一种虎杖根部愈伤组织的诱导培养基及其应用制造技术

本发明专利技术涉及植物组织培养技术领域，具体公开了一种虎杖根部愈伤组织的诱导培养基及其应用。本发明专利技术的诱导培养基，包括以下浓度的组分：大量元素3.75～5.19g/L、微量元素38.82～50.64mg/L、铁盐60～70mg/L、有机物质101.56～201.94mg/L和激素1.8～2.5mg/L；有机物质为肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素、甘氨酸、谷氨酸和白藜芦醇。本发明专利技术以虎杖根部分生组织为材料，对诱导培养基进行相应优化，可以显著提高虎杖根部愈伤组织的诱导率，诱导培养基的组分之间相互协同，促进愈伤组织的生长繁殖，有利于愈伤组织的生长。于愈伤组织的生长。

【技术实现步骤摘要】
一种虎杖根部愈伤组织的诱导培养基及其应用


[0001]本专利技术涉及植物组织培养
，尤其是涉及一种虎杖根部愈伤组织的诱导培养基及其应用。

技术介绍

[0002]虎杖(Reynoutria japonica Houtt.)，蓼科，多年生草本植物。根据记载，虎杖的根茎具有活血化瘀，清热利湿、化痰止咳的作用，同时也具有止血、抗炎等功效。有研究表明虎杖的提取物中主要的活性成分为白藜芦醇和大黄素，白藜芦醇具有抑制黑色素细胞的活性、促进巨噬细胞活性的作用、对降低血脂、抑制血小板活性等具有相关药理作用。同时，白藜芦醇还具有抗氧化、抗自由基，抗菌、消炎、抗过敏等多种有益功效。
[0003]虎杖根部作为主要的药用部位，根部白藜芦醇的含量也显著高于茎、叶。通过根部诱导得到的愈伤组织中的白藜芦醇含量也明显高于茎、叶诱导得到的愈伤组织。因此通过虎杖根部诱导愈伤组织是一种有效获取高产量白藜芦醇的途径。
[0004]目前，大量的研究报道了通过虎杖叶片、叶柄、茎等组织诱导愈伤组织的方法，对虎杖根部愈伤组织的诱导研究较少，并且还面临着虎杖根部愈伤组织诱导率低的问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种虎杖根部愈伤组织的诱导培养基及其应用，本专利技术以虎杖根部分生组织为材料，对诱导培养基进行相应优化，该诱导培养基可以显著提高虎杖根部愈伤组织的诱导率，有利于愈伤组织的生长。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：
[0007]第一目的，本专利技术提供了一种虎杖根部愈伤组织的诱导培养基，包括以下浓度的组分：
[0008]大量元素3.75～5.19g/L、微量元素38.82～50.64mg/L、铁盐60～70mg/L、有机物质101.56～201.94mg/L和激素1.8～2.5mg/L；
[0009]有机物质为肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素、甘氨酸、谷氨酸和白藜芦醇。
[0010]本专利技术以虎杖根部分生组织为材料，通过设计虎杖根部愈伤组织的诱导培养基的配方，以提高虎杖根部愈伤组织的诱导率。
[0011]诱导培养基中加入白藜芦醇，白藜芦醇具有较强的抗氧化，及自由基清除能力，可缓解植物愈伤组织诱导过程中的氧化，防止外植体褐变，有效提高诱导率。
[0012]作为本专利技术所述诱导培养基的优选实施方式，诱导培养基包括以下浓度的组分：
[0013]大量元素5.04g/L、微量元素40.36mg/L、铁盐65.1mg/L、有机物质101.7mg/L和激素2.0mg/L。
[0014]当诱导培养基选自上述配方时，虎杖根部愈伤组织的诱导率最高。
[0015]作为本专利技术所述诱导培养基的优选实施方式，所述有机物质为100～200mg/L肌醇、0.5～0.6mg/L烟酸、0.55～0.6mg/L盐酸吡哆醇、0.15～0.2mg/L盐酸硫胺素、0.12～
0.18mg/L甘氨酸、0.12～0.18mg/L谷氨酸和0.12～0.18mg/L白藜芦醇。
[0016]作为本专利技术所述诱导培养基的优选实施方式，所述有机物质为100mg/L肌醇、0.5mg/L烟酸、0.6mg/L盐酸吡哆醇、0.15mg/L盐酸硫胺素、0.15mg/L甘氨酸、0.15mg/L谷氨酸和0.15mg/L白藜芦醇。
[0017]作为本专利技术所述诱导培养基的优选实施方式，所述大量元素为2.0～3.0g/L硝酸钾、0.3～0.35g/L硫酸镁、0.3～0.4g/L氯化钙、0.8～1.0g/L氯化铵、0.15～0.20g/L磷酸二氢钾和0.20～0.24g/L磷酸氢二钠中的至少一种；所述微量元素为8.0～10mg/L H3BO3、25～30mg/L MnSO4·
4H2O、5.5～7.2mg/L ZnSO4·
7H2O、0.3～3.4mg/L Na2MoO4·
2H2O、0.01～0.02mg/L CuSO4·
5H2O、0.01～0.02mg/L CoCl2·
6H2O中的至少一种。
[0018]更优选地，所述大量元素为3.0g/L硝酸钾、0.3g/L硫酸镁、0.3g/L氯化钙、1.0g/L氯化铵、0.20g/L磷酸二氢钾和0.24g/L磷酸氢二钠的复配；所述微量元素为9.0mg/L H3BO3、25mg/L MnSO4·
4H2O、6.0mg/L ZnSO4·
7H2O、3.4mg/L Na2MoO4·
2H2O、0.01mg/L CuSO4·
5H2O、0.01mg/L CoCl2·
6H2O的复配。
[0019]本专利技术诱导培养基中加入大量元素和微量元素有利于虎杖根部的分化培养，提高虎杖根部愈伤组织的诱导率。
[0020]作为本专利技术所述诱导培养基的优选实施方式，所述激素包括萘乙酸和/或2，4
‑
D。
[0021]更优选地，激素为0.4～0.9mg/L萘乙酸和1.4～1.6mg/L 2，4
‑
D的复配。
[0022]当采用上述激素种类时，可以提高虎杖根部的出愈时间和诱导率。
[0023]更优选地，铁盐为27.8mg/L FeSO4·
7H2O、37.3mg/L Na2
‑
EDTA
·
2H2O。
[0024]第二目的，本专利技术提供了一种如上述诱导培养基的制备方法，包括以下步骤：
[0025]取纯化水，依次加入大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素混合，定容至1000ml，使用酸或碱调节体系的pH值至5.8～6.0，分装灭菌，即得诱导培养基。灭菌条件为：121℃，15min。
[0026]第三目的，本专利技术提供了一种诱导虎杖干细胞的方法，包括以下步骤：
[0027]S1、取幼嫩虎杖的根尖，浸泡、清洁，使用消毒液对根尖消毒，蒸馏水冲洗，获得预处理的外植体；
[0028]S2、将经过预处理的外植体剪切，然后接种于如上述的诱导培养基中诱导培养；
[0029]S3、于黑暗条件下培养3～4周。
[0030]作为本专利技术所述诱导虎杖干细胞的方法的优选实施方式，所述消毒液包括以下浓度的组分：0.10～0.12％HgCl2、20～50mM K2HPO4、20～50mM KH2PO4、50～100mM NaCl；pH6.0～6.5，渗透压330～350mOsm/kg。
[0031]采用本专利技术配方的消毒液可以对虎杖根部进行有效消毒，污染率仅为5～7％，且褐变率控制在10～12％。
[0032]所述消毒液包括以下浓度的组分：0.10％HgCl2、20mM K2HPO4、20mM KH2PO4、50mM NaCl；pH6.0，渗透压330mOsm/kg。
[0033]采用上述优选的消毒液对虎杖根部进行消毒，可以降低污染率，且褐变率控制在12％以内。
[0034]现有技术通常采用的培养基为MS培养基添加不同浓本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种虎杖根部愈伤组织的诱导培养基，其特征在于，包括以下浓度的组分：大量元素3.75～5.19g/L、微量元素38.82～50.64mg/L、铁盐60～70mg/L、有机物质101.56～201.94mg/L和激素1.8～2.5mg/L；有机物质为肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素、甘氨酸、谷氨酸和白藜芦醇。2.如权利要求1所述的诱导培养基，其特征在于，包括以下浓度的组分：大量元素5.04g/L、微量元素40.36mg/L、铁盐65.1mg/L、有机物质101.7mg/L和激素2.0mg/L。3.如权利要求1所述的诱导培养基，其特征在于，所述有机物质为100～200mg/L肌醇、0.5～0.6mg/L烟酸、0.55～0.6mg/L盐酸吡哆醇、0.15～0.2mg/L盐酸硫胺素、0.12～0.18mg/L甘氨酸、0.12～0.18mg/L谷氨酸和0.12～0.18mg/L白藜芦醇。4.如权利要求1所述的诱导培养基，其特征在于，所述有机物质为100mg/L肌醇、0.5mg/L烟酸、0.6mg/L盐酸吡哆醇、0.15mg/L盐酸硫胺素、0.15mg/L甘氨酸、0.15mg/L谷氨酸和0.15mg/L白藜芦醇。5.如权利要求1所述的诱导培养基，其特征在于，所述大量元素为2.0～3.0g/L硝酸钾、0.3～0.35g/L硫酸镁、0.3～0.4g/L氯化钙、0.8～1.0g/L氯化铵、0.15～0.20g/L磷酸二氢钾和0.20～0.24g/L磷酸氢二钠中的至少一种；所述微量元素为8.0～10mg/L H3BO3、25～30mg...

【专利技术属性】
技术研发人员：邵静，陈玉容，陈如琼，
申请(专利权)人：广州远想医学生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：