具有扩展的细胞培养嗜性和组织嗜性的减毒的IBV制造技术

本发明专利技术涉及在登录号DPS RE RSCIC 16下保藏于IZSLER的BVR的IBV(传染性支气管炎病毒)、其任何后代IBV以及具有保藏的IBV的所有鉴定特性的任何IBV。进一步地，本发明专利技术涉及包含所述保藏的IBV的免疫原性组合物。保藏的IBV的免疫原性组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有扩展的细胞培养嗜性和组织嗜性的减毒的IBV
[0001]序列表
[0002]本申请含有依照37C.F.R.1.821
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1.825的序列表。本申请随附的序列表在此整体引入作为参考。

技术介绍

[0003]禽冠状病毒传染性支气管炎病毒(IBV)是网巢病毒目(Nidovirales)，冠状病毒科(Coronaviridae)的原型丙型冠状病毒。传染性支气管炎病毒感染鸡的上呼吸道上皮，引起呼吸系统疾病，通常并发于继发性细菌性病原体(Cook等人2012.Avian Pathol.41:239
‑
250)。一些IBV毒株另外影响肾小管、输卵管和部分胃肠道，导致这些器官系统中的病理损害和临床体征。该病毒具有在商品鸡和散养鸡两者中的世界范围的存在。由于其高基因组变异性，IBV被区分为广泛多样的基因型、血清型和保护型(protectotype)。IBV目前被视为家禽业中经济上最相关的病毒病原体之一。
[0004]传染性支气管炎病毒是具有27.6kb的正义单链RNA基因组的有包膜病毒(Cavanagh 2007.Vet.Res.38:281
‑
297)。病毒基因组的前三分之二包含大编码区(也指定为基因1)，分成两个开放读码框1a和1b，其编码涉及RNA复制、编辑和转录的至少15种非结构蛋白。病毒基因组的后三分之一编码结构蛋白：刺突蛋白(S，由基因2编码)、包膜蛋白(E，由基因3c编码)、膜蛋白(M，由基因4编码)、以及核衣壳蛋白(N，由基因6编码)。蛋白S、E和M是病毒包膜的部分，而蛋白N连同病毒RNA一起形成核糖核蛋白核心。冠状病毒刺突蛋白决定宿主物种的嗜性(Kuo等人2000.J.Virol.74:1393
‑
1406)。它是一种二聚体或三聚体跨膜蛋白，其被蛋白酶解切割成两个亚基，S1和S2。糖基化的S1结构域形成刺突蛋白的
‘
头部
’
，并且含有与宿主细胞表面上的2,3
‑
连接的唾液酸相互作用的受体结合结构域(Promkuntod等人2014.Virology.448:26
‑
32)。S2结构域是胞外结构域的剩余部分(
‘
茎部
’
)、跨膜结构域和定位于细胞质中的胞内结构域。
[0005]迄今为止广泛使用的减毒活IBV疫苗株H52和H120是通过Massachusetts血清型IBV毒株在含胚鸡蛋中的连续传代，于二十世纪六十年代在荷兰开发的(Bijlenga等人2004；Avian Pathol.33:550
‑
557)。所述疫苗株也必须在含胚鸡蛋中繁殖用于疫苗生产。当今，IBV疫苗(灭活疫苗和活疫苗两者)仍然在含胚鸡蛋中繁殖，这是麻烦且昂贵的。
[0006]迄今为止描述的唯一适应细胞系的IBV是IBV毒株Beaudette，其在Vero和BHK细胞中有效地复制。Casais等人2003(J.Virol.77；9084
‑
9089)通过使用Beaudette刺突的胞外结构域序列生成重组IBV，显示了Beaudette的S蛋白是细胞系嗜性的决定因素，其能够将这种扩展的细胞系嗜性转移到另一种IBV(M41)。Fang等人2005(Biochemical and Biophysical Research Communication 336；第417至423页)公开了Beaudette对于在Vero细胞中繁殖的适应性导致49个氨基酸修饰，其中26个定位于刺突蛋白内。然而，具有Beaudette刺突的重组IBV不适合作为疫苗。Ellis等人2018(J.Virol.92(23))描述了具有嵌合刺突的重组Beaudette构建体并不赋予针对S1同源攻击的足够保护，所述嵌合刺突具有与Beaudette刺突S2亚基组合的来自M41或QX的异源S1亚基。另外，Beaudette野生型不像
属于Massachusetts血清型的其它获得许可的疫苗那样提供针对同源攻击的保护(Hodgson等人2004:J Virol 78:13804
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13811或Geilhausen等人1973:Archiv f
ü
r die gesamte Virusforschung 40:285
‑
290)。
[0007]总之，通过将刺突蛋白交换为异源Beaudette刺突蛋白(重组IBV)，提供具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性的IBV疫苗并不导致提供足够功效的IBV疫苗，并且使用Beaudette刺突序列将局限于针对Massachusetts血清型毒株攻击的保护且缺少针对进一步基因型的交叉保护。进一步地，与现有技术中公开的重组IBV相比，本专利技术的IBV不是GMO(遗传修饰的生物)。
[0008]因而，需要具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性的有效IBV疫苗用于有效生产。优选地，具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性的此类新IBV疫苗是非重组疫苗。
具体实施方式
[0009]在描述本专利技术的方面之前，必须注意，如本文和所附权利要求中使用的，单数形式“一个”、“一种”和“该/所述”包括复数所指物，除非上下文另有明确说明。因此，例如，提及“一种抗原”包括多种抗原，提及“病毒”是提及一种或多种病毒及其本领域技术人员已知的等价物，等等。除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语都具有与本专利技术所属领域的普通技术人员通常理解相同的含义。尽管现在描述了优选的方法、装置和材料，但在本专利技术的实践或测试中可以使用与本文描述的相似或等价的任何方法和材料。本文提到的所有出版物都引入本文作为参考，目的是描述且公开如出版物中报道的可以与本专利技术结合使用的细胞系、载体和方法。本文的任何内容均不应被解释为承认本专利技术无权因在先专利技术而先于此类公开内容。
[0010]物质的组成
[0011]本专利技术解决了现有技术中固有的问题，并且提供了目前技术水平中的明显进步。
[0012]一般地，本专利技术提供了在登录号DPS RE RSCIC 16下保藏于IZSLER的BVR的IBV(传染性支气管炎病毒)、其任何后代IBV或具有在DPS RE RSCIC 16下保藏的IBV的所有鉴定特性的任何IBV。
[0013]进一步地，本专利技术提供了在登录号DPS RE RSCIC 16下保藏于IZSLER的BVR的IBV(传染性支气管炎病毒)、其具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性且针对强毒M41攻击是保护性的任何减毒的后代IBV、或具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性且针对强毒M41攻击是保护性的任何减毒的IBV。
[0014]有利地，实验数据显示了保藏的毒株及其后代具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性，它们能够在不同的细胞系和组织细胞中感染和/或复制。令人惊讶的是，保藏的毒株及其后代在至少数次传代之前仍维持疫苗功效，但具有改善的安全性。
[0015]保藏的IBV(IB66HP)毒株根据布达佩斯条约在登录号DPS RE RSCIC 16下保藏于本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种在登录号DPS RE RSCIC 16下保藏于IZSLER的BVR的IBV(传染性支气管炎病毒)、其任何后代IBV或具有在DPS RE RSCIC 16下保藏的IBV的所有鉴定特性的任何IBV。2.一种在登录号DPS RE RSCIC 16下保藏于IZSLER的BVR的IBV(传染性支气管炎病毒)、其具有扩展的细胞培养嗜性或组织嗜性且针对强毒M41攻击是保护性的任何减毒的后代IBV、或具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性且针对强毒M41攻击是保护性的任何减毒的IBV。3.权利要求1或2的IBV，其中所述IBV是减毒的。4.权利要求1至3中任一项的IBV，其中所述IBV是非重组的。5.权利要求1或4中任一项的IBV，其中所述IBV是Massachusetts基因型或血清型。6.权利要求1或5中任一项的IBV，其中所述IBV具有扩展的细胞嗜性或组织嗜性。7.权利要求1至6中任一项的IBV，其中所述IBV在选自以下列表的细胞系或细胞中感染和/或复制：来自肺或肝脏的原代鸡胚细胞或者原代鸡成纤维细胞、鸡胚成纤维细胞系、鸭胚干细胞系、人胚肾细胞系、幼仓鼠肾细胞系、非洲绿猴肾细胞系、兔肾细胞系、犬肾细胞系、鸡肝细胞系、牛肾细胞系、猪肾细胞系和昆虫细胞系。8.权利要求1至7中任一项的IBV，其中所述IBV在选自以下列表的至少一种细胞系中感染和/或复制：DF
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1(Douglas Foster)、EB66(鸭胚干细胞系)、PBS
‑
12、PBS
‑
12SF(无血清PBS
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12)、BHK21(幼仓鼠肾)、...

【专利技术属性】
技术研发人员：E，
申请(专利权)人：勃林格殷格翰动物保健有限公司，
类型：发明
国别省市：