一种测定索玛鲁肽生物活性的方法技术

本发明专利技术公开了一种测定索玛鲁肽生物活性的方法，属于药物分析技术领域，具体涉及一种糖尿病动物模型的构建方法，包括：普通喂养阶段，即将健康大鼠采用大鼠维持饲料喂养3

【技术实现步骤摘要】
一种测定索玛鲁肽生物活性的方法


[0001]本专利技术属于药物分析
，具体涉及一种测定索玛鲁肽生物活性的方法。

技术介绍

[0002]索玛鲁肽（Semaglutide）是新一代胰高血糖素样肽（GLP
‑
1）受体激动剂，分子式为C
187
H
291
N
45
O
59
，分子量为4113.58，半衰期约7 d，是基于利拉鲁肽的基本结构而开发的长效剂型。与胰岛素治疗相比，GLP
‑
1RA具有葡萄糖依赖性促胰岛素分泌的特性，可以降低低血糖事件的发生风险，延缓胃排空和中枢性食欲抑制作用，在平稳降低血糖的同时还可以控制体重。索玛鲁肽已于2017年10月获得美国食品药品管理局（FDA）全票通过上市，用于治疗2型糖尿病。

技术实现思路

[0003]索玛鲁肽的生物活性需要2型糖尿病动物进行验证，通过探索研究，发现一种用于构建2型糖尿病动物模型的方法。
[0004]本专利技术的目的在于提供一种糖尿病动物模型的构建方法。
[0005]本专利技术为实现上述目的，构建了一种糖尿病动物模型。
[0006]普通喂养阶段：将健康大鼠采用大鼠维持饲料喂养3
‑
10 d；高脂喂养阶段：对经过普通喂养阶段后的大鼠采用高脂饲料喂养15
‑
35 d；药物注射阶段：对经过高脂喂养阶段后的大鼠注射STZ（链佐脲菌素）枸橼酸钠溶液，监测大鼠血糖，血糖高于12 mmol/L时确定该2型糖尿病动物模型建立完毕；高脂饲料为含有微量添加物的大鼠维持饲料，微量添加物为硫代乙酰胺和胆固醇油酸酯。
[0007]优选地，硫代乙酰胺的使用量为大鼠维持饲料的0.01
‑
0.03wt%。
[0008]优选地，胆固醇油酸酯的使用量为大鼠维持饲料的0.1
‑
0.8wt%。
[0009]优选地，高脂饲料以大鼠维持饲料为主体饲料，配以脂类物质、糖类物质、蛋白添加物、植物粉添加物、微量添加物制备得到；脂类物质为猪油、大豆油中一种或混合；糖类物质为蔗糖、果糖、白砂糖中任一种或混合多种；蛋白添加物为酪蛋白；植物粉添加物为稻草粉、芦苇粉、仙人掌粉中一种或混合。
[0010]优选地，高脂饲料中脂类物质的使用量为大鼠维持饲料的20
‑
40wt%。
[0011]优选地，高脂饲料中糖类物质的使用量为大鼠维持饲料的12
‑
36wt%。
[0012]优选地，高脂饲料中蛋白添加物的使用量为大鼠维持饲料的3
‑
9wt%。
[0013]优选地，高脂饲料中植物粉添加物的使用量为大鼠维持饲料的2
‑
6wt%。
[0014]优选地，药物注射阶段大鼠采用高脂饲料喂养。
[0015]优选地，STZ枸橼酸钠溶液的注射剂量为8
‑
24 mg/kg。STZ（链佐脲菌素）是糖尿病
动物模型造模中常用的化学损伤药物，已知注射剂量在50 mg/kg以上便可以得到典型症状的糖尿病动物模型，更严重的会导致造模动物的死亡，而小剂量注射又容易导致糖尿病动物模型造模失败。本专利技术意外发现一种糖尿病动物模型的新型构建方法，通过含有硫代乙酰胺和胆固醇油酸酯的高脂饲料喂养，仅需要小剂量的STZ便可以成功造模糖尿病动物。硫代乙酰胺可以对动物肝造成损伤，而极低剂量并不会对造模动物造成严重的肝损伤，而本专利技术发现，在使用极少量硫代乙酰胺、胆固醇油酸酯作为微量添加物引入高脂饲料后，再辅以注射少量STZ即能成功得到糖尿病动物模型，表明硫代乙酰胺、胆固醇油酸酯与STZ在本专利技术方法的使用下具有构建糖尿病动物模型的作用。
[0016]优选地，大鼠注射STZ枸橼酸钠溶液前采用医用乙醇消毒腹部，腹腔注射。
[0017]优选地，STZ枸橼酸钠溶液配制时，采用0.01
‑
0.3 M的枸橼酸钠缓冲液配制得到1
‑
15 mg/mL的STZ枸橼酸钠溶液。
[0018]更优选地，N
‑
乙酰
‑
D
‑
葡糖胺
‑6‑
磷酸钠盐枸橼酸钠溶液配制时，采用0.01
‑
0.3 M的枸橼酸钠缓冲液配制得到1
‑
15 mg/mL的N
‑
乙酰
‑
D
‑
葡糖胺
‑6‑
磷酸钠盐枸橼酸钠溶液。
[0019]更优选地，药物注射阶段中，在注射完STZ枸橼酸钠溶液后，可以继续注射N
‑
乙酰
‑
D
‑
葡糖胺
‑6‑
磷酸钠盐枸橼酸钠溶液，注射剂量为0.3
‑
3.6 mg/kg。STZ枸橼酸钠溶液与N
‑
乙酰
‑
D
‑
葡糖胺
‑6‑
磷酸钠盐枸橼酸钠溶液联合使用提高了糖尿病动物模型的成功率，并降低了糖尿病动物的死亡率。
[0020]本专利技术的目的在于提供一种测定索玛鲁肽生物活性的方法。
[0021]本专利技术为实现上述目的所采取的技术方案为：一种测定索玛鲁肽生物活性的方法，包括：对经过上述方法构建的2型糖尿病大鼠采用含有索玛鲁肽的大鼠维持饲料喂养5
‑
10 d，通过监测糖尿病大鼠的血糖来测定索玛鲁肽的生物活性。索玛鲁肽生物活性的方法是在构建成功2型糖尿病大鼠后，在稳定、可控的条件下测试索玛鲁肽生物活性，通过改变糖尿病动物模型构建方法中的变量，得到糖尿病程度不同的大鼠并验证对应的索玛鲁肽生物活性。本专利技术的重点为糖尿病动物模型的构建。
[0022]优选地，大鼠维持饲料中加入索玛鲁肽的量为0.001
‑
0.003wt%。
[0023]优选地，大鼠的每日喂食量为体重的5
‑
10wt%。
[0024]本专利技术采用含硫代乙酰胺和胆固醇油酸酯的高脂饲料喂养大鼠，并注射STZ枸橼酸钠溶液，成功构建得到糖尿病大鼠，具有如下有益效果：本专利技术成功得到2型糖尿病大鼠，造模成功率高（70
‑
100%），大鼠死亡率低（3
‑
20%）。因此，本专利技术建立了一种测定索玛鲁肽生物活性的方法。
附图说明
[0025]图1为大鼠血糖升高率图；图2为大鼠体重下降率图；图3为糖尿病大鼠造模成功率图；图4为大鼠死亡率图。
具体实施方式
[0026]以下结合具体实施方式和附图对本专利技术的技术方案作进一步详细描述。
[0027]实施例1：一种糖尿病动物模型的构建方法实施动物：SPF级健康Wistar大鼠，体重200 g。饲养环境：室温25℃，相对湿度为60%。
[0028]普通喂养阶段：将健康大鼠采用大鼠维持饲料喂养7 d，每日喂食量为体重的8wt%。最后一天禁食12 h本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种测定索玛鲁肽生物活性的方法，包括：按糖尿病动物模型的构建方法构建2型糖尿病大鼠模型，所述大鼠采用高脂饲料喂养，并配合STZ枸橼酸钠液注射；所述高脂饲料为含有微量添加物的大鼠维持饲料，微量添加物为硫代乙酰胺和胆固醇油酸酯；所述STZ枸橼酸钠液的注射剂量为8
‑
24 mg/kg；对经过上述构建的2型糖尿病大鼠采用含有索玛鲁肽的大鼠维持饲料喂养5
‑
10 d，通过监测糖尿病大鼠的血糖来测定索玛鲁肽的生物活性。2.根据权利要求1所述的一种测定索玛鲁肽生物活性的方法，其特征是：所述糖尿病动物模型的构建方法为：普通喂养阶段：将健康大鼠采用大鼠维持饲料喂养3
‑
10 d；高脂喂养阶段：对经过普通喂养阶段后的大鼠采用高脂饲料喂养15
‑
35 d；药物注射阶段：对经过高脂喂养阶段后的大鼠注射STZ枸橼酸钠液，监测大鼠血糖，血糖高于12 mmol/L时确定该2型糖尿病动物模型建立完毕。3.根据权利要求1所述的一种测定索玛鲁肽生物活性的方法，其特征是：所述硫代乙酰胺的使用量为大鼠维持饲料的0.01
‑
0.0...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐烨扬，张飞华，马奔，吴潇钿，
申请(专利权)人：浙江湃肽生物有限公司，
类型：发明
国别省市：