结直肠肿瘤性病变血液tRF标志物及其应用制造技术

本发明专利技术属于基因工程及肿瘤医学领域，具体公开了一种用于结直肠肿瘤性病变辅助诊断的血液tRF标志物及其应用，所述血液tRF标志物为tRF-Tyr-GTA-081和tRF-Ala-AGC-060的组合；该血液tRF标志物可用于结直肠肿瘤性病变的辅助诊断。本发明专利技术还公开了一种用于结直肠肿瘤性病变辅助诊断的试剂盒，该试剂盒用于检测血液中的tRF-Tyr-GTA-081和tRF-Ala-AGC-060，包含检测tRF-Tyr-GTA-081和tRF-Ala-AGC-060的检测试剂，所述检测试剂包括QPCR实验中使用的RNA反转录引物和/或DNA扩增引物。该血液tRF标志物组合可用于结直肠肿瘤性病变的筛查和诊断，检出成功率高，技术重现性好，有助于反映结直肠肿瘤性病变无症状高危人群的疾病状态，为临床医生快速准确掌握患者病情、及时采取更具个性化的防治方案提供支持。性化的防治方案提供支持。性化的防治方案提供支持。

【技术实现步骤摘要】
结直肠肿瘤性病变血液tRF标志物及其应用


[0001]本专利技术属于基因工程及肿瘤学领域，涉及一种新的结直肠肿瘤性病变(包括腺瘤和结直肠癌)血液tRF标志物及其应用。

技术介绍

[0002]根据最新的全球癌症统计数据，结直肠癌(CRC)是全球第三大常见癌症，也是第二常见的致死癌症。2015年中国结直肠癌的新增病例和死亡人数分别为39万和19万。此外，未来数年，这一数字将继续呈上升趋势。最近的一项研究表明，约85％的CRCs可能由腺瘤转化而来。此外，在不同类型的腺瘤中，进展期腺瘤已被证明是CRC更明显的危险因素。因此，在临床应用中，早期筛查和诊断结直肠肿瘤性病变，包括腺瘤和CRC，对后续的治疗至关重要。
[0003]结肠镜检查被认为是结直肠肿瘤性病变筛查的金标准。然而，结肠镜检查存在漏检率以及覆盖不全等缺点。此外，在中国城市，大肠癌高危人群的结肠镜检查符合率仅约为15％。所有这些负担都干扰了结直肠肿瘤性病变的早期筛查及诊断。尽管已发现一些肿瘤标志物，如癌胚抗原(CEA)和糖类抗原(如CA19-9、CA74-2等)等，但对结直肠肿瘤性病变(包括腺瘤和结直肠癌)诊断的敏感度和特异度均有限，尤其在发现早期结直肠肿瘤性病变和鉴别侵袭性无痛性肿瘤方面。因此，寻找新的特异性高和敏感性好的标志物越来越受到国内外的重视。因此，迫切需要建立一种新的结直肠肿瘤病变筛选技术，该技术应简单易行，以提高符合率。
[0004]转移RNA(Transfer RNA,tRNA)是一种重要的调节性非编码RNA，参与疾病的各个过程。tRNAs被特异性酶裂解后可产生多种tRNA来源的片段(tRFs)。越来越多的证据表明，tRFs参与各种疾病的发生和发展，包括癌症。因此，tRFs可以作为结直肠肿瘤性病变的生物标志物。
[0005]目前还没有用于结直肠肿瘤性病变(包括腺瘤和结直肠癌)诊断的较为稳定的生物标志物的报道，若能筛选出结直肠肿瘤性病变(包括腺瘤和结直肠癌)异常表达的全血(包含血清或血浆)tRFs作为生物标志物，并开发出相应的诊断试剂盒，将会有力的推动我国结直肠肿瘤性病变(包括腺瘤和结直肠癌)的筛查及诊断。

技术实现思路

[0006]针对现有技术存在的问题和不足，专利技术人希望通过分离和研究结直肠肿瘤性病变(包括腺瘤和结直肠癌)患者以及与肿瘤性病变(包括腺瘤和结直肠癌)患者年龄、性别匹配的健康人对照全血(包含血清或血浆)中tRFs，寻找一组与结直肠肿瘤性病变(包括腺瘤和结直肠癌)高度相关的高特异性和敏感性的tRFs，并研制出可便于临床应用的结直肠肿瘤性病变(包括腺瘤和结直肠癌)诊断试剂盒，为结直肠肿瘤性病变(包括腺瘤和结直肠癌)的筛查和诊断提供数据支持，为发现具有潜在治疗价值的新型小分子药物提供数据支持。
[0007]为实现专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：
[0008]本专利技术提供了一种用于结直肠肿瘤性病变(包括腺瘤和结直肠癌)辅助诊断的血
液tRFs标志物，所述血液tRFs标志物为tRF-Tyr-GTA-081和tRF-Ala-AGC-060的组合，所述tRF-Tyr-GTA-081的扩增引物为Forward:5'GAGTTCTACAGTCCGACGATCT3
’
；Reverse:5
’
CTCTTCCGATCTAGATTTA CAGTC 3
’
。用于检测tRF-Ala-AGC-060的扩增引物为Forward:5'GTCCGACGATCTCCCCAGTA3
’
；Reverse:5
’
TGTGCTCTTCCGATCTTGGT 3
’
。
[0009]本专利技术还提供了一种上述血液tRFs标志物在制备结直肠肿瘤性病变(包括腺瘤和结直肠癌)辅助诊断试剂盒或试剂中的应用。
[0010]根据上述的应用，优选地，所述试剂盒包含检测tRF-Tyr-GTA-081和tRF-Ala-AGC-060的检测试剂。
[0011]根据上述的应用，优选地，所述检测试剂包括RNA反转录引物和/或DNA扩增引物。
[0012]本专利技术还提供了一种用于结直肠肿瘤性病变(包括腺瘤和结直肠癌)辅助诊断的试剂盒，所述试剂盒用于检测血液中的tRF-Tyr-GTA-081和tRF-Ala-AGC-060。
[0013]根据上述的试剂盒，优选地，所述试剂盒包含检测tRF-Tyr-GTA-081和tRF-Ala-AGC-060的检测试剂。
[0014]根据上述的试剂盒，优选地，所述检测试剂包括QPCR实验中使用的RNA反转录引物和/或DNA扩增引物，所述RNA反转录引物为Oligo(dt)引物；所述tRF-Tyr-GTA-081的扩增引物为Forward:5'GAGTTCTACAGTCCGACGATCT3
’
；Reverse:5
’
CTCTTCCGATCTAGATTTA CAGTC 3
’
，亦即，如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。用于检测tRF-Ala-AGC-060的扩增引物为Forward:5'GTCCGACGATCTCCCCAGTA3
’
；Reverse:5
’
TGTGCTCTTCCGATCTTGGT 3
’
，亦即如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。
[0015]根据上述的试剂盒，优选地，所述试剂盒还包含检测内参基因的检测试剂；所述内参基因为SnRNA U6，所述内参基因的检测试剂包括QPCR实验中使用的RNA反转录引物和/或DNA扩增引物，所述RNA反转录引物为Oligo(dt)引物，用于检测SnRNA U6的DNA扩增引物的核苷酸序列为Forward:5
’
GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT 3
’
；Reverse:5
’
CGCTTCACGAATTTG CGTGTCAT 3
’
，亦即，如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。
[0016]根据上述的试剂盒，优选地，所述试剂盒还包含反转录反应试剂和PCR扩增试剂，如反转录酶、缓冲液、dNTPs，MgCl2，DEPC水和Taq酶等；还可以含有标准品和/或对照品。
[0017]具体地说，本专利技术解决问题的技术方案包括：
[0018](1)建立统一标准的标本库和数据库：以标准操作程序(SOP)采集符合标准的血液样本，系统收集完整的人口学资料和临床资料。
[0019](2)tRFs差异表达谱分析：选择结直肠肿瘤性病变(包括腺瘤和结直肠癌)病例组织及对应结直肠癌癌旁组织样本，检测其组织样本tRFs表达谱及含量，分析结直肠肿瘤性病变(包括腺瘤和结直肠癌)病例组织及对应结直肠癌癌旁组织tRFs的共性和特性，筛选差异表达tRFs；采用筛选的差异表达tRFs在组织和全血中进行进一步大样本验证，确定结直肠肿瘤性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.血液tRF标志物在制备结直肠肿瘤性病变辅助诊断试剂盒或试剂中的应用，其特征在于，所述血液tRF标志物为tRF-Tyr-GTA-081和tRF-Ala-AGC-060的组合。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，结直肠肿瘤性病变为腺瘤或结直肠癌。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包含检测tRF-Tyr-GTA-081和tRF-Ala-AGC-060的检测试剂。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述检测试剂包括QPCR实验中使用的RNA反转录引物和/或DNA扩增引物，所述RNA反转录引物为Oligo(dt)引物；用于检测tRF-Tyr-GTA-081的DNA扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；用于检测tRF-Ala-AGC-060的DNA扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂盒还包含检测内参基因的检测试剂；所述内参基因为SnRNA U6，所述内参基因的检测试剂包括QPCR实验中使用的RNA反转录引物和/或DNA扩增引物，所述RNA反转录引物为Oligo(dt)引物，用于检测SnRNA U6的DNA扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO...

【专利技术属性】
技术研发人员：季光，党延启，许阳贤，
申请(专利权)人：上海中医药大学附属龙华医院，
类型：发明
国别省市：