一种缓冲液在PGP9.5检测试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种缓冲液在脑特异性蛋白产物9.5(PGP 9.5)检测试剂盒中的应用，属于生物检测技术领域。本发明专利技术所述的缓冲液包括4

【技术实现步骤摘要】
一种缓冲液在PGP 9.5检测试剂盒中的应用


[0001]本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种缓冲液在脑特异性蛋白产物9.5(PGP 9.5)检测试剂盒中的应用。

技术介绍

[0002]颅脑创伤(TBI)是由外力引起的大脑损伤，会破坏大脑正常功能，导致人的认知能力或身体机能受损，其发病率高、病情变化快、致死致残率高。尽管目前急诊救治、手术技术和重症监护水平取得了不断的进步，但颅脑创伤患者的预后未见明显改善。因此，在早期对颅脑创伤预后进行更精准判断，及时评估干预措施疗效并依此对患者进行个体化治疗，具有巨大的临床意义和战略意义。
[0003]颅脑创伤对脑部造成损伤的病理生理学基础为细胞和脑组织缺血缺氧、脑水肿、炎症、神经递质失调和生理性屏障受损等一系列复杂生理生化级联反应引起的神经细胞(包括神经胶质细胞和神经元)变性死亡。生物标志物则是颅脑创伤中由于神经细胞结构破坏、细胞损伤坏死使得一些细胞成分和生化产物直接释放入细胞外液和脑脊液中，并通过损伤的血脑屏障或其他可能途径进入外周血而可被直接检测到的脑特异性蛋白质。通过检测体液中的脑特异性蛋白质浓度，将可准确知晓脑组织损伤和脑保护情况，从而为颅脑创伤伤情判断、预后预测和监测干预措施疗效提供重要依据。
[0004]UCH
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L1又称蛋白基因产物9.5(PGP 9.5)，是一类由223个氨基酸组成的半胱氨酸水解酶，分子量约24KD，是泛素蛋白酶体系统中一种重要的去泛素化酶，可以将泛素从泛素前体蛋白移除。UCH
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L1在神经系统中分布广泛，在大脑中的表达量远高于其他组织，其占脑组织总蛋白量的1
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5％，尤其在神经元胞体和树突中均有分布，以维持神经元的正常突触结构和功能。当颅脑创伤时，由于神经元发生变性、崩解，该酶进入脑脊液和血液，因而其含量的高低可反映中枢神经系统受损的程度。目前，已有许多研究证明颅脑创伤动物模型和患者的血清UCH
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L1浓度明显升高，并与脑损伤的严重程度相关。如专利CN201880020489.5公开了一种使用早期生物标记物泛素羧基末端水解酶L1(UCH
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L1)帮助诊断和评价已遭受或可能已遭受对头部的损伤、诸如轻度或中度至重度创伤性脑损伤(TBI)的人类受试者的方法。专利CN201710396942.X则公开了一种用于轻中度脑损伤的快速诊断试剂及含有该试剂的试剂盒及该试剂盒的制备和检测方法，该试剂和试剂盒包括S100、GFAP、UCHL1分别制得的单克隆捕获抗体；所述试剂盒还包括检测抗体S100、GFAP、UCHL1分别制得的多克隆抗体。
[0005]为了能够快速、简便地检测人外周血中PGP 9.5的含量，通过对缓冲液的不段优化，提供了一种操作简便、能为创伤性脑损伤提供辅助诊断的体外诊断试剂盒及其制备方法和应用。

技术实现思路

[0006]针对上述不足，本专利技术提供了一种缓冲液在脑特异性蛋白产物9.5(PGP 9.5)检测试剂盒中的应用。本专利技术所述的缓冲液包括4
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羟乙基哌嗪乙磺酸、氯化钠、牛IgG、酶水解明
胶、蛋白稳定剂、月桂醇聚氧乙烯醚、生物防腐剂等成分，将其应用于脑特异性蛋白产物9.5(PGP 9.5)检测试剂盒中，可快速、简便地检测人外周血中PGP 9.5的含量，从而为颅脑创伤伤情判断、预后预测和监测干预措施疗效提供重要依据，具有巨大的临床意义和战略意义。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：
[0008]一方面，本专利技术提供了一种缓冲液在脑特异性蛋白产物9.5(PGP 9.5)检测试剂盒中的应用，所述的缓冲液包括4
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羟乙基哌嗪乙磺酸、氯化钠、牛IgG、六水合氯化镁溶液、氯化锌溶液、酶水解明胶、蛋白稳定剂、月桂醇聚氧乙烯醚、生物防腐剂。
[0009]具体地，所述的缓冲液包括4
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羟乙基哌嗪乙磺酸5.6
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9g/L、氯化钠9g/L、牛IgG5
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30g/L、六水合氯化镁溶液1
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10mL/L、氯化锌溶液1
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10mL/L、酶水解明胶1
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20g/L、蛋白稳定剂30
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120mL/L、月桂醇聚氧乙烯醚0.2
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5g/L、生物防腐剂1mL/L。
[0010]进一步具体地，所述的缓冲液包括4
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羟乙基哌嗪乙磺酸5.7g/L、氯化钠9g/L、牛IgG15g/L、六水合氯化镁溶液3mL/L、氯化锌溶液3mL/L、酶水解明胶15g/L、蛋白稳定剂50mL/L、月桂醇聚氧乙烯醚3g/L、生物防腐剂1mL/L。
[0011]具体地，所述牛IgG、酶水解明胶、月桂醇聚氧乙烯醚的重量比为5
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30：1
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20：0.2
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5。
[0012]进一步具体地，所述牛IgG、酶水解明胶、月桂醇聚氧乙烯醚的重量比为5：5：1。
[0013]另一方面，本专利技术还提供了一种PGP 9.5检测试剂盒，所述的试剂盒包括包被板、试剂A、校准品、质控品、清洗浓缩液、显色液、终止液。
[0014]具体地，所述的试剂A使用上述缓冲液与酶标记PGP9.5抗体偶联物混匀配制而成。
[0015]进一步具体地，所述清洗浓缩液为缓冲液13，所述缓冲液13包括：三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、非离子型表面活性剂。
[0016]进一步具体地，所述校准品和质控品的制备方法均为：使用缓冲液11将PGP9.5重组蛋白溶解，充分混合后，配制。
[0017]进一步具体地，所述缓冲液11包括三羟甲基氨基甲烷、牛血清白蛋白、甘氨酸。
[0018]进一步具体地，所述酶标记PGP9.5抗体偶联物的制备方法包括以下步骤：
[0019](1)抗体1活化：将缓冲液6加入至PGP9.5抗体1溶液中进行活化，混匀；
[0020](2)HRP活化：将HRP溶解后加入缓冲液2，混匀；再加入缓冲液5，离心，弃去上清液，收集浓缩液，即得HRP溶液；
[0021](3)抗体1与HRP连接：向步骤(1)得到的活化后的PGP9.5抗体1溶液中加入步骤(2)得到的HRP溶液，混匀后加入缓冲液6，得到酶标记PGP9.5抗体偶联物溶液；
[0022](4)抗体偶联物的终止和纯化：将酶标记PGP9.5抗体偶联物溶液和缓冲液7混合后，混匀反应，再加入缓冲液8，离心，弃去上清后，收集浓缩液，即得PGP9.5抗体偶联物，向抗体偶联物中加入甘油、牛血清白蛋白，充分混匀后，保存。
[0023]进一步具体地，所述缓冲液6包括碳酸钠、碳酸氢钠，所述缓冲液2包括高碘酸钠，所述缓冲液5包括乙酸，所述缓冲液7包括硼氢化钠；所述缓冲液8包括十二水合磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠、氯化钾。
[0024]进一步具体地，所述包被板包括PGP9.5抗体2，所述PGP9.5抗体2包被以及封本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种缓冲液在PGP 9.5检测试剂盒中的应用，其特征在于：所述的缓冲液包括4
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羟乙基哌嗪乙磺酸、氯化钠、牛IgG、六水合氯化镁溶液、氯化锌溶液、酶水解明胶、蛋白稳定剂、月桂醇聚氧乙烯醚、生物防腐剂。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的缓冲液包括4
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羟乙基哌嗪乙磺酸5.6
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9g/L、氯化钠9g/L、牛IgG5
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30g/L、六水合氯化镁溶液1
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10mL/L、氯化锌溶液1
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10mL/L、酶水解明胶1
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20g/L、蛋白稳定剂30
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120mL/L、月桂醇聚氧乙烯醚0.2
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5g/L、生物防腐剂1mL/L。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的牛IgG、酶水解明胶、月桂醇聚氧乙烯醚的重量比为5
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30：1
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20：0.2
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5。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的牛IgG、酶水解明胶、月桂醇聚氧乙烯醚的重量比为5：5：1。5.一种PGP 9.5检测试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括包被板、试剂A、校准品、质控品、清洗浓缩液、显色液、终止液；所述的试剂A使用权利要求1
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4任一项所述的缓冲液与酶标记PGP9.5抗体偶联物混匀配制而成。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述酶标记PGP9.5抗体偶联物的制备方法包括以下步骤：(1)抗体1活化：将缓冲液6加入至PGP9.5抗体1溶液中进行活化，混匀；(2)HRP活化：将HRP溶解后加入缓冲液...

【专利技术属性】
技术研发人员：李锋，王法龙，张广俊，李博飞，郑兴华，
申请(专利权)人：北京美联泰科生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：