一种多重耐药嗜温鞘氨醇杆菌噬菌体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种多重耐药嗜温鞘氨醇杆菌噬菌体及其应用，该噬菌体拉丁名为Sphingobacterium thalpophilum phage,被命名为PW84，噬菌体PW84被保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏日期为2021年9月9日，保藏编号为CCTCC NO：M 20211149；该噬菌体对嗜温鞘氨醇杆菌有强烈的特异性裂解作用，可由其宿主菌共培养进行大量繁殖获得；该噬菌体在环境中有较强的生存适应性，一定滴度的该噬菌体在4≤pH≤12、4≤T≤80℃条件下依然保持一定活性；本方案噬菌体可以应用于如污水、农田、土壤等自然环境以及实验室、养殖场等室内环境中嗜温鞘氨醇杆菌的感染，有效杀灭和防控多重耐药嗜温鞘氨醇杆菌的增殖与传播，相比抗生素疗法，具有安全高效且低成本的优势。具有安全高效且低成本的优势。具有安全高效且低成本的优势。

【技术实现步骤摘要】
一种多重耐药嗜温鞘氨醇杆菌噬菌体及其应用


[0001]本专利技术涉及生物工程
，尤其涉及多重耐药嗜温鞘氨醇杆菌噬菌体 及其应用。

技术介绍

[0002]鞘氨醇杆菌属(Sphingobacterium)创立于1983年，属于好氧或兼性厌氧 革兰氏阴性杆菌，包括3个种：食醇鞘氨醇杆菌(S.spiritivorum)、多食鞘氨醇杆 菌(S.multivorum)及水氏鞘氨醇杆菌(S.mizutae)。1992年报道了嗜温鞘氨醇杆菌 (S.thalpophilum)等5个种。据文献报道，鞘氨醇杆菌感染大多数是医院感染， 偶尔也通过接触土壤间接感染。目前发现的绝大多数鞘氨醇杆菌分离自临床样 本，其中嗜温鞘氨醇杆菌(S.thalpophilum)来自人体血液、尿液、创伤和脓肿 等。由于临床上大量使用抗生素治疗细菌感染，导致耐药菌数量日益剧增，从 临床上分离的嗜温鞘氨醇杆菌菌株大都对氨苄青霉素、头孢噻吩、丁胺卡那霉 素、庆大霉素、卡那霉素、氯霉素、四环素耐药等许多常用的抗生素具有内在 抗性。据报道，某些鞘氨醇杆菌还可以在一些防腐剂和消毒剂中生长。因此， 开发新的抗菌剂对治疗临床和环境中多重耐药嗜温鞘氨醇杆菌的感染是十分必 要的。
[0003]噬菌体(bacteriophage，phage)是一类病毒的总称，可感染细菌、真菌和支 原体等微生物。噬菌体是地球上数量最多的微生物，广泛存在于海洋、土壤以 及污水等自然环境中。因噬菌体侵染裂解宿主菌有较高的专一性且有较强的自 我繁殖能力，不受细菌耐药性的影响，对人类、动物和植物无害，被视为细菌 的“天然杀手”，因此噬菌体疗法成为另一种治疗细菌尤其是耐药菌感染的有效 手段，所以，针对多重耐药嗜温鞘氨醇杆菌的噬菌体研究是非常具有现实意义 的课题。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提出一种易于应用实施、环保高效且具有经 济效益和市场前景的多重耐药嗜温鞘氨醇杆菌噬菌体及其应用。
[0005]为了实现上述的技术目的，本专利技术所采用的技术方案为：
[0006]一种多重耐药嗜温鞘氨醇杆菌噬菌体，其拉丁名为 Sphingobacteriumthalpophilumphage，命名为PW84，该噬菌体PW84 已保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCCNO：M 20211149，保藏地址为中国武汉武汉大学；保藏日期为2021 年9月9日。
[0007]进一步，在电镜观察下，所述噬菌体PW84形态包括头部和尾部，其头部 直径为70～80nm，尾部直径为20～30nm；具体的，其头部直径为75nm，尾 部直径为25nm。
[0008]进一步，所述噬菌体PW84在4～80℃，pH为4.0～12.0的条件下对嗜温 鞘氨醇杆菌具有裂解活性。
[0009]进一步，所述噬菌体PW84对1％体积分数的氯仿具有耐受性。
[0010]进一步，所述噬菌体PW84的感染复数(MOI)为0.001。
[0011]进一步，所述嗜温鞘氨醇杆菌对氯霉素、卡那霉素、阿莫西林、硫酸链霉 素、庆大霉素、红霉素中的一种以上具有耐药性。
[0012]进一步，所述噬菌体PW84的潜伏期为15min。
[0013]进一步，所述噬菌体PW84保存方法为将噬菌体裂解液与50％甘油按照1:1 的比例混匀，然后置于
‑
20℃或者
‑
80℃保存。
[0014]基于上述的噬菌体方案，本专利技术还提供一种污水抑菌或杀菌药物，其包括 上述所述的多重耐药嗜温鞘氨醇杆菌噬菌体。
[0015]基于上述的噬菌体方案，本专利技术一种食品抑菌或杀菌药物，其包括上述所 述的多重耐药嗜温鞘氨醇杆菌噬菌体。
[0016]采用上述的技术方案，本专利技术与现有技术相比，其具有的有益效果为：本 方案噬菌体PW84可降低嗜温鞘氨醇杆菌的丰度，该噬菌体对多重耐药嗜温鞘 氨醇杆菌有强烈杀菌效果，可有效防控耐药菌在环境中的增殖与传播，另外， 本方案噬菌体PW84在环境中有较强的生存适应性，一定滴度的该噬菌体在4 ≤pH≤12、4≤T≤80℃条件下依然保持一定活性，其对嗜温鞘氨醇杆菌有强烈 的特异性裂解作用，可有效杀灭和防控多重耐药嗜温鞘氨醇杆菌的增殖与传播； 本方案噬菌体不仅具有应用操作简便、易于实施、适用的理化条件范围广的特 点，且还具有环保高效，市场前景好的优点。
附图说明
[0017]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施 例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述 中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付 出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0018]图1为噬菌体PW84的噬菌斑图；
[0019]图2为噬菌体PW84的电镜表征图；
[0020]图3为噬菌体PW84的感染复数表征图；
[0021]图4为噬菌体PW84的一步生长曲线表征图；
[0022]图5为噬菌体PW84的热稳定性表征图；
[0023]图6为噬菌体PW84的酸碱敏感性表征图；
[0024]图7为噬菌体PW84在污水中的抑菌效果表征图；
[0025]图8为噬菌体PW84在豆浆中的抑菌效果表征图。
具体实施方式
[0026]下面结合附图和实施例，对本专利技术作进一步的详细描述。特别指出的是， 以下实施例仅用于说明本专利技术，但不对本专利技术的范围进行限定。同样的，以下 实施例仅为本专利技术的部分实施例而非全部实施例，本领域普通技术人员在没有 作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0027]实施例1宿主嗜温鞘氨醇杆菌的分离鉴定及耐药性测定
[0028]S01、宿主菌分离鉴定：土壤样品来自福建省福州市福建农林大学，取2g 新鲜土壤于50mL锥形瓶中，加入18mL超纯水，在37℃，170rpm/min的条件 下震荡处理1h，然后静置
30min，取上清液通过0.45μm的无菌滤膜处理，继 而将滤液稀释至10
‑5，再取100μL涂布在含2％琼脂的LB固体平板上，令其在 37℃培养48h，再挑取平板上呈黄色、表面光滑、形态均匀和边缘整齐的单菌 落接种于5mL液体LB中，然后在37℃、170r/min的条件下振荡培养12h， 再用接种环蘸取菌液在上述平板上划线，继而以37℃的温度条件进行培养24h, 再继续挑取形态一致的单菌接种液体LB培养，以上步骤重复3次进行纯化宿 主菌；最后菌液通过16s RNA分子鉴定。
[0029]S02、宿主菌耐药性鉴定：选用常用的9种抗生素进行鉴定，其包括四环素、 氯霉素、氨苄青霉素、卡那霉素、阿莫西林、硫酸链霉素、庆大霉素、红霉素、 利福平。
[0030]取100uL宿主菌液在含有抗生素的固体LB平板上涂板，37℃过夜培养， 观察宿主菌生长情况，重复3次，确定其耐药性；所得耐药性检测结果如表1 所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多重耐药嗜温鞘氨醇杆菌噬菌体，其特征在于，其拉丁名为Sphingobacterium thalpophilum phage，命名为PW84，该噬菌体PW84已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 20211149，保藏日期为2021年9月9日。2.如权利要求1所述的多重耐药嗜温鞘氨醇杆菌噬菌体，其特征在于，在电镜观察下，所述噬菌体PW84形态包括头部和尾部，其头部直径为70～80nm，尾部直径为20～30nm。3.如权利要求1所述的多重耐药嗜温鞘氨醇杆菌噬菌体，其特征在于，所述噬菌体PW84在4～80℃，pH为4.0～12.0的条件下对嗜温鞘氨醇杆菌具有裂解活性。4.如权利要求1所述的多重耐药嗜温鞘氨醇杆菌噬菌体，其特征在于，所述噬菌体PW84对1％体积分数的氯仿具有耐受性。5.如权利要求1所述的多重耐药嗜温鞘氨醇杆菌噬菌体，...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖汉鹏，文畅，卢诗韵，周顺桂，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：