基因标志物联合AFU在原发性肝癌诊断试剂盒制备中的应用制造技术

本发明专利技术公开了基因标志物联合AFU在原发性肝癌诊断试剂盒制备中的应用。本发明专利技术通过联合LINC02154与α

【技术实现步骤摘要】
基因标志物联合AFU在原发性肝癌诊断试剂盒制备中的应用


[0001]本专利技术属于疾病诊断领域，具体涉及基因标志物联合AFU在原发性肝癌诊断试剂盒制备中的应用。

技术介绍

[0002]原发性肝癌作为临床较为常见的恶性肿瘤，其源自肝内胆管上皮细胞或肝细胞，其病因及发病机制还不是很清楚，有报道称，可能与肝硬化、病毒性肝炎、饮食、环境等因素有关。原发性肝癌患者具有病情进展快、预后差等特点，多数患者就诊时已经进入中晚期，丧失了手术切除机会，因此早期诊断、早期治疗是提高患者生活质量、延长生存期的重要方法。
[0003]α
‑
L
‑
岩藻糖苷酶(AFU)作为一种糖蛋白，其由胚胎肝细胞合成，胎儿出生后浓度降低，数月后降至正常，健康成年人由于肝细胞丧失其合成能力，故血清AFP含量极低，但肝癌患者含量却很高，并与病情进展呈正比，常被用于原发性肝癌的早期筛查方法，但准确率不高。

技术实现思路

[0004]本专利技术为了克服现有技术的不足，提供基因标志物联合AFU在原发性肝癌诊断试剂盒制备中的应用。
[0005]本专利技术技术方案如下：
[0006]LINC02154联合AFU在制备原发性肝癌诊断的血清检测试剂盒中的应用。AFU单独用于原发性肝癌诊断时的ROC曲线下面积为0.761，LINC02154联合AFU用于原发性肝癌诊断时的ROC曲线下面积为0.915，诊断效能显著提高。
[0007]一种原发性肝癌诊断的血清检测试剂盒，含有检测血清中LINC02154和AFU的试剂。
[0008]有益技术效果：
[0009]本专利技术通过联合LINC02154与AFU提高了原发性肝癌筛查准确率，克服了AFU单独用于原发性肝癌筛查准确率不高的不足。因此，LINC02154可以联合AFU用于制备原发性肝癌诊断的血清检测试剂盒。
附图说明
[0010]图1为训练集中AFU单独诊断区分原发性肝癌和非原发性肝癌的ROC曲线；
[0011]图2为训练集中LINC02154单独诊断区分原发性肝癌和非原发性肝癌的ROC曲线；
[0012]图3为训练集中AFU联合LINC02154诊断区分原发性肝癌和非原发性肝癌的ROC曲线。
具体实施方式
[0013]下面通过具体的实施例详细介绍本专利技术实质性内容，但不能以此限定本专利技术的保护范围。
[0014]一、试验材料
[0015]总RNA提取试剂盒购自美国Invitrogen公司。反转录试剂盒购自Thermo Fisher Scientific。RT
‑
PCR测量仪购自德国Qiagen公司。RT
‑
PCR引物由吉满生物科技(上海)有限公司合成。
[0016]二、试验方法
[0017]1、一般资料
[0018]原发性肝癌样本：选取南京医科大学第一附属医院2018～2020年病理确诊为原发性肝癌的患者135例；非原发性肝癌样本：选取南京医科大学第一附属医院2018～2020年体检的健康人45例、确诊为乙肝肝炎的患者45例、确诊为乙肝肝硬化的患者45例共同组成非原发性肝癌样本135例。两组样本的年龄分布具有高度相似性，P＞0.05，无统计学意义。
[0019]入组标准：
①
经计算机体层摄影(computedtomography，CT)等影像学检查或病理学检查证实；
②
检测前未行放疗、化疗等抗肿瘤治疗；
③
年龄≥18岁。排除标准：
①
合并其他部位恶性肿瘤；
②
妊娠期或哺乳期妇女；
③
合并免疫系统疾病、血液系统疾病等。
[0020]2、样本分组
[0021]训练集：分别从原发性肝癌样本和非原发性肝癌样本中随机选取45例样本组成训练集，总样本数为90例；验证集：剩余的原发性肝癌样本和非原发性肝癌样本组成验证集，总样本数为180例。
[0022]3、血清AFU测定
[0023]空腹情况下抽取5mL静脉血，以2500r/min的转速进行离心处理5min，分离血清，使用罗氏电化学发光免疫分析仪以及配套的原装试剂，严格按照说明书测定AFU浓度。
[0024]4、血清LINC02154相对表达量测定
[0025]空腹情况下抽取5mL静脉血，以2500r/min的转速进行离心处理5min，分离血清，用总RNA提取试剂盒提取总RNA。取2μg总RNA于反转录试剂盒中合成cDNA。取cDNA置于PCR扩增仪中扩增，反应条件为94℃15min预变性，60℃30s退火，72℃30s延伸，40个循环。采用相对定量法，测定目的基因、GAPDH的PCR产物的Ct值，以2
‑
ΔΔCt
计算目的基因相对表达量，各设3个复孔，实验重复3次。
[0026]LINC02154正向引物序列：5
’‑
GGTTGAGGAACTGTGCCTTGGAG
‑3’
；
[0027]LINC02154反向引物序列：5
’‑
GCCGGAGTTGCAGTGATGGAC
‑3’
；
[0028]GAPDH正向引物序列：5
’‑
TGATGACATCAAGAAGGTGGTGAAG
‑3’
；
[0029]GAPDH反向引物序列：5
’‑
TCCTTGGAGGCCCAGTGGGCCAT
‑3’
。
[0030]5、统计学处理
[0031]采用SPSS 19.0处理数据，所有计量资料均进行正态和方差齐性检验，符合正态分布的数据用均值
±
偏差表示，不符合正态和方差齐性检验的计量资料采用非参数检验，组间两两比较采用t检验。采用SPSS 19.0绘制血清AFU单独和联合血清LINC02154诊断区分原发性肝癌和非原发性肝癌的受试者工作特征(ROC)曲线，并计算曲线下面积(AUC)，并利用AUC评估AFU或AFU联合LINC02154对原发性肝癌和非原发性肝癌的诊断区分价值。AUC≤0.5
为无诊断价值，0.5＜AUC≤0.7为诊断准确性较低，0.7＜AUC≤0.9为诊断准确性较好，AUC≥0.9为诊断准确性最高，P＜0.05为差异有统计学意义。
[0032]三、试验结果
[0033]1、AFU和LINC02154在原发性肝癌和非原发性肝癌血清中含量比较
[0034]训练集中，AFU和LINC02154在原发性肝癌和非原发性肝癌血清中含量如表1所示，与非原发性肝癌相比，AFU和LINC02154在原发性肝癌患者血清中的含量均显著升高。
[0035]表1 AFU和LINC02154在原发性肝癌和非原发性肝癌血清中含量
[0036] AFU(U/L)LINC02154原发性肝癌63.05
±
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.LINC02154联合AFU在制备原发性肝癌诊断的血清检测试剂盒中的应用。2.一种原发性肝癌...

【专利技术属性】
技术研发人员：ꢀ五一IntClC一二Q一六八八六，
申请(专利权)人：南京凡亦达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：