂交瘤细胞hEGF
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3A8分泌的单克隆抗体。4.一种如权利要求3所述的单克隆抗体的制备方法，其特征在于，选取大于12周的雌性BALB/c小鼠，采用杂交瘤细胞hEGF
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3A8在体内诱生腹水，并通过Protein G层析柱纯化腹水，获得重组人表皮生长因子的单克隆抗体。5.一种如权利要求3所述的单克隆抗体在纯化重组人表皮生长因子中的应用。6.一种如权利要求3所述的单克隆抗体在亲和层析纯化重组人表皮生长因子中的应用。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，其包括如下步骤：(A)单克隆抗体的预处理(a)1～30mg/mL的单克隆抗体，4℃，用偶联缓冲液透析24h，期间每4～6h换液一次，至少换液4次，透析液的体积应500倍于抗体溶液；(b)4℃，12000rpm离心30分钟，收集保存上清；(c)在A
280
测定透析后抗体的蛋白质浓度及抗体的初始OD
280始
；(d)用偶联缓冲液将...

【专利技术属性】
技术研发人员：张小兵，邸禄芹，刘鑫楠，李亚璞，程华，裴晓萌，孙劲冲，吴萌，
申请(专利权)人：河北省科学院生物研究所，
类型：发明
国别省市：