间充质干细胞外泌体及组合物的制备和在化妆品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了间充质干细胞外泌体及组合物的制备和在化妆品中的应用，本发明专利技术通过TRADD修饰间充质干细胞并培养然后利用微流控技术从脂肪间充质干细胞中提取外泌体，将外泌体与棕榈酰

【技术实现步骤摘要】
间充质干细胞外泌体及组合物的制备和在化妆品中的应用


[0001]本专利技术涉及化妆品
，具体为间充质干细胞外泌体及组合物的制备和在化妆品中的应用。

技术介绍

[0002]棕榈酰四肽
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7又称为棕榈酰四肽
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3，其氨基酸序列为Pal
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Gly
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Gln
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Pro
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Arg，缩写为Pal
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GQPR，属于信号类胜肽中棕榈酰寡肽系列多肽中的一种，棕榈酰四肽
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7可加速粒细胞趋化蛋白(GCP
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2)表达，促进伤口恢复，通过对该肽的研究，已经确定棕榈酰四肽
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7可以通过充当细胞信使来刺激真皮中胶原纤维的再生。棕榈酰四肽7也被认为可以增加皮肤中的透明质酸含量，从而可以通过吸引水分至表皮来帮助收紧皮肤。另外，棕榈酰四肽
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7是免疫球蛋白IgG的片段，IgG有许多生物活性功能，尤其免疫调节功能。
[0003]细胞穿膜肽是一种由10～30个氨基酸残基组成的阳离子短肽，细胞穿膜肽能介导多种物质进入细胞,如DNA、蛋白质、抗体、显像剂、纳米粒和脂质体等，TH作为细胞穿膜肽的一种，以TK[AGYLLGKINLKKLAKL(Aib)KKIL
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NH2]为模板,将序列中的所有赖氨酸替换为组氨酸,合成了一种新型的具有pH选择性且低毒性的细胞穿膜肽，研究发现，当pH 6.0时,TH的细胞毒性、穿膜活性与pH 7.4时相比显著增强。
[0004]将棕榈酰四肽
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7与TH肽偶联形成多肽偶联多肽，探索棕榈酰四肽修饰的新方式，改善其本身的性质，提高靶向性，在保留活性的同时提高其稳定性和安全性，高效发挥自身作用的同时降低对正常细胞的毒性。
[0005]外泌体是一种大小均一、直径约为30
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200nm的脂质双分子层结构小囊泡，它们由大多数类型的细胞主动分泌至细胞外，广泛存在于许多生物液体中。作为细胞间通讯信息交换的载体，外泌体的实际价值如同血浆、淋巴液等，但其提取分离的方法及效率却是一个影响其应用的重要问题。由于外泌体纳米级别的尺寸大小，其高效快速的提取与分离方法一直以来是一个尚未彻底解决的难题。当前常用的外泌体提取方法有：超速离心沉淀法、超滤法、商业试剂盒法、新型免疫亲和捕获法和微流控技术等。这些方法各有其优缺点，近年来利用微流控技术提取外泌体较为广泛，微流控技术可以较高产量地从生物流体中分离出高纯度的外泌体，且该技术易用、高通量、可自动化，可作为外泌体提取相关研究的新方向,本专利技术提供了一种用于人体脂肪间质干细胞中外泌体的高效快速提取和分离的新型微流控芯片。
[0006]皮肤是人体最大的器官，位于人体结构的最外面。其主要功能是发挥免疫屏障作用，保护人体免受外界有害物质、病原体等入侵，还具有调节机体新陈代谢、感触觉等功能。然而，皮肤经常因各种内在病理及外界机械因素而受损，这些急、慢性的皮肤缺损给患者及社会带来了沉重的负担，皮肤炎症和皮肤屏障破坏是大多数皮肤问题的特点。抗炎和修复皮肤屏障已成为当前皮肤护理的重中之重。另外，皮肤还有瘢痕问题，瘢痕一旦产生就无法完全消除，因此预防瘢痕的形成尤为重要，只有通过寻找瘢痕基因缺陷并从基因水平加以修正，从源头上抑制成纤维细胞增殖及胶原蛋白合成，避免或减轻瘢痕的发生发展，由于不
同的干细胞分泌的外泌体其功效可能存在着效果不同的影响，而且协同抗衰老、抗敏及修复类的化妆品目前还不够多。因此，提供一种新的外泌体组合物化妆品是本领域追求的目标。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种间充质干细胞外泌体及组合物偶联多肽的制备方法，并提供了这种组合物在抗皱、抗过敏、促愈合等化妆品领域的应用。
[0008]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种间充质干细胞外泌体及其组合物，包括偶联多肽，该偶联多肽的分子结构式如下：
[0009][0010]优选的，该偶联多肽的制备方法包括以下步骤：(1)使用多肽固相合成法合成TH肽；(2)将TH肽与棕榈酰四肽
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7按摩尔比1:1.2溶于甲醇溶剂中，在催化剂和惰性气体的保护作用下进行偶联，使TH肽的N端氨基与棕榈酰四肽
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7的羧基端形成酰胺键相连接，制备得到TH肽与棕榈酰四肽
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7偶联多肽。
[0011]优选的，间充质干细胞外泌体的制备方法包括以下步骤：(1)TRADD修饰间充质干细胞：构建TRADD过表达腺病毒，利用得到的TRADD过表达腺病毒转染间充质干细胞，实验研究已证实，TRADD基因可抑制皮肤瘢痕形成，改善皮肤瘢痕的平整度和色泽，因此选择TRADD基因构建腺病毒；(2)间充质干细胞培养：用含体积浓度10％胎牛血清的低糖DMEM培养基培养3～5代步骤(1)构建TRADD过表达的间充质干细胞，待细胞融合至70％～80％时换无血清培养基培养48h，收集培养后的上清液；(3)通过微流控技术分离间充质干细胞外泌体，并进行纯化，即得到TRADD修饰的间充质干细胞外泌体；所述间充质干细胞为脂肪间充质干细胞。
[0012]优选的，微流控技术分离间充质干细胞外泌体主要采用微流控芯片，所述微流控芯片由PDMS(聚二甲基硅氧烷)基片和PC(聚碳酸酯)膜片组成，所述膜片上设有底盖，底盖也是PC材质，所述基片、膜片与底盖通过胶带密封贴合连接，所述膜片上设有进样口、弯形通道、微通道和出液口，其中第一进样口和第二进样口通过弯形通道分别连接第二微通道和第三微通道，所述第二微通道和第三微通道为水平相互平行设置，所述第二微通道的另一端通过出液口连接废弃槽，所述第三微通道的另一端通过出液口连接回收槽，所述第二微通道和第三微通道相垂直处还设有第一微通道，所述第一微通道的两端处分别设有正极电泳槽和负极电泳槽，所述第三微通道与第一微通道的连接处还设有纳米孔薄膜，所述纳米孔薄膜的下端为富集池。
[0013]优选的，所述第一进样口和第二进样口可连接微量注射泵，泵的流速为0.1mL/h，所述第一进样口和第二进样口的孔径为0.8μm。
[0014]优选的，所述第一微通道的长度为55mm，宽度为5mm，深度为100μm，所述第二微通道和第三微通道的长度为48mm,宽度为2mm，深度为100μm，所述纳米孔薄膜的大小为5mm*2mm，纳米孔薄膜的孔径为30
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200nm。
[0015]优选的，所制得的间充质干细胞外泌体直径在55～100nm范围内。
[0016]优选的，含有间充质干细胞外泌体及组合物的化妆品，包括以下组分：间充质干细胞外泌体、TH肽与棕榈酰四肽
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7偶联多肽、橄榄果粉、红葡萄粉、牡丹皮提取物、乳化剂、保湿剂、增稠剂、螯合剂、余量为溶剂。
[0017]优选的，该化妆品包括以下用途中的一种或几种：(1)在皮肤抗衰老、抗皱、抗氧化和修复再生类化妆品中的应用；(2)在促进皮肤瘢痕和创面愈合类化妆品本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.间充质干细胞外泌体及组合物，包括间充质干细胞外泌体和偶联多肽，其特征在于：该偶联多肽的分子结构式如下：2.如权利要求1所述偶联多肽的制备方法，其特征在于：所述偶联多肽的制备方法包括以下步骤：(1)使用多肽固相合成法合成TH肽；(2)将TH肽与棕榈酰四肽
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7按摩尔比1:1.2溶于甲醇溶剂中，在催化剂和惰性气体的保护作用下进行偶联，使TH肽的N端氨基与棕榈酰四肽
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7的羧基端形成酰胺键相连接，制备得到TH肽与棕榈酰四肽
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7偶联多肽。3.如权利要求1所述间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：所述间充质干细胞外泌体的制备方法包括以下步骤：(1)TRADD修饰间充质干细胞：构建TRADD过表达腺病毒，利用得到的TRADD过表达腺病毒转染间充质干细胞；(2)间充质干细胞培养：用含体积浓度10％胎牛血清的低糖DMEM培养基培养3～5代步骤(1)构建TRADD过表达的间充质干细胞，待细胞融合至70％～80％时换无血清培养基培养48h，收集培养后的上清液；(3)通过微流控技术分离间充质干细胞外泌体，并进行纯化，即得到TRADD修饰的间充质干细胞外泌体；所述间充质干细胞为脂肪间充质干细胞。4.根据权利要求3所述的一种间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：微流控技术分离间充质干细胞外泌体主要采用微流控芯片，所述微流控芯片由PDMS(聚二甲基硅氧烷)基片和PC(聚碳酸酯)膜片组成，所述膜片上设有底盖，底盖也是PC材质，所述基片、膜片与底盖通过胶带密封贴合连接，所述膜片上设有进样口、弯形通道、微通道和出液口，其中第一进样口(4)和第二进样口(7)通过弯形通道(6)分别连接第二微通道(5)和第三微通道(8)，所述第二微通道(5)和第三微通道(8)为水平相互平行设置，所述第二微通道(5)的另一端通过出液口连接废弃槽(11)，所述第三微通道(8)的另一端通过出液口连接回收槽(9)，所述第二微通道(5)和第三微通道(8)相垂直处还设有第一微...

【专利技术属性】
技术研发人员：付强，
申请(专利权)人：山东思乐基医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：