HEPES缓冲液在胶质纤维酸性蛋白检测试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术提供HEPES缓冲液在制备胶质纤维酸性蛋白检测试剂盒中的应用，所述的HEPES缓冲液每1000mL中包括：4

【技术实现步骤摘要】
HEPES缓冲液在胶质纤维酸性蛋白检测试剂盒中的应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及HEPES缓冲液在胶质纤维酸性蛋白检测试剂盒中的应用。

技术介绍

[0002]胶质纤维酸性蛋白(GFAP)是一种Ⅲ型中间纤丝蛋白。创伤性脑损伤(TBI)中，GFAP在1小时内会通过血脑屏障进入血液，导致血清GFAP显著升高。对TBI的早期诊断，鉴别诊断和判断预后有重要的意义
[1]。
[0003]现有技术中已经公开了多种GFAP的检测试剂盒或检测方法，特别是基于磁微粒发光法的检测方法和试剂盒。
[0004]中国专利201811391978.X中公开了一种人体胶质纤维酸性蛋白磁微粒分离化学发光免疫检测方法，试剂盒组成包括：校准品、质控品试剂A、试剂B、清洗液浓缩液、发光底物液，其中，校准品为含一系列浓度的胶质纤维酸性蛋白抗原，用于建立标准曲线；质控品为含一定浓度胶质纤维酸性蛋白抗原的缓冲液配制而成；试剂A为含一定浓度磁微粒标记的胶质纤维酸性蛋白抗体溶液；试剂B为含一定浓度碱性磷酸酶标记的胶质纤维酸性蛋白抗体溶液；清洗液浓缩液用于配制清洗液；发光底物液为碱性磷酸酶(ALP)催化的发光底物溶液。该专利技术极大地提高了免疫反应的信号强度和灵敏度，使低含量物质在进行免疫结合时也能产生很强的化学发光信号，为人体胶质纤维酸性蛋白的检测提供了一种更准确、精确、方便、快捷和简单的方法。但其灵敏度实际为＜0.05ng/mL，对于GFAP的检测来说仍有较大的进步空间。
[0005]中国专利202011279930.7中公开了一种定量检测GFAP的试剂盒及其应用，所述试剂盒包括磁微粒标记的GFAP抗体溶液，所述缓冲液由以下组分组成：Na2HPO4·
12H2O 5.6
‑
5.9g/L、NaH2PO
4 0.55
‑
0.60g/L、NaCl 9.0g/L、牛血清白蛋白1.0
‑
50g/L、蔗糖80.0
‑
140g/L、纤维素盐或纤维素衍生物1.0
‑
5.0g/L、明胶5.0
‑
50g/L；pH为6.2
‑
8.0。该专利技术通过改进磁微粒发光法中的磁微粒载体的缓冲体系，改善了磁微粒抗体偶联物的流动性和沉降性能，提高了试剂盒的准确度和重复性，稳定性好，同时，检出限低，线性关系好，符合行业标准。但该试剂盒用于检测时线性区间较小，有进一步优化的空间。
[0006]参考文献：
[0007][1]刘霞,秦雪.胶质纤维酸性蛋白的生物学特性及临床研究进展[J].国际检验医学杂志,2015,36(18):2.

技术实现思路

[0008]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种用于胶质纤维酸性蛋白检测试剂盒中的缓冲液，以期提高试剂盒的检测性能。
[0009]本专利技术中，“试剂盒的检测性能”包括但不限于准确度、空白限、检出限、线性区间、重复性、校准品和质控品瓶间差、批内差、批间差、稳定性等。
[0010]本专利技术中，“HEPES”指羟乙基哌嗪乙硫磺酸。
[0011]本专利技术中，“HEPES缓冲液”指包含羟乙基哌嗪乙硫磺酸的缓冲液，但并不代表缓冲液中仅包括羟乙基哌嗪乙硫磺酸一种成分，可能还包括其他有利于提高检测试剂盒性能的成分。
[0012]一方面，本专利技术提供了HEPES缓冲液在制备胶质纤维酸性蛋白检测试剂盒中的应用。
[0013]所述的HEPES缓冲液中包括以下成分：
[0014]原料名称称取量4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸0.5
‑
7.2g氯化钠9g酪朊酸钠0.5
‑
5.0g甘露醇5
‑
30g非离子型表面活性剂2
‑
4mL防腐剂1mLpH值7.2
‑
8.0纯化水定容至1000mL
[0015]优选地，所述的HEPES缓冲液中包括以下成分：
[0016][0017][0018]所述的HEPES缓冲液中，非离子型表面活性剂包括但不限于：Tween
‑
20。
[0019]所述的HEPES缓冲液中，防腐剂包括但不限于：Proclin300。
[0020]所述的HEPES缓冲液的配制方法为：称取0.5
‑
7.2g的HEPES、9.0g的NaCl、0.5
‑
5.0g的酪朊酸钠、5
‑
30g的甘露醇2
‑
4mL的非离子型表面活性剂、1mL的防腐剂加入到一定量的纯化水中搅拌至完全溶解，调试pH值在7.2
‑
8.0之间并定容至1000mL。用0.22μm的滤膜进行过滤。
[0021]所述的胶质纤维酸性蛋白检测试剂盒通过磁微粒化学发光法免疫检测方法实现。
[0022]所述的试剂盒中还包括用于胶质纤维酸性蛋白检测的磁微粒化学发光法免疫检测方法中需要的其他试剂。
[0023]所述的其他试剂包括但不限于：硼氢化钠溶液、氯化锌溶液、六水合氯化镁溶液、乙酸溶液、TMB溶液、GFAP抗体溶液、质控品、校准品、清洗浓缩液、硫酸。
[0024]另一方面，本专利技术提供了一种胶质纤维酸性蛋白检测试剂盒。
[0025]所述的试剂盒中包括HEPES缓冲液，所述的HEPES缓冲液中包括以下成分：
[0026][0027][0028]优选地，所述的HEPES缓冲液中包括以下成分：
[0029]原料名称称取量4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸3
‑
7g氯化钠9g酪朊酸钠2
‑
4g甘露醇10
‑
20g非离子型表面活性剂2
‑
4mL防腐剂1mLpH值7.2
‑
8.0纯化水定容至1000mL
[0030]所述的HEPES缓冲液中，非离子型表面活性剂包括但不限于：Tween
‑
20；所述的防腐剂包括但不限于：Proclin300。
[0031]所述的HEPES缓冲液的配制方法为：称取HEPES、NaCl、酪朊酸钠、甘露醇、非离子型表面活性剂、防腐剂加入到一定量的纯化水中搅拌至完全溶解，调试pH值并定容至1000mL。
[0032]所述的胶质纤维酸性蛋白检测试剂盒通过磁微粒化学发光法免疫检测方法实现。
[0033]所述的试剂盒中还包括用于胶质纤维酸性蛋白检测的磁微粒化学发光法免疫检测方法中需要的其他试剂。
[0034]所述的其他试剂包括但不限于：硼氢化钠溶液、氯化锌溶液、六水合氯化镁溶液、乙酸溶液、TMB溶液、GFAP抗体溶液、质控品、校准品、清洗浓缩液、硫酸。
[0035]本专利技术的有益效果：
[0036]本专利技术可以使检测灵敏度达到皮克级别(10
‑
12
g/mL)，重复性好，批间差和瓶间差都较小，检测线性区间有所提高。
具体实施方式...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.HEPES缓冲液在制备胶质纤维酸性蛋白检测试剂盒中的应用，其特征在于，所述的HEPES缓冲液中包括以下成分：原料名称称取量4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸0.5
‑
7.2g氯化钠9g酪朊酸钠0.5
‑
5.0g甘露醇5
‑
30g非离子型表面活性剂2
‑
4mL防腐剂1mLpH值7.2
‑
8.0纯化水定容至1000mL。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的HEPES缓冲液中包括以下成分：原料名称称取量4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸3
‑
7g氯化钠9g酪朊酸钠2
‑
4g甘露醇10
‑
20g非离子型表面活性剂2
‑
4mL防腐剂1mLpH值7.2
‑
8.0纯化水定容至1000mL。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的非离子型表面活性剂为Tween
‑
20。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的防腐剂为Proclin300。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的HEPES缓冲液的配制方法为：称取0.5
‑
7.2g的HEPES、9.0g的NaCl、0.5
‑
5.0g的酪朊酸钠、5
‑
30g的甘露醇、2
‑
4mL的非离子型表面活性剂、1mL的防腐剂加入到一定量的纯化水中搅拌至完全溶解，调试pH值在7.2
‑
8.0之间并定容至1000mL。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，定容后用0.22μm的滤膜进行过滤。7.根据权利要求1所述的应用，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：王法龙，李锋，杨涛，李灿，冯玉静，
申请(专利权)人：北京美联泰科生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：