乙酰基六肽-8的固相合成方法技术

本发明专利技术公开了一种乙酰基六肽

【技术实现步骤摘要】
乙酰基六肽
‑
8的固相合成方法


[0001]本专利技术属于化妆品
，具体涉及一种乙酰基六肽
‑
8的固相合成方法。

技术介绍

[0002]乙酰基六肽
‑
8别名乙酰基六肽
‑
3，六胜肽，商业名为阿基瑞林，它是优质的祛皱原料，其抗皱活性高，副作用小，现已成为风靡世界的祛皱原料，在各高端化妆品系列中都有应用；能局部阻断神经传递肌肉收缩讯息，影响皮囊神经传导，使脸部肌肉放松，能够平扶动态纹、静态纹及细纹；有效重新组织胶原弹力，可以增加弹力蛋白的活性，使脸部线条放松，皱纹抚平改善松弛，作为抗皱成分，且效果极佳。
[0003]现有技术如公开号CN102603869A公开了一种六胜肽的合成方法；采用不同的制备方法合成了两个三肽片段：固相合成方法制备了NH2‑
Gln(Trt)
‑
Arg(pbf)
‑
Arg(pdf)
‑
NH
‑
resin肽树脂，液相合成方法制备了Fmoc
‑
Glu(
t
Bu)
‑
Glu(
t
Bu)
‑
Met
‑
COOH，再将两者进行偶联、脱保护、酰基化、裂解，即得六胜肽。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种对氨基酸具有较高缩合效率，同时能够得到较高收率与纯度的乙酰基六肽
‑
8的固相合成方法。r/>[0005]本专利技术为实现上述目的所采取的技术方案为：一种乙酰基六肽
‑
8的固相合成方法，包括以下步骤：（1）溶胀树脂、脱保护：将氨基树脂置于反应柱中溶胀，洗涤，干燥，脱保护，得到预处理后的树脂；（2）固相接肽反应：将Fmoc
‑
Arg(pdf)
‑
OH与缩合剂溶解于溶剂中，加入预处理后的树脂，搅拌反应，抽滤，洗涤，脱保护，得到接上第一个氨基酸的树脂；然后依次偶联精氨酸、谷氨酰胺、甲硫氨酸、谷氨酸、谷氨酸，得到肽树脂A；（3）Ac反应和肽的收缩：将肽树脂A置于反应柱中，然后加入二氯甲烷、乙酸酐、吡啶和缩合剂进行反应，洗涤，干燥，得到肽树脂B；（4）肽链切割：将肽树脂B置于裂解液中进行裂解，过滤，离心，静置，减压干燥，纯化，浓缩，冻干，得到乙酰基六肽
‑
8；步骤（2）中缩合剂包括改性N
‑
羟基邻苯二甲酰亚胺；其结构式如下：。
[0006]本专利技术采用对二甲基醌改性N
‑
羟基邻苯二甲酰亚胺制得缩合剂，其缩短了缩合反
应的时间，提高了其对氨基酸的缩合效率，且不易发生消旋化反应；将改性N
‑
羟基邻苯二甲酰亚胺作为乙酰基六肽
‑
8固相合成的缩合剂，其提高了乙酰基六肽
‑
8的收率与纯度。
[0007]优选地，在本专利技术的一些实施例中，改性N
‑
羟基邻苯二甲酰亚胺为对二甲基醌改性N
‑
羟基邻苯二甲酰亚胺。
[0008]优选地，在本专利技术的一些实施例中，步骤（1）中，氨基树脂的取代度为0.45~0.65 mmol/g，溶胀20~40 min。
[0009]优选地，在本专利技术的一些实施例中，步骤（1）中，氨基树脂为Rink Amide Resin树脂。
[0010]进一步优选地，在本专利技术的一些实施例中，步骤（1）中，溶胀树脂、脱保护为：按重量份计，将1.5~2.2份氨基树脂置于反应柱中，用8~12份DMF洗涤1~2次，抽干，然后加入8~15份DMF溶胀，并用氮气吹拂搅拌20~40 min，抽干液体，再用10~15份DMF洗涤1~2次，抽干；加入5~8份10~20% 哌啶/DMF（v/v）溶液，脱保护5~10 min，抽干，用10~15份DMF洗涤1~2次，抽干，再加入5~8份10~20% 哌啶/DMF（v/v）溶液，脱保护5~10 min，分别加入5~10份DMF、5~10份DCM洗涤树脂3~5次。
[0011]优选地，在本专利技术的一些实施例中，步骤（2）中，缩合剂还包括HOBt、DCC、DIC、EDC中的至少一种。
[0012]进一步优选地，在本专利技术的一些实施例中，步骤（2）中，缩合剂为改性N
‑
羟基邻苯二甲酰亚胺与DIC；其中改性N
‑
羟基邻苯二甲酰亚胺与DIC的重量比为1：1~2。
[0013]另一方面，本专利技术将改性N
‑
羟基邻苯二甲酰亚胺与DIC作为复合缩合剂联合使用，进一步提高了氨基酸的缩合效率，进而得到收率与纯度较高的乙酰基六肽
‑
8。
[0014]优选地，在本专利技术的一些实施例中，步骤（2）中，按重量份计，Fmoc
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Arg(pdf)
‑
OH为2.5~3.5份、缩合剂为0.5~0.8份、溶剂为5~10份。
[0015]进一步优选地，在本专利技术的一些实施例中，步骤（2）中，固相接肽反应：将2.5~3.5份Fmoc
‑
Arg(pdf)
‑
OH与0.5~0.8份缩合剂溶解于5~10份溶剂中，加入1.25~1.75份预处理后的树脂，氮气吹拂搅拌反应1~2 h，抽滤除去反应液，用DMF洗涤1~2次，抽干，然后加入5~8份10~20% 哌啶/DMF（v/v）溶液，脱保护5~10 min，分别加入5~10份DMF、5~10份DCM洗涤树脂3~5次，得到接上第一个氨基酸的树脂；然后按上述方法依次偶联2.5~3.5份精氨酸、1.85~2.5份谷氨酰胺、2.2~3.0份甲硫氨酸、1.75~2.25份谷氨酸、1.8~3.1份谷氨酸，得到肽树脂A。
[0016]优选地，在本专利技术的一些实施例中，步骤（2）中，缩合剂的制备方法为：将4
‑
氨基邻苯二甲酸溶于无水乙醇中，然后缓慢滴加浓硫酸进行加热回流反应，旋蒸，抽滤，洗涤，干燥，用乙酸乙酯溶解，过滤，重结晶，得到4
‑
氨基邻苯二甲酸二乙酯；将4
‑
氨基邻苯二甲酸二乙酯置于盐酸、水、催化剂中溶解，在冰浴条件下，滴加亚硝酸钠溶液进行重氮化反应得到4
‑
氨基邻苯二甲酸重氮盐；然后加入二甲基醌、碳酸氢钠在冰浴条件下进行反应得到反应物a；将反应物a与氯化亚砜置于容器中，在磁力搅拌作用下进行加热回流反应3~5 h，反应结束后，得到反应物b，将反应物b溶于二氯甲烷中，加入盐酸羟胺，在室温下搅拌反应8~12 h，抽滤，水洗，干燥，得到缩合剂。
[0017]优选地，在本专利技术的一些实施例中，步骤（3）为：按重量份计，肽树脂A为0.5~1.5份、二氯甲烷为15~30份、乙酸酐为0.25~0.45份、吡啶为0.1~0.2份和缩合剂为0.15~0.25份。
[0018]优选地，在本专利技术的一些实施例中，步骤（3）中，缩合剂为TBTU、HOBt、PyB本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种乙酰基六肽
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8的固相合成方法，包括以下步骤：（1）溶胀树脂、脱保护：将氨基树脂置于反应柱中溶胀，洗涤，干燥，脱保护，得到预处理后的树脂；（2）固相接肽反应：将Fmoc
‑
Arg(pdf)
‑
OH与缩合剂溶解于溶剂中，加入所述预处理后的树脂，搅拌反应，抽滤，洗涤，脱保护，得到接上第一个氨基酸的树脂；然后依次偶联精氨酸、谷氨酰胺、甲硫氨酸、谷氨酸、谷氨酸，得到肽树脂A；（3）Ac反应和肽的收缩：将所述肽树脂A置于反应柱中，然后加入二氯甲烷、乙酸酐、吡啶和缩合剂进行反应，洗涤，干燥，得到肽树脂B；（4）肽链切割：将所述肽树脂B置于裂解液中进行裂解，过滤，离心，静置，减压干燥，纯化，浓缩，冻干，得到乙酰基六肽
‑
8；所述步骤（2）中缩合剂包括改性N
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羟基邻苯二甲酰亚胺；其结构式如下：。2.根据权利要求1所述的一种乙酰基六肽
‑
8的固相合成方法，其特征是：所述改性N
‑
羟基邻苯二甲酰亚胺为对二甲基醌改性N
‑
羟基邻苯二甲酰亚胺。3.根据权利要求1所述的一种乙酰基六肽
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8的固相合成方法，其特征是：所述步骤（1）中，氨基树脂的取代度为0.45~0.65 mmol/g，溶胀20~40 min。4.根据权利要求1所述的一种乙酰基六肽
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8的固相合成方法，其特征是：所述步骤（2）中，缩合剂还包括HOBt、DCC、DIC、EDC中的至少一种。5.根据权利要求1所述的一种乙酰基六肽
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8的固相合成方法，其特征是：所述步骤（2）中，缩合剂为改性N
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羟基邻苯二甲酰亚胺与DIC；其中改性N
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羟基邻苯二甲酰亚胺与DIC的重量比为1：1~2。6.根据权利要求1所述的一种乙酰基六...

【专利技术属性】
技术研发人员：王辉平，刘慧敏，应佳伟，周永兵，
申请(专利权)人：浙江湃肽生物有限公司南京分公司，
类型：发明
国别省市：