肿瘤基因诊断标志物、诊断试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了肿瘤基因诊断标志物、诊断试剂盒。本发明专利技术发现，LINC02154与miR

【技术实现步骤摘要】
肿瘤基因诊断标志物、诊断试剂盒


[0001]本专利技术属于疾病诊断领域，涉及原发性肝癌诊断，具体涉及原发性肝癌基因诊断标志物。

技术介绍

[0002]原发性肝癌作为临床较为常见的恶性肿瘤，其源自肝内胆管上皮细胞或肝细胞，其病因及发病机制还不是很清楚，有报道称，可能与肝硬化、病毒性肝炎、饮食、环境等因素有关。原发性肝癌患者具有病情进展快、预后差等特点，多数患者就诊时已经进入中晚期，丧失了手术切除机会，因此早期诊断、早期治疗是提高患者生活质量、延长生存期的重要方法。

技术实现思路

[0003]本专利技术为了克服现有技术的不足，提供肿瘤基因诊断标志物用于原发性肝癌诊断。
[0004]本专利技术技术方案如下：
[0005]LINC02154联合miR
‑
3147在制备原发性肝癌诊断的血清检测试剂盒中的应用。LINC02154、miR
‑
3147单独用于诊断原发性肝癌时的ROC曲线下面积分别为0.805、0.758，联合用于诊断原发性肝癌时的ROC曲线下面积分别为0.929，联合诊断效能显著提高。
[0006]一种原发性肝癌诊断的血清检测试剂盒，含有检测LINC02154和miR
‑
3147的试剂。
[0007]有益技术效果：
[0008]本专利技术发现，LINC02154与miR
‑
3147联合用于原发性肝癌的诊断具有较高的准确率，显著优于LINC02154或miR
‑
3147单独用于原发性肝癌诊断的诊断准确率。因此，LINC02154可以联合miR
‑
3147用于制备原发性肝癌诊断的血清检测试剂盒。
附图说明
[0009]图1为训练集中LINC02154单独诊断区分原发性肝癌和非原发性肝癌的ROC曲线；
[0010]图2为训练集中miR
‑
3147单独诊断区分原发性肝癌和非原发性肝癌的ROC曲线；
[0011]图3为训练集中LINC02154联合miR
‑
3147诊断区分原发性肝癌和非原发性肝癌的ROC曲线。
具体实施方式
[0012]下面通过具体的实施例详细介绍本专利技术实质性内容，但不能以此限定本专利技术的保护范围。
[0013]一、试验材料
[0014]总RNA提取试剂盒购自美国Invitrogen公司。反转录试剂盒购自Thermo Fisher Scientific。RT
‑
PCR测量仪购自德国Qiagen公司。RT
‑
PCR引物由吉满生物科技(上海)有限
公司合成。
[0015]二、试验方法
[0016]1、一般资料
[0017]原发性肝癌样本：选取南京医科大学第一附属医院2018～2020年病理确诊为原发性肝癌的患者135例；非原发性肝癌样本：选取南京医科大学第一附属医院2018～2020年体检的健康人45例、确诊为乙肝肝炎的患者45例、确诊为乙肝肝硬化的患者45例共同组成非原发性肝癌样本135例。两组样本的年龄分布具有高度相似性，P＞0.05，无统计学意义。
[0018]入组标准：
①
经计算机体层摄影(computedtomography，CT)等影像学检查或病理学检查证实；
②
检测前未行放疗、化疗等抗肿瘤治疗；
③
年龄≥18岁。排除标准：
①
合并其他部位恶性肿瘤；
②
妊娠期或哺乳期妇女；
③
合并免疫系统疾病、血液系统疾病等。
[0019]2、样本分组
[0020]训练集：分别从原发性肝癌样本和非原发性肝癌样本中随机选取45例样本组成训练集，总样本数为90例；验证集：剩余的原发性肝癌样本和非原发性肝癌样本组成验证集，总样本数为180例。
[0021]3、血清LINC02154、miR
‑
3147相对表达量测定
[0022]空腹情况下抽取5mL静脉血，以2500r/min的转速进行离心处理5min，分离血清，用总RNA提取试剂盒提取总RNA。取2μg总RNA于反转录试剂盒中合成cDNA。取cDNA置于PCR扩增仪中扩增，反应条件为94℃15min预变性，60℃30s退火，72℃30s延伸，40个循环。采用相对定量法，测定目的基因、GAPDH的PCR产物的Ct值，以2
‑
ΔΔCt
计算目的基因相对表达量，各设3个复孔，实验重复3次。
[0023]LINC02154基因上游引物序列：5
’‑
GGTTGAGGAACTGTGCCTTGGAG
‑3’
；
[0024]LINC02154基因下游引物序列：5
’‑
GCCGGAGTTGCAGTGATGGAC
‑3’
；
[0025]miR
‑
3147基因上游引物序列：5
’‑
GCAGGGTCCGAGGTATTCACG
‑3’
；
[0026]miR
‑
3147基因下游引物序列：5
’‑
CCCGTTGGCAGTGTCTTAGCT
‑3’
；
[0027]GAPDH基因上游引物序列：5
’‑
TGATGACATCAAGAAGGTGGTGAAG
‑3’
；
[0028]GAPDH基因下游引物序列：5
’‑
TCCTTGGAGGCCCAGTGGGCCAT
‑3’
。
[0029]4、统计学处理
[0030]采用SPSS 19.0处理数据，所有计量资料均进行正态和方差齐性检验，符合正态分布的数据用均值
±
偏差表示，不符合正态和方差齐性检验的计量资料采用非参数检验，组间两两比较采用t检验。采用SPSS 19.0绘制血清LINC02154、miR
‑
3147单独和联合诊断区分原发性肝癌和非原发性肝癌的受试者工作特征(ROC)曲线，并计算曲线下面积(AUC)，并利用AUC评估LINC02154、miR
‑
3147单独和联合对原发性肝癌和非原发性肝癌的诊断区分价值。AUC≤0.5为无诊断价值，0.5＜AUC≤0.7为诊断准确性较低，0.7＜AUC≤0.9为诊断准确性较好，AUC≥0.9为诊断准确性最高，P＜0.05为差异有统计学意义。
[0031]三、试验结果
[0032]1、LINC02154和miR
‑
3147在原发性肝癌和非原发性肝癌血清中含量比较
[0033]训练集中，LINC02154和miR
‑
3147在原发性肝癌和非原发性肝癌血清中含量如表1所示，与非原发性肝癌相比，LINC02154和miR
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.LINC02154联合miR
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3147在制备原发性肝癌诊断的血清检测试剂盒中的应用。2.一种原发性肝癌...

【专利技术属性】
技术研发人员：ꢀ五一IntClC一二Q一六八八六，
申请(专利权)人：南京凡亦达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：