一种抗皮肤光老化并增强皮肤弹性的酶解肽及在相应化妆品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗皮肤光老化并增强皮肤弹性的酶解肽及在相应化妆品中的应用。本发明专利技术基于藜芦种子蛋白获得了一种分子量适中、较为均匀的酶解肽。活性试验证明，该酶解肽明显不但可以剂量依赖性地提高光老化HaCaT细胞的细胞活力和抗氧化能力，提高HaCaT细胞的抗光老化能力，而且可以剂量依赖性地提高人真皮成纤维细胞中弹性蛋白的表达水平，进而增强皮肤弹性。该酶解肽可以用于制备抗皮肤光老化并增强皮肤弹性的化妆品。强皮肤弹性的化妆品。强皮肤弹性的化妆品。

【技术实现步骤摘要】
一种抗皮肤光老化并增强皮肤弹性的酶解肽及在相应化妆品中的应用


[0001]本专利技术属于化妆品领域，涉及一种抗皮肤光老化并增强皮肤弹性的酶解肽及在相应化妆品中的应用。

技术介绍

[0002]皮肤是人体最大的器官，在保护、调节体温、感觉、分泌、排泄和免疫等多方面发挥作用。当皮肤器官功能出现衰老性损伤、难以适应内外环境变化、发生色泽及弹性下降的情况时，被称为皮肤老化。皮肤老化是人体衰老过程中的一个伴随症状，也是皮肤众多健康问题中最受关注的一个现象。其中，紫外辐射导致的皮肤光老化是导致皮肤老化的主要外因，80％以上的面部老化均由光老化引起。
[0003]皮肤弹性的保持对皮肤年轻态具有重要意义，提高皮肤弹性可以有效抑制皱纹进而显得年轻。皮肤弹性的保持与真皮层细胞中的弹性蛋白表达水平关系显著，可以说真皮层细胞中弹性蛋白表达水平的高低基本决定了皮肤的弹性大小。
[0004]酶解肽因为分子量比蛋白小很多，且相比氨基酸维持了一定的高级结构，具有既容易吸收又活性高的优点，在医药化工领域广泛使用。但是，既能抗皮肤光老化又能增强皮肤弹性的酶解肽的报道较少，开发应用前景广阔。
[0005]藜芦为百合科藜芦属的植物，在化妆品领域可谓宝藏植物。最为广泛熟知的是其所含的白藜芦醇，不仅具有抗氧化活性，还具有美白活性，被广泛用作化妆品美白抗氧化的功效成分。藜芦多糖是另一种被用于化妆品的成分，其具有较高的保湿活性，被用作化妆品中的保湿活性成分。藜芦多肽目前处于研究初级阶段，提取开发工艺尚不成熟，功效活性也在探索过程中，但白藜芦醇和藜芦多糖的优异活性让研究人员对藜芦多肽的应用前景充满了期待。

技术实现思路

[0006]本专利技术为了克服现有技术的不足，提供一种抗皮肤光老化并增强皮肤弹性的酶解肽，并将该酶解肽用于制备抗皮肤光老化并增强皮肤弹性的化妆品。
[0007]本专利技术技术方案如下：
[0008]一种酶解肽，通过如下方法制备：取适量藜芦成熟种子的干燥粗粉，先用二氯甲烷脱脂，待粗粉中有机溶剂挥发完后，用pH为10.0的氢氧化钠水溶液加热提取，收集提取液，过滤，再通过离心进一步去除提取液中的悬浮物，将去除悬浮物的提取物用盐酸调节pH值为5.0，静置，通过离心收集析出物，析出物透析脱盐，即为种子总蛋白；取适量种子总蛋白用去离子水配制成蛋白溶液，借助超声使蛋白分散，50℃保温，然后加入胰蛋白酶按照如下参数酶解：酶量，3000U/g；pH，8.0；温度，50℃；时间，6h；酶解结束后，沸水浴灭酶，冷却，8000rpm离心15min，留上清液；最后，将酶解的上清液依次用截留分子量为5000u、3000u的超滤膜超滤，保留分子量介于3000u和5000u之间的组分，冷冻干燥得到藜芦种子蛋白的酶
解肽。
[0009]其中，加热提取温度为55℃，时间为3h。
[0010]其中，前两次离心条件为5000rpm离心15min。
[0011]以上酶解肽用于制备抗皮肤光老化并增强皮肤弹性的化妆品的用途。
[0012]有益技术效果：
[0013]本专利技术基于藜芦种子蛋白获得了一种分子量适中、较为均匀的酶解肽。活性试验证明，该酶解肽明显不但可以剂量依赖性地提高光老化HaCaT细胞的细胞活力和抗氧化能力，提高HaCaT细胞的抗光老化能力，而且可以剂量依赖性地提高人真皮成纤维细胞中弹性蛋白的表达水平，进而增强皮肤弹性。该酶解肽可以用于制备抗皮肤光老化并增强皮肤弹性的化妆品。
附图说明
[0014]图1中A为酶解肽的扫描电镜观察结果，B为各组细胞活性，C为各组SOD活力，D为各组GPx活力，E为各组弹性蛋白表达水平。
具体实施方式
[0015]下面通过具体的实施例详细介绍本专利技术实质性内容，但不能以此限定本专利技术的保护范围。
[0016]实施例1：酶解肽的制备
[0017]一、试验材料
[0018]收集百合科植物藜芦Veratrum nigrum L.的成熟种子，晒干，粉碎过40目筛。二氯甲烷、氢氧化钠和盐酸购自南京化学试剂股份有限公司。胰蛋白酶购自北京索莱宝科技有限公司。超滤膜购自山东博纳生物科技集团有限公司。
[0019]二、试验方法和结果
[0020]取适量藜芦成熟种子的干燥粗粉，先按照料液比1kg:10L的比例用二氯甲烷脱脂，待粗粉中有机溶剂挥发完后，按照料液比1kg:10L的比例用pH为10.0的氢氧化钠水溶液55℃加热提取3h，收集提取液，过滤，再通过离心进一步去除提取液中的悬浮物，离心条件为5000rpm离心15min，将去除悬浮物的提取物用盐酸调节pH值为5.0，静置6h，通过离心收集析出物，离心条件为5000rpm离心15min，析出物透析脱盐，即为种子总蛋白。取适量种子总蛋白用去离子水配制成1mg/mL的蛋白溶液，借助超声使蛋白分散，50℃保温，然后加入胰蛋白酶按照如下参数酶解：酶量，3000U/g；pH，8.0；温度，50℃；时间，6h。酶解结束后，沸水浴灭酶，冷却，8000rpm离心15min，留上清液。最后，将酶解的上清液依次用截留分子量为5000u、3000u的超滤膜超滤，保留分子量介于3000u和5000u之间的组分，冷冻干燥得到藜芦种子蛋白的酶解肽。取适量酶解肽粉末，扫描电镜观察，如图1中A，较为均匀。
[0021]实施例2：抗皮肤光老化作用
[0022]一、试验材料
[0023]人永生化角质形成细胞株(HaCaT)购于ATCC。胎牛血清、DMEM培养基购于美国Gibco公司。酶解肽按实施例1制备。双抗、CCK
‑
8试剂、超氧化物歧化酶检测试剂盒和谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒购于碧云天生物。
[0024]二、试验方法
[0025]1、细胞培养
[0026]将HaCaT细胞复苏，接种于含有10％胎牛血清和1％双抗的DMEM培养基中，置于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养，待细胞生长至80％～90％进行传代。
[0027]2、细胞活性和抗氧化能力测定
[0028]取对数生长期HaCaT细胞，消化重悬后接种于96孔板，每孔1
×
104个细胞/200μL，置于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养。24h后，模型组和酶解肽组进行光老化，对照组不进行光老化。光老化方法为用辐射剂量为60mJ/cm2的UVB照射(照射剂量(mJ/cm2)＝照射功率(mW/cm2)
×
时间(s))。光老化后，酶解肽组立即更换为含有50μg/mL、100μg/mL酶解肽的完全培养基，模型组和对照组更换为不含酶解肽的完全培养基。继续培养48h后，使用CCK
‑
8法测定吸光度值，以对照组活力为100％，计算模型组和酶解肽组细胞的相对活力。
[0029]取对数生长期HaCaT细胞，消化重悬后接种于96孔板，每孔1
×
104个细胞/200μL，置于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养。24h后，模型组和酶解肽组进行光老本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种酶解肽，其特征在于，通过如下方法制备：取适量藜芦成熟种子的干燥粗粉，先用二氯甲烷脱脂，待粗粉中有机溶剂挥发完后，用pH为10.0的氢氧化钠水溶液加热提取，收集提取液，过滤，再通过离心进一步去除提取液中的悬浮物，将去除悬浮物的提取物用盐酸调节pH值为5.0，静置，通过离心收集析出物，析出物透析脱盐，即为种子总蛋白；取适量种子总蛋白用去离子水配制成蛋白溶液，借助超声使蛋白分散，50℃保温，然后加入胰蛋白酶按照如下参数酶解：酶量，3000U/g；pH，8.0；温度，50℃；时间，6h；...

【专利技术属性】
技术研发人员：ꢀ五一IntClC一二P二一零六，
申请(专利权)人：南京凡亦达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：