一种乳酸氧化酶保护剂及乳酸氧化酶固定化方法技术

本发明专利技术提供了一种乳酸氧化酶保护剂，其包含乳酸氧化酶稳定剂，所述乳酸氧化酶稳定剂包含以下质量百分含量的组分：多元醇5％～15％、L

【技术实现步骤摘要】
一种乳酸氧化酶保护剂及乳酸氧化酶固定化方法


[0001]本专利技术属于固定化酶生物催化
，具体涉及一种乳酸氧化酶保护剂及乳酸氧化酶固定化方法。

技术介绍

[0002]乳酸氧化酶可将乳酸氧化为乳酸酸和过氧化氢，过氧化氢在电极附近发生氧化还原反应产生电流信号。据此，可通过制备特定的酶电极用来测试待测液中乳酸的含量。然而游离乳酸氧化酶稳定性差易失活，且容易从电极上流失。酶固定化是解决这一问题的良好策略。
[0003]酶共价结合固定化是以共价结合方式将酶固定到一个合适的载体，与非共价、吸附等方式的固定化方法相比，具有最强的结合力，可使酶在固定化体系中漏出更少。当选用载体无合适的结合活性基团，需要使用交联剂使载体与酶相关氨基酸残基共价结合。
[0004]目前，在乳酸氧化酶共价交联固定化中，传统固定方法存在以下缺陷：交联过程中酶活性中心的暴露，交联剂对酶活力的破坏。一般在固定化酶液中加入BSA提升酶液中蛋白质浓度可有效提升酶的稳定性，但由于乳酸氧化酶结构稳定性极差，易失活，BAS对此酶的保护作用并不理想。因此有必要寻求一种优的酶保护剂使固定化乳酸氧化酶具有更高的稳定性和活性。

技术实现思路

[0005]基于此，本专利技术的目的在于提供一种乳酸氧化酶保护剂，其能有效提高固定化过程中乳酸氧化酶的空间稳定性和保护氨基酸活性中心，提升制备得到的固定化乳酸氧化酶的酶活力。
[0006]具体技术方案为：
[0007]一种乳酸氧化酶保护剂，其包含乳酸氧化酶稳定剂，所述乳酸氧化酶稳定剂包含以下质量百分含量的组分：多元醇5％～15％、L
‑
氨基酸5％～10％、非还原性糖10％～20％，余量为水；
[0008]所述L
‑
氨基酸选自L
‑
甘氨酸、L
‑
丝氨酸和L
‑
组氨酸中的至少一种。
[0009]在其中一些实施例中，所述乳酸氧化酶稳定剂包含以下质量百分含量的组分：多元醇5％～10％、L
‑
氨基酸5％～10％、非还原性糖10％～15％，余量为水。
[0010]进一步地，所述乳酸氧化酶稳定剂包含以下质量百分含量的组分：多元醇5％、L
‑
氨基酸10％、非还原性糖10％，余量为水。
[0011]在其中一些实施例中，所述L
‑
氨基酸包括L
‑
甘氨酸。
[0012]进一步地，所述L
‑
氨基酸包括L
‑
甘氨酸和L
‑
丝氨酸。
[0013]进一步地，所述L
‑
甘氨酸和L
‑
丝氨酸的质量比为(1～3)：1。
[0014]进一步地，所述L
‑
甘氨酸和L
‑
丝氨酸的质量比为2:1。
[0015]在其中一些实施例中，所述多元醇选自甘油、丙二醇和山梨糖醇中的至少一种。
[0016]在其中一些实施例中，优选所述多元醇选自甘油。
[0017]在其中一些实施例中，所述非还原性糖选自海藻糖、松三糖和棉子糖中的至少一种。
[0018]在其中一些实施例中，优选所述非还原性糖选自棉子糖。
[0019]在其中一些实施例中，所述多元醇、L
‑
氨基酸、非还原性糖的质量比为(1～5)：(1～10)：(1～10)。
[0020]在其中一些实施例中，优选所述多元醇、L
‑
氨基酸、非还原性糖的质量比为1:2:2。
[0021]在其中一些实施例中，所述乳酸氧化酶保护剂还含有BSA，所述乳酸氧化酶稳定剂与BSA的质量比为(1～20)：(1～5)，且所述乳酸氧化酶稳定剂和BSA分开储存。
[0022]在其中一些实施例中，优选所述乳酸氧化酶稳定剂与BSA的质量比为(1～10)：(1～2)。
[0023]在其中一些实施例中，优选所述乳酸氧化酶稳定剂与BSA的质量比为(1～5)：1。
[0024]进一步地，所述乳酸氧化酶稳定剂与BSA的质量比为3：1。
[0025]本专利技术还提供了上述乳酸氧化酶保护剂在保护乳酸氧化酶活性和/或提高乳酸氧化酶稳定性中的应用。
[0026]在其中一些实施例中，所述乳酸氧化酶保护剂中的乳酸氧化酶稳定剂与乳酸氧化酶的质量比为(1～10)：(1～4)。
[0027]在其中一些实施例中，所述乳酸氧化酶保护剂中的乳酸氧化酶稳定剂与乳酸氧化酶的质量比为(1～5)：1。
[0028]在其中一些实施例中，优选所述乳酸氧化酶稳定剂与乳酸氧化酶的质量比为2.5：1。
[0029]本专利技术还提供了一种乳酸氧化酶固定化方法，其包括以下步骤：
[0030](1)按比例称取所述多元醇、L
‑
氨基酸、非还原糖并先后溶解于水中，获得上述的乳酸氧化酶稳定剂；
[0031](2)取聚合物载体和交联剂加入水中，超声混匀，得到活化的载体；
[0032](3)取步骤(2)获得的活化的载体，加入pH缓冲液中；
[0033](4)按上述比例先后向步骤(3)获得的体系中加入步骤(1)制备得到的乳酸氧化酶稳定剂和BSA；
[0034](5)按上述比例加入乳酸氧化酶，搅拌，得到固定化乳酸氧化酶。
[0035]本专利技术所述固定化乳酸氧化酶是指经过固定化步骤后乳酸氧化酶上结合了聚合物载体和3种稳定剂成分的产物。
[0036]在其中一些实施例中，所述聚合物载体选自壳聚糖、聚乙二醇二胺、聚苯胺、聚氨基苯乙烯、聚丙烯酰胺和聚赖氨酸中的至少一种。
[0037]在其中一些实施例中，优选所述聚合物载体为壳聚糖。
[0038]在其中一些实施例中，所述交联剂选自甲醛、丙二醛、异丁醛和甘油醛中的至少一种。
[0039]在其中一些实施例中，优选所述交联剂为异丁醛。
[0040]在其中一些实施例中，所述PH缓冲液选自N
‑
2羟乙基哌嗪
‑
N
‑2‑
乙烷磺酸缓冲液或磷酸缓冲液。
[0041]在其中一些实施例中，所述聚合物载体在步骤(2)所述体系中的质量分数为5％～20％。
[0042]在其中一些实施例中，优选所述聚合物载体在步骤(2)所述体系中的质量分数为10％～15％。
[0043]进一步地，所述聚合物载体在步骤(2)所述体系中的质量分数为15％。
[0044]在其中一些实施例中，所述交联剂在步骤(2)所述体系中的质量分数为5％～20％。
[0045]在其中一些实施例中，优选所述交联剂在步骤(2)所述体系中的质量分数为5％～10％。
[0046]进一步地，所述交联剂在步骤(2)所述体系中的质量分数为5.5％。
[0047]在其中一些实施例中，所述活化的载体在步骤(3)所述体系中的质量分数为5％～20％。
[0048]在其中一些实施例中，优选所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种乳酸氧化酶保护剂，其特征在于，其包含乳酸氧化酶稳定剂，所述乳酸氧化酶稳定剂包含以下质量百分含量的组分：多元醇5％～15％、L
‑
氨基酸5％～10％、非还原性糖10％～20％，余量为水；所述L
‑
氨基酸选自L
‑
甘氨酸、L
‑
丝氨酸和L
‑
组氨酸中的至少一种。2.根据权利要求1所述的乳酸氧化酶保护剂，其特征在于，所述L
‑
氨基酸包括L
‑
甘氨酸。3.根据权利要求2所述的乳酸氧化酶保护剂，其特征在于，所述L
‑
氨基酸还包含L
‑
丝氨酸，且L
‑
甘氨酸和L
‑
丝氨酸的质量比为(1～3)：1。4.根据权利要求1所述的乳酸氧化酶保护剂，其特征在于，所述多元醇选自甘油、丙二醇和山梨糖醇中的至少一种；和/或，所述非还原性糖选自海藻糖、松三糖和棉子糖中的至少一种。5.根据权利要求1所述的乳酸氧化酶保护剂，其特征在于，其还含有BSA，所述乳酸氧化酶稳定剂与BSA的质量比为(1～20)：(1～5)，且所述乳酸氧化酶稳定剂和BSA分开储存。6.根据权利要求1
‑
5任一项所...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴克南，景振辉，陈明嘉，
申请(专利权)人：广州万孚生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：