CCL5的用途制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，本发明专利技术公开了一种CCL5的用途。本发明专利技术利用CCL5与DC细胞等免疫细胞表面受体的趋化结合能力将不同的抗原蛋白转运到DC细胞表面，提高了各种抗原蛋白被DC细胞吞噬、加工、呈递的效率，改善了DC细胞防治相关疾病的效果。本发明专利技术还在抗原中添加了T2序列从而增强免疫效果。列从而增强免疫效果。

【技术实现步骤摘要】
CCL5的用途


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及CCL5的用途。

技术介绍

[0002]树突状细胞（Dendritic cells, DC）是机体功能最强的专职抗原递呈细胞(Antigen presenting cells, APC)，它能高效地摄取、加工处理和递呈抗原，未成熟DC具有较强的迁移能力，成熟的DC细胞可以以多种细胞表面蛋白与T细胞结合，并使之激活，将DC细胞本身捕获到的抗原蛋白表位肽最终交叉呈递给T细胞并促使其分化为抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞。最终发挥细胞免疫过程对抗原物质进行识别和降解。
[0003]肿瘤疫苗通过免疫增强已有的抗肿瘤反应或启动初始T细胞来诱导患者的效应T细胞功能，抗原特异性CD8+细胞毒性T淋巴细胞（CTL）在抗肿瘤过程中发挥重要作用。DC细胞是唯一能激活初始CD8+T细胞的专职抗原呈递细胞，对细胞外肿瘤抗原通过MHC
‑
I进行摄取、加工和交叉提呈，对产生有效的CTL至关重要。因此，通过偶联DC细胞表面分子将肿瘤抗原递送至DC细胞是有效诱导CD8+T细胞免疫应答的肿瘤治疗策略。
[0004]目前，已经探明的能够对DC细胞的递呈起到曾强作用的分子包括XCL
‑
1，但仍亟待探明更多的能够起到促进递呈作用的DC细胞表面分子。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供CCL5的用途，研究表明，CCL5能够递送物质到DC细胞，从而提高递呈效果。
[0006]本专利技术提供了CCL5在提高抗原递呈效果中的应用。
[0007]本专利技术中，所述CCL5为趋化因子CCL5，其来自于人类或其他动物，其为全长序列，或具有CCL5活性的部分片段。
[0008]本专利技术提供的融合蛋白包括CCL5和抗原，或者，所述融合蛋白包括CCL5、抗原和T2片段。
[0009]本专利技术实施例，所述融合蛋白自N端
→
C端依次包括：IgE信号肽、CCL5、linker、抗原和T2片段。
[0010]本专利技术中，所述抗原来自病毒、病原菌和/或肿瘤。
[0011]本专利技术中，所述CCL5为人源CCL5序列，所述抗原为HPV16的E6蛋白和/或HPV16的E7蛋白。
[0012]一些实施例中，所述所述融合蛋白自N端
→
C端依次包括：IgE信号肽、CCL5、linker、HPV16的E6蛋白、HPV16的E7蛋白和T2片段。
[0013]一些具体实施例中，所述IgE信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示；所述CCL5的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；所述linker为（G5S）n，其中n为1~10；本专利技术实施例中，所述linker序列为GGGGGSGGGGG。
[0014]所述HPV16的E6蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述HPV16的E7蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；所述T2片段的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；一些具体实施例中，所述融合蛋白的C端还包括FLAG标签序列，其氨基酸序列为DYKDDDDK，但该序列只为鉴定蛋白表达的标签不影响序列的免疫效果。
[0015]本专利技术还提供了编码所述融合蛋白的核酸。
[0016]本专利技术所述的编码融合蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示。
[0017]本专利技术还提供了含有编码所述融合蛋白的转录单元。
[0018]所述转录单元中包括启动子和编码所述融合蛋白的核酸。
[0019]一些实施例中，所述转录单元还包括终止子。
[0020]一些具体实施例中，所述启动子为CMV或者CMV/R启动子。
[0021]本专利技术还提供了表达载体，其包括骨架载体和编码所述融合蛋白的核酸。
[0022]本专利技术中，所述骨架载体选自pVAX1系列载体、或pVR系列载体。
[0023]本专利技术还提供了转化或转染所述重组载体的重组宿主。
[0024]本专利技术所述重组宿主的宿主细胞为细菌或哺乳动物细胞。
[0025]本专利技术所述融合蛋白的制备方法，其包括培养本专利技术所述重组宿主，获得含有所述融合蛋白的培养物。
[0026]本专利技术所述的融合蛋白、核酸、表达载体、宿主、所述制备方法制得的融合蛋白，和/或所述制备方法制得的含有所述融合蛋白的培养物在制备防治疾病的产品中的应用。
[0027]本专利技术还提供了一种防治疾病的产品，其包括：所述的融合蛋白、核酸、表达载体、宿主、所述制备方法制得的融合蛋白，和/或所述制备方法制得的含有所述融合蛋白的培养物。
[0028]本专利技术还提供了一种防治疾病的方法，其为给予本专利技术所述的防治疾病的产品。
[0029]本专利技术中，所述防治包括预防和/或治疗，具体包括提高血清中抗体水平、预防肿瘤的形成、抑制肿瘤生长，提高机体对肿瘤的免疫反应能力。
[0030]本专利技术中，所述疾病包括由病毒和/或病原菌引起的疾病。或者所述疾病为肿瘤。
[0031]本专利技术中，所述防治疾病的产品包括药物和/或疫苗。
[0032]本专利技术中，所述给予的方式包括口服、注射和/或电转。
[0033]本专利技术利用CCL5与DC细胞等免疫细胞表面受体的趋化结合能力将不同的抗原蛋白转运交叉呈递到DC细胞表面，提高了各种抗原蛋白被DC细胞吞噬、加工、呈递的效率，改善了其防治相关疾病的效果。本专利技术中的T2序列经实验测定其具有非常强的免疫增强效果，可以在促进抗原呈递的过程中进一步激发体液和细胞免疫反应，最终达到抑制相关肿瘤生长的效果。
附图说明
[0034]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0035]图1 CCL5趋化各类专职抗原提呈细胞能力分析；图2A示pVR
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CCL5
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E6E7
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T2载体图谱、图2B示pVR
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CCL5
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E6E7载体图谱、图2C示pVR
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E6E7载体图谱；图3示检测pVR
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CCL5
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E6E7
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T2、pVR
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CCL5
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E6E7和pVR
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E6E7的三种质粒目的基因的表达情况，利用蛋白免疫印迹技术（Westernblot）检测C端带有Flag标签的融合蛋白编码核苷酸的表达情况；图4示不同融合基因对小鼠进行预防型免疫用于后期测试特异性T细胞反应的时间轴；图5示不同融合基因对小鼠进行免疫后特异性T细胞反应的流式检测结果；图6示不同融合基因、mRNA和蛋白疫苗分别对小鼠进行预防型免疫和接瘤时间轴；图7示上述预防型免疫的量瘤检测结果图；图8示不同融合基因、mRNA和蛋白疫苗分别对小鼠进行治疗型免疫和接瘤时间轴；图9示上述治疗型免疫的量瘤检测结果图。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.融合蛋白，其包括CCL5、抗原和T2片段；所述T2片段的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，自N端
→
C端依次包括：IgE信号肽、CCL5、linker、抗原和T2片段。3.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述抗原来自病毒、病原菌和/或肿瘤；所述病毒包括HPV病毒、EBV、HCV、HIV、HBV、VZV或冠状病毒中至少一种；所述肿瘤包括肝癌、宫颈癌、肺癌、头颈癌、前列腺癌、乳腺癌、血癌、卵巢癌、结直肠癌中至少一种。4.根据权利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述抗原为HPV病毒的E2、E5、E6和/或E7蛋白或其突变表位，所述HPV病毒包括HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56和/或HPV58型；所述抗原为EB病毒的LMP1、LMP2、EBNA1或其突变表位；所述抗原为冠状病毒的S蛋白、N蛋白、E蛋白、M蛋白或其表位，所述冠状病毒为SARS病毒、MERS病毒和/或SARS
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CoV
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2；所述抗原为肝癌的GPC3蛋白和/或AFP蛋白；所述抗原为前列腺癌的PSA，PSMA，PSCA，PAP和/或STEAP1；所述抗原为乳腺癌的Her2/neu和/或BCAR3的优势表位；所述抗原为黑色素瘤的MAGE
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A3，ISR2，NY
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ESO
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1，Melan A，gp100，Tyrosinase，TRP1和/或TRP2；所述抗原为血液肿瘤的Immunoglobulin idiotype，Immunoglobulinκ
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chain和/或Immunoglobulin λ
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chain；所述抗原为结直肠癌的AIM2，HT001，TAF1B，Micoryx和/或TGFβRII；所...

【专利技术属性】
技术研发人员：齐海龙，王旭东，姚艳玲，孙忠杰，王晓芳，谢皇帆，刘德芳，吴婷欣，
申请(专利权)人：诺未科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：