一种高均一性单价链霉亲和素四聚体的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种高均一性单价链霉亲和素四聚体在检测领域的应用。具体地，本发明专利技术提供了一种检测体系，所述检测体系包括：(a)具有如式I所示结构的多元复合物，(A-B)-(C-D

【技术实现步骤摘要】
一种高均一性单价链霉亲和素四聚体的应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体地涉及一种由高均一性单价链霉亲和素四聚体在检测领域中提高稳定性的应用。

技术介绍

[0002]链霉亲和素(Streptavidin，下称SA)是Streptomyces avidinii菌的外分泌物，与亲和素(Avidin)有相似生物学特性的一种蛋白质，其分子量及结合生物素的能力与鸡蛋清中的亲和素相似，等电点6.0，非特异性结合远比亲和素低；SA是四聚体蛋白，大小为66KDa。一分子链霉亲和素可以高度特异性地与四分子生物素结合，两者之间的亲和力极为强烈，链霉亲和素-生物素复合物的解离常数处于10mol/L数量级。
[0003]在目前的体外诊断行业(IVD)和生物研究方面，链霉亲和素的四聚体主要应用到酶联免疫分析，以及与生物素结合应用于生物研究。在体外诊断行业研究开发免疫检测试剂盒时，其中有用到标记物。
[0004]然而，在目前的生物研究和诊断应用中，四价的链霉亲和素仍然具有一些显著缺陷。第一，在市场上研发的组成试剂盒的成分中，其中一个组分是其中一个抗体标记生物素，其与四价的链霉亲和素标记荧光标记物的混合物进行结合，形成一个试剂盒组分。此种方法组成的试剂盒在后期测试和稳定性测试时，信号在短期内一直不稳定会下降。后来研究发现，此标记方法存在一个弊端，抗体标记生物素再和四价的链霉亲和素标记荧光标记物的混合物结合就会容易聚集形成大的聚体，继而短时间内就会产生沉淀。这一不稳定性使得试剂盒研发受阻。第二，人们在开发试剂盒时用抗体直接标记荧光标记物，以取代上面提到的方法。经过测试信号和稳定性实验研究，发现此方法虽然通过调节可减少沉淀的产生，但是还是容易产生沉淀以及不稳定性仍然存在。
[0005]使用以上的方法所研发的试剂盒，其效果仍然不理想，仍然有容易形成沉淀这一现象。
[0006]因此，本领域迫切需要开发一种改进的能够显著提高检测体系的稳定性的利用链霉亲和素进行体外诊断检测或生物研究的方法。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的就是提供一种改进的能够显著提高检测体系的稳定性的利用链霉亲和素进行体外诊断检测或生物研究的方法。
[0008]在本专利技术的第一方面，提供了一种检测体系，所述检测体系包括：
[0009](a)一种多元复合物，所述多元复合物具有如式I所示的结构，
[0010](A-B)-(C-D
m
)
n
ꢀꢀ
(式I)
[0011]式中的各元件包括：
[0012]A为第二结合蛋白，所述第二结合蛋白可以特异性地结合于目标分析物；
[0013]B为生物素；
[0014]C为所述单价链霉亲和素四聚体；
[0015]D为荧光标记物；
[0016]“-”
为键或连接基团；
[0017]并且，m为1到6之间的实数；
[0018]并且，n为2到8之间的实数；
[0019](b)第一结合蛋白，所述第一结合蛋白交联于固相载体Z0，并且所述第一结合蛋白可以特异性地结合于目标分析物；
[0020](c)任选的目标分析物；
[0021]其中，所述第一结合蛋白和第二结合蛋白可分别与目标分析物的结合，两者互相之间不具有竞争性。
[0022]在另一优选例中，所述荧光标记物为藻红蛋白rPE。
[0023]在另一优选例中，所述单价链霉亲和素四聚体中，包含链霉亲和素野生型单体和链霉亲和素突变体单体。
[0024]在另一优选例中，所述链霉亲和素突变体单体不具有结合生物素的功能。
[0025]在另一优选例中，所述链霉亲和素野生型单体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0026]在另一优选例中，所述链霉亲和素突变体单体中，包括基于链霉亲和素野生型单体的以下突变：N12A、S16D和S34A。
[0027]在另一优选例中，所述链霉亲和素突变体单体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
[0028]在另一优选例中，所述单价链霉亲和素四聚体中，所述链霉亲和素野生型单体和链霉亲和素突变体单体的摩尔比为1：3。
[0029]在另一优选例中，所述单价链霉亲和素四聚体中，可包括用于蛋白质纯化的标签。
[0030]在另一优选例中，所述标签的序列位于链霉亲和素野生型单体和/或链霉亲和素突变体单体的N端、C端或中间。
[0031]在另一优选例中，所述标签包括：His标签、GST标签、Trx标签、MBP标签、HA标签、c-Myc标签、Flag标签，或其组合。
[0032]在另一优选例中，所述第二结合蛋白选自下组：抗原、抗体、配体、受体或其组合。
[0033]在另一优选例中，所述m为1到6之间的正整数。
[0034]在另一优选例中，所述m为1、2、3、4、5或6。
[0035]在另一优选例中，所述m为2、3或4。
[0036]在另一优选例中，所述n为3到8之间的正整数。
[0037]在另一优选例中，所述n为3、4、5、6、7或8。
[0038]在另一优选例中，所述n为3或4。
[0039]在另一优选例中，所述多元复合物的浓度为0.01至0.4mg/ml，较佳地0.015至0.25mg/ml，更佳地0.03至0.07mg/ml。
[0040]在另一优选例中，所述第一结合蛋白选自下组：抗原、抗体、配体、受体或其组合。
[0041]在另一优选例中，所述固相载体材质选自下组：金属、玻璃、胶体、塑料或其组合。
[0042]在另一优选例中，所述的固相载体材质包括：均聚物、共聚物、或其组合。
[0043]在另一优选例中，所述的固相载体材质选自下组：聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、或其组合。
[0044]在另一优选例中，所述的固相载体材质选自下组：微球、微孔板、板条、试管、或其组合。
[0045]在另一优选例中，所述的Z0为微球(bead)、颗粒(particle)或磁珠。
[0046]在另一优选例中，所述检测体系中，所述Z0的浓度，因为检测平台不同，偏差较大，为1
×
104至1.0
×
108个/mL，较佳地为1
×
104至1.5
×
107个/mL，更佳地为2
×
104至1.5
×
107个/mL。
[0047]在另一优选例中，所述目标分析物包括：抗原、抗体、配体、受体、小分子，或其组合。
[0048]在本专利技术的第二方面，提供了一种如本专利技术第一方面所述的检测体系的用途，用于检测样本中是否含有目标分析物。
[0049]在另一优选例中，所述样本为离体样本或体外样本。
[0050]在另一优选例中，所述样本来源于全血，优选为血清。
[0051]在另一优选例中，当所述样本中含有目标分析物时，从分离自所述检测体系的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测体系，其特征在于，所述检测体系包括：(a)一种多元复合物，所述多元复合物具有如式I所示的结构，(A-B)-(C-D
m
)
n
ꢀꢀꢀꢀꢀ
(式I)式中的各元件包括：A为第二结合蛋白，所述第二结合蛋白可以特异性地结合于目标分析物；B为生物素；C为所述单价链霉亲和素四聚体；D为荧光标记物；
“-”
为键或连接基团；并且，m为1到6之间的实数；并且，n为2到8之间的实数；(b)第一结合蛋白，所述第一结合蛋白交联于固相载体Z0，并且所述第一结合蛋白可以特异性地结合于目标分析物；(c)任选的目标分析物；其中，所述第一结合蛋白和第二结合蛋白可分别与目标分析物的结合，两者互相之间不具有竞争性。2.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述荧光标记物为藻红蛋白rPE。3.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述单价链霉亲和素四聚体中，包含链霉亲和素野生型单体和链霉亲和素突变体单体。4.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述多元复合物的浓度为0.01至0.4mg/ml，较佳地0.015至0.25mg/ml，更佳地0.03至0.07mg/ml。5.一种如权利要求1所述的检测体系的用途，其特征在于，用于检测样本中是否含有目标分析物。6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，当所述样本中含有目标分析物时，从分离自所述检测体系的固相载体中，可以检测到所述荧...

【专利技术属性】
技术研发人员：李春梅，蔡勇华，李米雪，
申请(专利权)人：上海透景诊断科技有限公司，
类型：发明
国别省市：