TAZ激动剂在hUC-MSCs培养中的应用制造技术

本发明专利技术公开了TAZ激动剂在hUC

【技术实现步骤摘要】
TAZ激动剂在hUC
‑
MSCs培养中的应用


[0001]本专利技术属于生物干细胞领域，涉及TAZ激动剂在hUC
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MSCs培养中的应用。

技术介绍

[0002]间充质干细胞具有再生潜能和免疫调节能力，在骨髓、脂肪组织、脐带、脐带血、羊水、胎盘、牙髓、肌腱、滑膜和骨骼肌等中均发现了间充质干细胞。脐带由于来源广泛、无伦理争议、易于分离、低免疫原性等优势被研究人员和应用者青睐，从中分离得到的人脐带间充质干细胞(hUC
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MSCs)作为种子细胞广泛应用于组织工程和再生医学的研究。
[0003]间充质干细胞已被证明具有选择性迁移到损伤组织的归巢能力，并可以通过释放有益的细胞因子促进自身组织的再生过程。间充质干细胞的增殖能力和迁移能力是其发挥上述治疗作用的基础。因此，提高间充质干细胞的增殖、迁移能力是干细胞领域热度不减的研究方向。
[0004]成骨转录共刺激因子TAZ(Tafazzin)是近年发现的Hippo信号通路下游的关键效应分子，参与调节细胞增殖与凋亡、上皮间质转化(EMT)、干细胞的自我更新与分化，并调控组织器官的正常体积及机体内环境的稳态。近年来有研究揭示TAZ是参与骨髓间充质干细胞自我更新和多向分化的新的关键分子。TAZ一方面可作为转录共激活因子与Runt相关转录因子2(Runx2)结合从而激活其下游骨钙蛋白(OCN)、骨桥蛋白(OPN)等成骨分子的表达以促进间充质干细胞(MSCs)向成骨分化；另一方面，也可与过氧化物增殖子激活型受体γ(PPARγ)结合，抑制其成脂分化(TAZ激动剂TM
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25659促进人脂肪干细胞成骨的体内外研究，南京医科大学学报
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自然科学版，第39卷第7期)。
[0005]基于党参炔苷对hUC
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MSCs培养的影响以及可能的作用机制研究，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0006]本专利技术为了克服现有技术的不足，提供TAZ激动剂在hUC
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MSCs培养中的应用。
[0007]本专利技术技术方案如下：
[0008]一种TAZ激动剂在人脐带间充质干细胞体外培养增强其迁移活性并促进其成骨分化中的应用，所述TAZ激动剂为党参炔苷。在具体实施例中，党参炔苷诱导了hUC
‑
MSCs成骨分化，增强了hUC
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MSCs的迁移能力，并且其作用机制可能与激活TAZ有关。
[0009]一种TAZ激动剂在制备增强人脐带间充质干细胞迁移活性并促进其成骨分化的培养基中的应用，所述TAZ激动剂为党参炔苷。在具体实施例中，党参炔苷诱导了hUC
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MSCs成骨分化，增强了hUC
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MSCs的迁移能力，并且其作用机制可能与激活TAZ有关。
[0010]有益技术效果：
[0011]本专利技术发现党参炔苷可以通过激活TAZ增强人脐带间充质干细胞的迁移活性并促进其成骨分化，可以用于人脐带间充质干细胞的体外培养以促进人脐带间充质干细胞迁移和分化。
附图说明
[0012]图1中A为hUC
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MSCs生长形态，可见细胞呈长梭形漩涡状生长；B为茜素红染色结果，可见低浓度诱导组、高浓度诱导组均出现了显著的成骨分化，且高浓度诱导组成骨分化更显著；C为Transwell小室迁移试验中下室细胞染色结果，可见低浓度迁移组和高浓度迁移组的细胞迁移活性显著强于对照组；D为C图中下室细胞数量的柱状图；E为SDS
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PAGE凝胶电泳结果，与对照组相比，低浓度迁移组和高浓度迁移组细胞中TAZ蛋白表达水平明显升高，且剂量效应明显。
具体实施方式
[0013]下面通过具体的实施例详细介绍本专利技术实质性内容，但不能以此限定本专利技术的保护范围。
[0014]一、试验材料
[0015]人脐带间充质干细胞hUC
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MSCs购自深圳市豪地华拓生物科技有限公司。
[0016]胎牛血清和α
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MEM培养基购自Gibco公司。
[0017]青链霉素和流式检测试剂材料购自碧云天生物。
[0018]TAZ和GAPDH抗体购自BD Biosciences。
[0019]党参炔苷购自源叶生物，CAS号136085
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5，HPLC≥98％。
[0020]6cm培养皿购自弗元(上海)生物科技有限公司，Transwell小室购自康宁。
[0021]二、试验方法
[0022]1、hUC
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MSCs培养
[0023]将hUC
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MSCs用α
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MEM完全培养基(体积分数为10％胎牛血清+1％青链霉素+α
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MEM培养基)置于37℃、体积分数为5％的CO2饱和湿度培养箱中培养，隔天换液，当细胞达约75％融合时，消化传代。倒置显微镜下观察细胞生长状态。流式检测表面标志物CD34、CD45、CD73、CD90、CD105、HLA
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DR表达。
[0024]2、成骨诱导分化
[0025]取生长状态良好的hUC
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MSCs消化后用α
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MEM完全培养基重悬，接种于6cm培养皿中，每皿接种6
×
105个细胞，分为对照组、低浓度诱导组和高浓度诱导组，置于37℃、体积分数为5％的CO2饱和湿度培养箱中培养。24h后，低浓度诱导组、高浓度诱导组分别改用含有50μM、100μM党参炔苷的α
‑
MEM完全培养基，对照组继续使用α
‑
MEM完全培养基(但需要更换)。继续培养9d(每3d半量更换一次对应的培养基)后使用茜素红染色观察成骨分化。
[0026]3、细胞迁移能力
[0027]取生长状态良好的hUC
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MSCs消化后用α
‑
MEM完全培养基重悬，接种于6cm培养皿中，每皿接种6
×
105个细胞，分为对照组、低浓度迁移组和高浓度迁移组，置于37℃、体积分数为5％的CO2饱和湿度培养箱中培养。24h后，低浓度迁移组、高浓度迁移组分别改用含有50μM、100μM党参炔苷的α
‑
MEM完全培养基，对照组继续使用α
‑
MEM完全培养基(但需要更换)。继续培养48h后，收集细胞，消化，用不含胎牛血清的α
‑
MEM培养基重悬，分别接种于24孔Transwell小室的上室中，每孔1
×
105细胞/200μL，下室加入600μLα
‑
MEM完全培养基，置于37℃、体积分数为5％的CO2饱和湿度培养箱中培养。24h后，取出小室并轻缓舍弃培养基，将上室未迁移的细胞用无菌面签轻缓擦拭掉，采用多聚甲醛(40g/L)对下室细胞固定
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种TAZ激动剂在人脐带间充质干细胞体外培养增强其迁移活性并促进其成骨分化中的应用，所述TAZ激动剂为党参炔苷。2.一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：ꢀ五一IntClC一二N五零七七五，
申请(专利权)人：南京凡亦达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：