一种由高均一性单价链霉亲和素四聚体在免疫化学发光平台的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种高均一性单价链霉亲和素四聚体在检测领域的应用。具体地，本发明专利技术提供了一种检测体系，所述检测体系包括具有如式I或式II所示结构的多元复合物，(A

【技术实现步骤摘要】
一种由高均一性单价链霉亲和素四聚体在免疫化学发光平台的应用


[0001]本专利技术涉及到在体外检测
以及其他检测领域的应用，具体地涉及一种由高均一性单价链霉亲和素四聚体在免疫化学发光平台检测领域提高相关性、稳定性以及重复性的应用。

技术介绍

[0002]链霉亲和素(Streptavidin，下称SA)是Streptomyces avidinii菌的外分泌物，与亲和素(Avidin)有相似生物学特性的一种蛋白质，其分子量及结合生物素的能力与鸡蛋清中的亲和素相似，等电点6.0，非特异性结合远比亲和素低；SA是四聚体蛋白，大小为66KDa。一分子链霉亲和素可以高度特异性地与四分子生物素结合，两者之间的亲和力极为强烈，链霉亲和素-生物素复合物的解离常数处于10mol/L数量级。
[0003]在目前的体外诊断行业(IVD)和生物研究方面，链霉亲和素的四聚体主要应用到酶联免疫分析，以及与生物素结合应用于生物研究。在体外诊断行业研究开发免疫化学发光平台检测试剂盒时，其中有用到化学发光标记物。
[0004]然而，在目前的生物研究和诊断应用中，四价的链霉亲和素仍然具有一些显著缺陷。第一，在市场上研发的免疫化学发光试剂盒的组分中，其中一个组分是一个抗体直接标记化学发光试剂，作为试剂盒的一个组分。此种方法组成的试剂盒在后期研究功能性时，有部分项目试剂盒的相关性性能达不到市场上被认可以及在应用同样试剂盒研发的标准，这一性能不好直接导致试剂盒研发受阻；第二，四价链霉亲和素应用在化学发光平台以及抗体直标吖啶酯的应用经常伴随重复性性能不好的问题。第三，开发试剂盒的人员尝试用生物素标记抗体，用化学发光试剂标记四价的链霉亲和素，然后两者结合的混合物形成试剂盒的一个组分，此种方法组成的试剂盒在后期测试和稳定性测试时，信号在短期内一直不稳定会下降，后来研究发现此标记方法存在一个弊端，生物素标记抗体再和化学发光试剂标记四价的链霉亲和素的混合物结合就会容易聚集形成聚体继而一定时间内就会产生沉淀，这一不稳定性同样影响试剂盒的研究开发。使用以上的方法所研发的试剂盒，其效果仍然不理想，项目稳定性性能不好，部分项目的相关性性能不好，以及重复性性能不好。
[0005]因此，本领域迫切需要开发一种改进的能够显著提高检测体系的稳定性性能、相关性性能以及重复性性能的利用链霉亲和素进行体外诊断检测或生物研究的方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种改进的能够显著提高检测体系的稳定性性能、相关性性能以及重复性性能的利用链霉亲和素进行体外诊断检测或生物研究的方法。
[0007]本专利技术的第一方面，提供了一种检测体系，所述检测体系包括：
[0008](a)一种多元复合物，所述多元复合物具有如式I所示的结构，
[0009](A-B)-(C-D
m
)
n
ꢀꢀꢀ
(式I)
[0010]式中的各元件包括：
[0011]A为第二结合蛋白，所述第二结合蛋白可以特异性地结合于目标分析物；
[0012]B为生物素；
[0013]C为单价链霉亲和素四聚体；
[0014]D为化学发光标记物；
[0015]“-”
为键或连接基团；
[0016]m为0.9-6，优选为0.9-2；
[0017]n为0.8-4，优选为1-2；
[0018](b)第一结合蛋白，所述第一结合蛋白交联于固相载体Z0，并且所述第一结合蛋白可以特异性地结合于目标分析物；
[0019](c)任选的目标分析物；
[0020]其中，所述第一结合蛋白和第二结合蛋白可分别与目标分析物的结合，两者互相之间不具有竞争性。
[0021]在另一优选例中，所述的化学发光标记物选自下组：吖啶酯。
[0022]本专利技术的第二方面，提供了一种检测体系，所述检测体系包括：
[0023](a)一种多元复合物，所述多元复合物具有如式II所示的结构，
[0024](A-B)(C-Z0)
p
(式II)
[0025]式中的各元件包括：
[0026]A为第一结合蛋白，所述第一结合蛋白可以特异性地结合于目标分析物；
[0027]B为生物素；
[0028]C为单价链霉亲和素四聚体；
[0029]Z0为固相载体；
[0030]“-”
为键或连接基团；
[0031]并且，p为1-200，优化为1-10，更优选为2-4；
[0032]p是抗体生物素和磁珠反应的单价SA分子比
[0033](b)第二结合蛋白，所述第二结合蛋白交联于化学发光标记物D，并且所述第二结合蛋白可以特异性地结合于目标分析物；
[0034](c)任选的目标分析物；
[0035]其中，所述第一结合蛋白和第二结合蛋白可分别与目标分析物的结合，两者互相之间不具有竞争性。
[0036]在另一优选例中，所述的化学发光标记物为吖啶酯。
[0037]在另一优选例中，所述固相载体材质选自下组：金属、玻璃、胶体、塑料或其组合。
[0038]在另一优选例中，所述的固相载体材质包括：均聚物、共聚物、或其组合。
[0039]在另一优选例中，所述的固相载体材质选自下组：聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、或其组合。
[0040]在另一优选例中，所述的固相载体材质选自下组：微球、微孔板、板条、试管、或其组合。
[0041]在另一优选例中，所述的Z0为微球(bead)、颗粒(particle)或磁珠。
[0042]在另一优选例中，所述单价链霉亲和素四聚体中，包含链霉亲和素野生型单体和
链霉亲和素突变体单体。
[0043]在另一优选例中，所述链霉亲和素突变体单体不具有结合生物素的功能。
[0044]在另一优选例中，所述单价链霉亲和素四聚体中，所述链霉亲和素野生型单体和链霉亲和素突变体单体的摩尔比为1：3。
[0045]在另一优选例中，所述单价链霉亲和素四聚体中可包括用于蛋白质纯化的标签。
[0046]在另一优选例中，所述标签的序列位于链霉亲和素野生型单体和/或链霉亲和素突变体单体的N端、C端或中间。
[0047]在另一优选例中，所述标签包括：His标签、GST标签、Trx标签、MBP标签、 HA标签、c-Myc标签、Flag标签，或其组合。
[0048]在另一优选例中，所述第二结合蛋白选自下组：抗原、抗体、配体、受体或其组合。
[0049]在另一优选例中，所述多元复合物的浓度为0.01至1mg/ml，较佳地0.02至0.8mg/ml，更佳地0.02至0.5mg/ml；和/或
[0050]所述检测体系中，所述Z0的浓度，因为检测平台不同，偏差较大，为1
×
104至 5.0
×
108个/mL，较佳地为1
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107至5
×
108个/mL，更本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测体系，其特征在于，所述检测体系包括：(a)一种多元复合物，所述多元复合物具有如式I所示的结构，(A-B)-(C-D
m
)
n
ꢀꢀꢀ
(式I)式中的各元件包括：A为第二结合蛋白，所述第二结合蛋白可以特异性地结合于目标分析物；B为生物素；C为单价链霉亲和素四聚体；D为化学发光标记物；
“-”
为键或连接基团；m为0.9-6，优选为0.9-2；n为0.8-4，优选为1-2；(b)第一结合蛋白，所述第一结合蛋白交联于固相载体Z0，并且所述第一结合蛋白可以特异性地结合于目标分析物；(c)任选的目标分析物；其中，所述第一结合蛋白和第二结合蛋白可分别与目标分析物的结合，两者互相之间不具有竞争性；较佳地，所述的化学发光标记物选自下组：吖啶酯。2.一种检测体系，其特征在于，所述检测体系包括：(a)一种多元复合物，所述多元复合物具有如式II所示的结构，(A-B)(C-Z0)
p
ꢀꢀꢀ
(式II)式中的各元件包括：A为第一结合蛋白，所述第一结合蛋白可以特异性地结合于目标分析物；B为生物素；C为单价链霉亲和素四聚体；Z0为固相载体；
“-”
为键或连接基团；并且，p为1-200，优化为1-10，更优选为2-4；(b)第二结合蛋白，所述第二结合蛋白交联于化学发光标记物D，并且所述第二结合蛋白可以特异性地结合于目标分析物；(c)任选的目标分析物；其中，所述第一结合蛋白和第二结合蛋白可分别与目标分析物的结合，两者互相之间不具有竞争性；较佳地，所述的化学发光标记物为吖啶酯。3.如权利要求1或2所述的检测体系，其特征在于，所述多元复合物的浓度为0.01至1mg/ml，较佳地0.02至0.8mg/ml，更佳地0.02至0.5mg/ml；和/或所述检测体系中，所述Z0的浓度，因为检测平台不同，偏差较大，为1
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104至5.0
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108个/mL，较佳地为1
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107至5
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108个/mL，更佳地为5
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107至1
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108个/mL。4.如权利要求1或2所述的检测体系...

【专利技术属性】
技术研发人员：李米雪，蔡勇华，李春梅，朱凤，
申请(专利权)人：上海透景诊断科技有限公司，
类型：发明
国别省市：