一种高迁移活性UCMSCs、培养方法和关键活性成分的应用技术

本发明专利技术公开了一种高迁移活性UCMSCs、培养方法和关键活性成分的应用，该高迁移活性的UCMSCs通过含有S

【技术实现步骤摘要】
一种高迁移活性UCMSCs、培养方法和关键活性成分的应用


[0001]本专利技术属于细胞领域，涉及干细胞培养，具体涉及一种高迁移活性UCMSCs、培养方法和关键活性成分的应用。

技术介绍

[0002]间充质干细胞(MSCs)来源于发育早期中胚层，广泛存在于骨髓、脂肪、脐血等多种组织中，具有自我更新，高度增殖及多向分化潜能的成体干细胞，MSCs逐渐成为替代治疗和基因治疗领域中极具实用价值的细胞来源，在组织工程领域具有广阔的应用前景。近年来，与骨髓MSCs相比，脐带间充质干细胞(UCMSCs)以其易得、原始、增殖力强、免疫原性低、不涉及法律伦理等优势越来越受到人们的重视。
[0003]UCMSCs具有许多吸引人的优点，包括无创收集过程、体外分离纯化高效、低感染风险、非致瘤性、多能性显著和低免疫原性，无异体排斥反应。目前，UCMSCs在很多不同类型疾病的治疗研究中都表现了很好的治疗效果，对于器官损伤、神经系统疾病、内分泌系统疾病等传统治疗方法存在很大缺陷的疾病治疗中表现了相当好的疗效，在动物模型以及对人体的临床使用中已经为越来越多疾病的治疗带来了新的希望。
[0004]因为UCMSCs注入人体后需要向受损组织器官迁移，所以迁移活性高的UCMSCs对受损组织器官具有更有效的修复疗效。
[0005]S
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烯丙基
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L
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半胱氨酸是一种氨基酸衍生物，具有多种活性(S
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烯丙基
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L
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半胱氨酸主要药理活性研究进展，国际生物医学工程杂志，2017年)。目前未见S
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烯丙基
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L
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半胱氨酸具有提高UCMSCs迁移活性的报道和应用。

技术实现思路

[0006]本专利技术为了提供一种高迁移活性UCMSCs、培养方法和关键活性成分的应用。
[0007]本专利技术技术方案如下：
[0008]一种迁移活性增强的UCMSCs，通过含有S
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烯丙基
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L
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半胱氨酸的培养基培养得到。
[0009]一种提高UCMSCs迁移活性的培养方法，在培养基中添加S
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烯丙基
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L
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半胱氨酸。
[0010]优选地，所述培养基为DMEM/F12培养基。
[0011]更优选地，所述培养基含有胎牛血清。
[0012]更优选地，所述培养基含有双抗。
[0013]S
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烯丙基
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L
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半胱氨酸在UCMSCs体外培养提高其迁移活性中的应用。
[0014]有益技术效果：
[0015]本专利技术发现S
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烯丙基
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L
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半胱氨酸具有促进UCMSCs迁移的活性，且不影响其干性，因而可以通过S
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烯丙基
‑
L
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半胱氨酸的培养基培养得到迁移活性增强的UCMSCs。
附图说明
[0016]图1为倒置显微镜下观察的UCMSCs，形态符合UCMSCs的特征；
[0017]图2为将Transwell小室倒置在载玻片上在显微镜下观察图(100
×
)；
[0018]图3为SOX2、NANOG和OCT4蛋白的Western blot检测图，SL
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L组和SL
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H组SOX2、NANOG和OCT4蛋白表达水平与Control组基本一致。
具体实施方式
[0019]下面通过具体的实施例详细介绍本专利技术实质性内容，但不能以此限定本专利技术的保护范围。
[0020]实施例1：
[0021]一、试验材料
[0022]DMEM/F12培养基和胎牛血清购自Gibco公司。双抗购自南京森贝伽生物科技有限公司。PBS缓冲液按照配方配制后于4℃保存，24h内使用完。Ⅳ型胶原酶和胰酶购自上海懋康生物科技有限公司，按照说明书使用。S
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烯丙基
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L
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半胱氨酸购自源叶生物，HPLC≥98％。细胞培养皿、多孔板和Transwell小室购自Corning公司。SOX2、NANOG、OCT4和β
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actin一抗、二抗购自碧云天生物。
[0023]二、试验方法
[0024]1、UCMSCs的制备
[0025]按常规方法制备UCMSCs，具体为：取正常足月剖腹产新生儿脐带约12cm(脐带采集后4℃保存于含1％双抗的PBS缓冲液中，6h内提取干细胞培养)，用含1％双抗的PBS缓冲液冲洗去除脐动静脉及脐带外膜，分离出华通氏胶组织，剪成约1mm3大小的组织块，均匀铺于培养皿中，置于37℃恒温震荡仪内，先后加入Ⅳ型胶原酶、胰酶分别消化60min和30min提取细胞，再用含10％FBS和1％双抗的DMEM/F12培养基重悬细胞，于37℃、5％CO2培养箱中培养，待细胞约85％融合时用胰酶消化传代，倒置显微镜观察。
[0026]2、分组培养
[0027]取第3代UCMSCs进行迁移活性和干性测定。测定过程中分组如下：
[0028]对照组(Control)：用含10％FBS和1％双抗的DMEM/F12培养基培养；
[0029]SL
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L组：在对照组培养基组成基础上增加15μM S
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烯丙基
‑
L
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半胱氨酸；
[0030]SL
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H组：在对照组培养基组成基础上增加30μM S
‑
烯丙基
‑
L
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半胱氨酸。
[0031]各组平行操作。
[0032]3、UCMSCs迁移活性测定
[0033]取第3代生长状态良好的UCMSCs，接种于6孔板中，每孔2
×
105个细胞，12h后按照上述分组更换培养基，继续培养24h后，消化收集细胞，用含1％双抗的DMEM/F12培养基重悬成细胞浓度为3
×
105个细胞/mL的细胞悬液，分别添加至Transwell小室中，每个小室添加200μL细胞悬液，下室加入800μL含10％FBS和1％双抗的DMEM/F12培养基。37℃、5％CO2培养箱中培养24h后，将Transwell取出，先小心地用PBS清洗小室，然后用70％冰乙醇固定细胞1h，再用0.5％结晶紫染液染色20min，小心地用PBS洗涤去除染液，最后用干净棉签擦去上层未迁移的细胞，将小室倒置在载玻片上，显微镜下观察(100倍)计数。
[0034]4、UCMSCs干性测定
[0035]取第3代生长状态良好的UCMSCs，接种于6孔板中，每孔2
×
105个细胞，12h后按照上述分组更本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种迁移活性增强的UCMSCs，其特征在于：通过含有S
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烯丙基
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L
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半胱氨酸的培养基培养得到。2.一种提高UCMSCs迁移活性的培养方法，其特征在于：在培养基中添加S
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烯丙基
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L
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半胱氨酸。3.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：ꢀ五一IntClC一二N五零七七，
申请(专利权)人：南京凡亦达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：