联合癌胚抗原的肿瘤基因诊断标志物及其用途制造技术

本发明专利技术公开了联合癌胚抗原的肿瘤基因诊断标志物及其用途。本发明专利技术通过联合miR

【技术实现步骤摘要】
联合癌胚抗原的肿瘤基因诊断标志物及其用途


[0001]本专利技术属于疾病诊断领域，具体涉及联合癌胚抗原的肿瘤基因诊断标志物及其用途。

技术介绍

[0002]结直肠癌(colorectal cancer，CRC)是全球范围内常见的恶性肿瘤之一，估计2020年全球CRC年龄标化发病率为19.5/10万，死亡率为9.0/10万。CRC在发达国家发病率较高，美国近5年CRC年龄标化发病率约为38.7/10万，死亡率为13.9/10万。众多国家的实践经验表明，采取有效的结直肠癌筛查策略能够降低结直肠癌的疾病负担(结直肠癌筛查策略的研究现状与思考，中国全科医学杂志，2021年09月)。
[0003]作为CRC筛查指标之一的癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)是1965年由Gold和Freedman首先从结肠癌和胚胎组织中提取的一种肿瘤相关抗原，是一种具有人类胚胎抗原特性的酸性糖蛋白，存在于内胚层细胞分化而来的癌症细胞表面，是细胞膜的结构蛋白。在细胞浆中形成，通过细胞膜分泌到细胞外，然后进入周围体液。因此，可从血清、脑脊液、乳汁、胃液、胸腹水及尿液、粪便等多种体液和排泄物中检出。CEA在结直肠癌的鉴别诊断、病情监测、疗效评价等方面发挥了重要的临床价值。
[0004]甲胎蛋白(AFP)是一种常用于肿瘤筛查的肿瘤标记物，广泛用于肝癌等肿瘤的诊断。
[0005]但是，CEA或AFP用于结直肠癌诊断的准确率不高。为了提高CEA或AFP用于结直肠癌诊断的准确率，特提出本专利技术。/>
技术实现思路

[0006]本专利技术为了克服现有技术的不足，提供联合癌胚抗原的肿瘤基因诊断标志物及其用途。
[0007]本专利技术技术方案如下：
[0008]miR
‑
609联合癌胚抗原在制备结直肠癌早期诊断的血清检测试剂盒中的应用。
[0009]一种结直肠癌早期诊断的血清检测试剂盒，含有检测血清miR
‑
609和癌胚抗原的试剂。
[0010]有益技术效果：
[0011]本专利技术通过联合miR
‑
609与癌胚抗原提高了结直肠癌筛查准确率，克服了癌胚抗原单独用于结直肠癌筛查准确率不高的不足。因此，miR
‑
609可以联合癌胚抗原用于制备结直肠癌早期诊断的血清检测试剂盒。
附图说明
[0012]图1为CEA、AFP、miR
‑
609和miR
‑
3934
‑
5p在结直肠癌和健康人血清中含量比较；其中，miR
‑
609和miR
‑
3934
‑
5p通过琼脂糖凝胶电泳测定，内参为β
‑
Actin，将训练集中40例直
肠癌样本或健康人群样本随机分为四份，每份10个样本混合成一份，电泳结果中A、C、E、G分别对应健康人群混合样本，B、D、F、H分别对应直肠癌混合样本；
[0013]图2为训练集中CEA单独诊断区分结直肠癌和健康人的ROC曲线；
[0014]图3为训练集中AFP单独诊断区分结直肠癌和健康人的ROC曲线；
[0015]图4为训练集中CEA联合miR
‑
609诊断区分结直肠癌和健康人的ROC曲线；
[0016]图5为训练集中CEA联合miR
‑
3934
‑
5p诊断区分结直肠癌和健康人的ROC曲线；
[0017]图6为训练集中AFP联合miR
‑
609诊断区分结直肠癌和健康人的ROC曲线；
[0018]图7为训练集中AFP联合miR
‑
3934
‑
5p诊断区分结直肠癌和健康人的ROC曲线。
具体实施方式
[0019]下面通过具体的实施例详细介绍本专利技术实质性内容，但不能以此限定本专利技术的保护范围。
[0020]一、试验材料
[0021]总RNA提取试剂盒购自美国Invitrogen公司。反转录试剂盒购自Thermo Fisher Scientific。RT
‑
PCR测量仪购自德国Qiagen公司。RT
‑
PCR引物由吉满生物科技(上海)有限公司合成。
[0022]二、试验方法
[0023]1、一般资料
[0024]结直肠癌样本：选取南京医科大学第一附属医院2018～2020年病理确诊为结直肠癌的患者120例；健康人群样本：选取南京医科大学第一附属医院2018～2020年体检的健康人120例。两组样本的年龄分布具有高度相似性，P＞0.05，无统计学意义。
[0025]入组标准：
①
经计算机体层摄影(computed tomography，CT)等影像学检查或病理学检查证实；
②
检测前未行放疗、化疗等抗肿瘤治疗；
③
年龄≥18岁。排除标准：
①
合并其他部位恶性肿瘤；
②
妊娠期或哺乳期妇女；
③
合并免疫系统疾病、血液系统疾病等。
[0026]2、样本分组
[0027]训练集：分别从结直肠癌样本和健康人群样本中随机选取40例样本组成训练集，总样本数为80例；验证集：剩余的结直肠癌样本和健康人群样本组成验证集，总样本数为160例。
[0028]3、血清CEA、AFP测定
[0029]空腹情况下抽取5mL静脉血，以2500r/min的转速进行离心处理5min，分离血清，使用全自动生化分析仪以及配套的原装试剂，严格按照说明书测定CEA、AFP浓度。
[0030]4、血清miR
‑
609、miR
‑
3934
‑
5p表达水平测定
[0031]空腹情况下抽取5mL静脉血，以2500r/min的转速进行离心处理5min，分离血清，用总RNA提取试剂盒提取总RNA。取2μg总RNA于反转录试剂盒中合成cDNA。取cDNA置于PCR扩增仪中扩增，反应条件为94℃15min预变性，60℃30s退火，72℃30s延伸，40个循环。采用相对定量法，测定目的基因、GAPDH的PCR产物的Ct值，以2
‑
ΔΔCt
计算目的基因相对表达量，各设3个复孔，实验重复3次。
[0032]miR
‑
609正向引物序列：5
’‑
CGACGTGCACTGCACCAGC
‑3’
；
[0033]miR
‑
609反向引物序列：5
’‑
AGTCACTGCACAGTCAC
‑3’
；
[0034]miR
‑
3934
‑
5p正向引物序列：5
’‑
GCCAGCTCCTACATCTCAGC
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.miR
‑
609联合癌胚抗原在制备结直肠癌早期诊断的血清检测试剂盒中的应用。2.一种结直肠癌早...

【专利技术属性】
技术研发人员：ꢀ五一IntClC一二Q一六八八六，
申请(专利权)人：南京凡亦达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：