核酸提取试剂和核酸提取方法技术

本发明专利技术属于核酸提取领域，涉及核酸提取试剂和核酸提取方法。具体地说，本发明专利技术涉及包括三羟基甲基氨基甲烷、氯化锂、NaSCN、甘油和十二烷基硫酸锂的一种裂解试剂，包括硫酸铝钾、醋酸钠和醋酸的抑制剂去除试剂以及由其制得的相应缓冲液及其在环境样品DNA提取中的应用。本发明专利技术还涉及采用所述裂解试剂和/或抑制剂去除试剂的核酸提取方法。本发明专利技术所提供的核酸提取试剂操作简单、快捷，可以针对不同的环境样本中微生物DNA实现高质量的提取。境样本中微生物DNA实现高质量的提取。境样本中微生物DNA实现高质量的提取。

【技术实现步骤摘要】
核酸提取试剂和核酸提取方法


[0001]本专利技术涉核酸提取试剂领域，尤其涉及用于提取来自环境中的生物样本，特别是含有微生物的样本中的核酸的提取或检测试剂。

技术介绍

[0002]环境样本中的微生物群落研究需要先提取其中生物样本中的核酸，这类样本的核酸提取和分析是极具挑战的，这主要是有以下几个原因造成的。1)环境样本如土壤、粪便、堆肥、污泥、废水等样本中包含多种PCR抑制剂，例如：重金属、多糖、多酚、胆酸盐、腐殖酸等极为少量的存在就会强烈地抑制PCR反应。例如土壤样本中富含了腐殖酸、富里酸和胡敏素，常规的提取土壤微生物的方法DNA的溶液是黄褐色的就是上述物质的污染。2)土壤、粪便和废水等环境样本中微生物相对于单纯培养的微生物更难以裂解，常规的提取方法获得了微生物细胞裂解率低，因此所获得DNA不能反映原始样品中的物种丰度。
[0003]因此，高度需要高效和实际的基础研究工具及试剂，以确保微生物群落的组成的精确表征、研究微生物群落内相互依赖的功能，并允许操作微生物群落内以及微生物群落与其宿主之间的相互作用。迫切需要下一代工具，例如用于微生物本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种裂解试剂，其特征在于，所述裂解试剂包括如下组分：三羟基甲基氨基甲烷、氯化锂、NaSCN、甘油和十二烷基硫酸锂。2.一种裂解缓冲液，其特征在于：所述裂解缓冲液由权利要求1所述的试剂配制得到；优选的是，所述裂解缓冲液包含50
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500mM的三羟基甲基氨基甲烷、100
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500mM的氯化锂、1
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5M的NaSCN、质量体积百分比为0.5
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20％的甘油、0.1
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5％的十二烷基硫酸锂，并且pH为8.0
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12.5；更优选的是，所述裂解缓冲液包含100
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200mM的三羟基甲基氨基甲烷、200
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300mM的氯化锂、2
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3M的NaSCN、质量体积比为1
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5％的甘油、0.5
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2％的十二烷基硫酸锂，并且pH为8.5
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11.5；进一步优选的是，所述裂解缓冲液包含200mM三羟基甲基氨基甲烷，200mM氯化锂，3M NaSCN，质量体积比为5％甘油，2％十二烷基硫酸锂，并且pH为11.0。3.一种抑制剂去除试剂，其特征在于，所述抑制剂去除包括如下组分：硫酸铝钾、醋酸钠和醋酸。4.一种抑制剂去除缓冲液，其特征在于：所述抑制剂去除缓冲液由权利要求3所述的抑制剂去除试剂配制得到；优选的是，所述抑制剂去除缓冲液包含0.1
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2M硫酸铝钾、0.5
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5M醋酸钠，并使用醋酸将pH调节至pH 3.5
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7.5；更优选的是，所述抑制剂去除缓冲液包含0.2
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1M硫酸铝钾、0.5
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2M醋酸钠和并使用醋酸将pH调节至pH 4
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6；进一步优选的是，所述抑制剂去除缓冲液包含0.5M硫酸铝钾、2M醋酸钠，并使用醋酸将pH调节至pH 4。5.一种核酸提取方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1：利用研磨珠对环境样本进行机械裂解，并利用裂解缓冲液对所述环境样本进行化学裂解，由此得到粗裂解物；S2：将所述粗裂解物进行离心，获得上清液，向所述上清液中加入抑制剂去除缓冲液以去除所述环境样本包含的PCR抑制剂，离心获得粗DNA产物；S3：使用磁性微球和结合缓冲液对所述粗DNA产物中的DNA进行结合绑定，得到结合DNA产物；S4：使用洗涤液进行清洗，得到清洗DNA产物；S5：使用TE缓冲液对所述清洗DNA产物进行加热洗脱，得到最终的DNA。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在步骤S1中：所述研磨珠为0.1
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3mm的氧化锆珠、0.1
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5mm的玻璃珠、0.2
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1.5mm的石榴石、0.2
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0.5mm的碳化硅、0.3
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4.5mm的金属球和/或其组合；优选的是，所述研磨珠为0.1
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3mm的氧化锆珠、0.1
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2mm的玻璃珠、0.3
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1.0mm的石榴石和/或其组合；更优选的是，所述研磨珠为0.1
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【专利技术属性】
技术研发人员：邹永龙，张佳斌，田付友，曲峰，何宗顺，
申请(专利权)人：苏州白垩纪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：