一种神经元特异性烯醇化酶的冻干方法技术

本发明专利技术属于冻干技术领域，具体涉及一种神经元特异性烯醇化酶的冻干方法。所述冻干方法包括以下步骤：取缓冲液将NSE溶解，制成NSE试剂，放入真空冷冻干燥机内进行冻干；其中，所述缓冲液包括如下组分：三羟甲基氨基甲烷、KCl、十二水磷酸氢二钠、硫酸镁、海藻糖、BSA。该冻干方法能有效保存神经元特异性烯醇化酶，有利于保持其最大的活性。保持其最大的活性。

【技术实现步骤摘要】
一种神经元特异性烯醇化酶的冻干方法


[0001]本专利技术属于冻干
，具体涉及一种神经元特异性烯醇化酶的冻干方法。

技术介绍

[0002]神经元特异性烯醇化酶(Neuron
‑
Specific Enolase，NSE)是一种分子量约78000的酸性蛋白酶。NSE是小细胞肺癌的重要标志物之一，可用于鉴别诊断，以及检测小细胞肺癌放疗、化疗后的治疗效果。NSE还可用于神经母细胞瘤和肾母细胞瘤的鉴别诊断，对神经母细胞瘤的早期诊断亦有较高的临床应用价值。
[0003]NSE是一种不稳定的生物活性物质，在常温和2
‑
8℃环境中会迅速丧失活性。当NSE作为试剂盒组分使用时，如果不进行冻干处理，会造成检测错误并导致试剂盒失效。使用特殊的缓冲体系溶解NSE并将其冻干为干粉，可以长时间保持其活性，保证试剂盒的稳定性和有效性。
[0004]使用一般缓冲液溶解NSE，在常温(10
‑
30℃)环境下可以保持活性3天、在2
‑
8℃条件下可保持活性3个月、在
‑
20℃条件下可保持活性9个月。保存时间较短，不利于试剂盒产品的生产、储存及应用。
[0005]中国专利申请CN 106568976 A公开了一种神经元特异性烯醇化酶稳定剂及其制备方法，涉及神经元特异性烯醇化酶稳定剂，通过如下原料制备而成：Tris
·
HCl缓冲液、NaCl、蔗糖、海藻糖、酪蛋白、牛血清白蛋白、PEG6000、赖氨酸、乙二胺四乙酸二钠、二硫苏糖醇、甘油、Tween
‑
20、TritonX
‑
100、终浓度抑肽酶、Proclin300，Millipore超纯水作为溶剂，溶液混匀后用0.22μm滤膜过滤，0～10℃保存。能提高神经元特异性烯醇化酶的保存稳定性，延长试剂盒的货架寿命；简化神经元特异性烯醇化酶检测试剂盒的生产工艺及医生检测操作过程；提高了神经元特异性烯醇化酶配制、运输和储存过程中抗质变的能力；降低了由冻干工艺造成的批间差。但是该稳定剂中的有效成分种类较多成本较高，另外，该专利技术中使用的成分复杂，不同成分之间的相互作用反而不利于稳定剂提高NSE保存的稳定性。
[0006]本专利技术的目的是为了使神经元特异性烯醇化酶保持最大的活性，而提供的一种有效的冻干品制备方法。

技术实现思路

[0007]为克服以上技术问题，本专利技术提供了一种神经元特异性烯醇化酶(NSE)的冻干方法，该冻干方法能有效保存神经元特异性烯醇化酶，有利于保持其最大的活性。
[0008]为实现以上目的，本专利技术提供的技术方案如下：
[0009]一种神经元特异性烯醇化酶的冻干方法，包括以下步骤：取缓冲液将NSE溶解，制成NSE试剂，放入真空冷冻干燥机内进行冻干；其中，所述缓冲液包括如下组分：三羟甲基氨基甲烷(Tris)、氯化钾(KCl)、十二水磷酸氢二钠、硫酸镁、海藻糖、牛血清白蛋白(BSA)。
[0010]优选地，按照重量份数计，所述缓冲液包括如下组分：三羟甲基氨基甲烷4
‑
20份、KCl6
‑
25份、十二水磷酸氢二钠1
‑
6份、硫酸镁0.1
‑
10份、海藻糖5.0
‑
50份、BSA 1.0
‑
50份。
[0011]优选地，按照重量份数计，所述缓冲液包括如下组分：三羟甲基氨基甲烷4.2
‑
15.6份、KCl 8.5
‑
24份、十二水磷酸氢二钠1.2
‑
5.8份、硫酸镁0.1
‑
10份、海藻糖5.0
‑
50份、BSA 1.0
‑
50份；
[0012]优选地，所述缓冲液的制备方法，包括以下步骤：
[0013](1)称取Tris、KCl、十二水磷酸氢二钠、MgSO4、海藻糖、牛血清白蛋白，加入到纯化水中搅拌至完全溶解，调节pH值，定容；
[0014](2)用滤膜进行过滤，即可。
[0015]优选地，所述pH值在6.8～8.5之间。
[0016]优选地，所述滤膜的孔径为0.22μm。
[0017]优选地，所述NSE试剂由NSE抗原和缓冲液配制而成，用于标准品、质控品或参考品。
[0018]优选地，所述冻干方法，包括以下步骤：
[0019]将真空冷冻干燥机设置成三个阶段，分别为预冷冻段、升华干燥段、解析干燥段；冻干后，在4
‑
8℃环境下保存。
[0020]优选地，所述预冷冻段为：将NSE试剂从常温降温至0℃；降温时间为30分钟；
[0021]在0℃保温10分钟后，再降温至
‑
30℃，降温时间为30分钟；
[0022]在
‑
30℃保温60分钟后，再降温至
‑
55℃，降温时间为30分；在
‑
55℃保温240分钟；
[0023]优选地，所述升华干燥段为：将真空度在1
‑
5分钟内降至0
‑
5帕斯卡(pa)；设置7个温度点，分别为
‑
50℃、
‑
45℃、
‑
35℃、
‑
30℃、
‑
25℃、
‑
25℃、
‑
5℃；
[0024]‑
55℃到
‑
50℃的升温时间为10分钟、在
‑
50℃的保温时间为60分钟；
[0025]‑
50℃到
‑
45℃的升温时间为60分钟、在
‑
45℃的保温时间为120分钟；
[0026]‑
45℃到
‑
35℃的升温时间为60分钟、在
‑
35℃的保温时间为240分钟；
[0027]‑
35℃到
‑
30℃的升温时间为60分钟、在
‑
30℃的保温时间为480分钟；
[0028]‑
30℃到
‑
25℃的升温时间为60分钟、在
‑
25℃的保温时间为240分钟；
[0029]‑
25℃到
‑
15℃的升温时间为60分钟、在
‑
15℃的保温时间为120分钟；
[0030]‑
15℃到
‑
5℃的升温时间为30分钟、在
‑
5℃的保温时间为60分钟。
[0031]优选地，所述解析干燥段为：设置两个温度点，分别为20℃、25℃；
[0032]‑
5℃到20℃的升温时间为120分钟、在20℃的保温时间为60分钟；
[0033]20℃到25℃的升温时间为15分钟、在25℃的保温时间为460
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种神经元特异性烯醇化酶的冻干方法，包括以下步骤：取缓冲液将NSE溶解，制成NSE试剂，放入真空冷冻干燥机内进行冻干；其中，所述缓冲液包括如下组分：三羟甲基氨基甲烷、KCl、十二水磷酸氢二钠、硫酸镁、海藻糖、BSA。2.如权利要求1所述的冻干方法，其特征在于，按照重量份数计，所述缓冲液包括如下组分：三羟甲基氨基甲烷4
‑
20份、KCl 6
‑
25份、十二水磷酸氢二钠1
‑
6份、硫酸镁0.1
‑
10份、海藻糖5.0
‑
50份、BSA 1.0
‑
50份。3.如权利要求1所述的冻干方法，其特征在于，按照重量份数计，所述缓冲液包括如下组分：三羟甲基氨基甲烷4.2
‑
15.6份、KCl 8.5
‑
24份、十二水磷酸氢二钠1.2
‑
5.8份、硫酸镁0.1
‑
10份、海藻糖5.0
‑
50份、BSA 1.0
‑
50份。4.如权利要求1所述的冻干方法，其特征在于，所述缓冲液的制备方法，包括以下步骤：(1)称取Tris、KCl、十二水磷酸氢二钠、MgSO4、海藻糖、牛血清白蛋白，加入到纯化水中搅拌至完全溶解，调节pH值，定容；(2)用滤膜进行过滤，即可。5.如权利要求4所述的冻干方法，其特征在于，所述pH值在6.8～8.5之间。6.如权利要求4所述的冻干方法，其特征在于，所述滤膜的孔径为0.22μm。7.如权利要求1所述的冻干方法，其特征在于，所述NSE试剂由NSE抗原和缓冲液配制而成，用于标准品、质控品或参考品。8.如权利要求1所述的冻干方法，其特征在于，所述冻干方法，包括以下步骤：将真空冷冻干燥机设置成三个阶段，分别为预冷冻段、升华干燥段、解析干燥段；冻干后，在4
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8℃环境下保存。9.如权利要求8所述的冻干方法，其特征在于，所述预冷冻段为：将NSE试剂从常温降温至0℃；降温时间为30分钟；在0℃保温10分钟后，再降温至
‑
30℃，降温时间为30分钟；在
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：李博飞，
申请(专利权)人：北京美联泰科生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：