【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及肿瘤药物领域，尤其涉及一种能扩展t细胞抗原表位的肿瘤疫苗及其制备方法。
技术介绍
1、肿瘤疫苗可以诱导抗原特异性的效应t细胞，配合免疫检测点抑制剂使用可增强其抑制效果，从而增强肿瘤治疗的效果。大量的动物实验和临床前研究显示肿瘤疫苗能有效抑制肿瘤生长，但是肿瘤疫苗的效果受到抗原种类、疫苗递送系统、佐剂等因素影响，在临床应用中仅有15%-20%患者能获益。
2、准确地选择针对性的抗原是肿瘤疫苗发挥效应的关键性因素。目前，设计肿瘤疫苗（targeted antigens）的策略通常为：1）选择肿瘤细胞高表达而正常组织低表达或仅在机体胚胎发育过程中表达的蛋白作为抗原2）选择肿瘤基因组中新出现的突变基因编码的蛋白做为抗原，并采用多个肿瘤新抗原多肽为靶点。
3、抗原表位扩展是指机体免疫系统在对特定抗原的持续性应答过程中，相继产生对该抗原的隐藏表位或者其他表位的应答。khaled el-shami等人在eg.7ova种植瘤小鼠模型中首次发现，使用ova抗原免疫细胞后，除产生了针对ova抗原的应答，还产生了针对其它抗原的应答，即扩展了t细胞抗原表位。后续的多项研究显示无论是在动物模型，还是临床研究中，肿瘤免疫治疗可能扩展针对该抗原的隐藏表位，也有可能扩展至其它抗原的t细胞识别表位。免疫产生的cd8+t细胞在清除表达靶抗原的肿瘤细胞的同时，能调动机体自身cd8+t细胞产生针对肿瘤细胞新释放的其他抗原的免疫应答，从而能克服肿瘤细胞的免疫逃逸现象。因此，免疫治疗所引发的t细胞抗原表位扩展可能对于肿瘤的治疗具有重要
4、dc细胞 (dendritic cells，dcs)它是机体功能最强的专职抗原递呈细胞(antigen presenting cells, apc)，它能高效地摄取、加工处理和递呈抗原，未成熟dc具有较强的迁移能力，成熟dc能有效激活初始型t细胞，处于启动、调控、并维持免疫应答的中心环节。
5、dc细胞分很多亚群，包括传统i型dc（conventional type i dc，cdc1）、ii型dc（cdc2）、浆细胞样dc（pdc）和外周血单核细胞来源的树突状细胞(mo-dc)等，不同亚型的dc所具备的起始和活化t细胞的能力也不尽相同。cdc1是最专职的抗原交叉提呈细胞，能高效摄取肿瘤抗原并将其加工成mhc-i/抗原肽复合物的形式，然后交叉提呈给初始cd8+t细胞，从而诱导cd8+t细胞分化产生抗原特异性的效应t细胞。
6、cdc1细胞的发育依赖于转录因子batf3，小鼠体内的cdc1细胞主要包括位于次级淋巴组织内t细胞区域的原住型cd8α+cd103-clec9a+cd11c+细胞和位于外周组织内且具有迁移能力的cd8α-cd103+clec9a+cd11c+细胞。而人体内的cdc1细胞主要是cd141 (bdca3)+xcr1+dcs细胞。这些dc细胞在细胞表面表达受体xcr1，可以构建特定抗原和趋化因子xcl1的融合分子，基于xcl1和xcr1之间的强相互作用，该融合分子能带着特定抗原靶向xcr1+dc细胞，促进cdc1细胞摄取特定的抗原，并诱导抗原特异性ctl细胞（识别特定抗原，杀死癌细胞的一种t细胞）的产生和/或抗体应答，从而增强抗肿瘤作用。
7、然而，肿瘤的发展过程是免疫系统与肿瘤细胞相互作用的动态过程，robertschreiber等人于2002年提出“免疫清除、免疫平衡、免疫逃逸”的免疫编辑理论。该理论指出：在免疫系统发挥作用清除肿瘤细胞的同时，肿瘤细胞在不断地发生新的变异，不断地下调肿瘤标志物mhc-i等分子的表达和上调免疫抑制分子的表达，来逃逸免疫系统清除。针对特定肿瘤靶点设计的抗原能诱导机体产生特异性的cd8+t细胞从而清除对应肿瘤细胞，但是由于肿瘤细胞分裂和突变速度很快，cd8+t细胞难以有效清除发生新突变的肿瘤细胞。科学家们做了大量的努力以期解决此问题，然而至今这仍是疫苗应用于临床肿瘤治疗中的一个瓶颈。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供一种能扩展t细胞抗原表位的肿瘤疫苗及其制备方法。
2、本专利技术提供了xcl1在制备拓展t细胞抗原表位的药物中的应用。
3、更进一步地，本专利技术发现xcl1融合在抗原上能拓展t细胞抗原表位。
4、xcl1是一种淋巴细胞趋化因子，其全长氨基酸序列如seq id no:7所示。根据本专利技术的研究结果，xcl1融合分子免疫后可能会增加机体内浸润的趋化因子xcl1含量，这将增加机体内xcr1+cdc1细胞的数目。表达靶抗原的细胞在被免疫系统清除时会破碎而释放的大量抗原，由于xcr1+ cdc1细胞的数目增加，这些非靶抗原更易被摄取，进而被免疫细胞携带至次级淋巴组织，诱导机体产生针对非靶抗原的特异性cd8+ t细胞。从而，xcl1与特定抗原的融合应用能起到拓展t细胞抗原表位的作用。因此，本专利技术证明xcl1融合在抗原上能拓展t细胞抗原表位。
5、针对特定靶抗原的疫苗能诱导机体产生特异性的cd8+t细胞从而清除靶抗原所在的病灶。然而，当面对的疾病是肿瘤，由于肿瘤细胞分裂和突变速度很快易发生免疫逃逸，疫苗诱导的针对免疫靶抗原的特异性cd8+t细胞难以有效清除发生新突变的肿瘤细胞。因此，本专利技术提供的xcl1融合分子通过拓展t细胞抗原识别表位，诱导机体产生针对肿瘤细胞表达的其他抗原（非免疫靶抗原）的特异性细胞免疫，从而克服因肿瘤异质性和抗原调变等问题引起的疫苗无效性问题，本专利技术提供的应用方法具有极大的潜力。
6、本专利技术所述应用中，所述抗原包括肿瘤抗原。
7、在一些实施例中，本专利技术所述的抗原包括黑色素瘤抗原gp100；所述拓展t细胞抗原表位包括：在gp100抗原对应的表位的基础上，拓展ova抗原对应的表位。
8、本专利技术还提供了一种拓展t细胞表位的药物，其包括如下a~d中的至少一种：
9、a、抗原和xcl1的融合蛋白；
10、b、编码所述融合蛋白的核酸；
11、c、包含所述核酸的载体；
12、d、转化或者转染了所述载体的宿主；
13、本专利技术还提供了一种拓展t细胞表位的药物的制备方法，所述制备方法包括如下i~iv步骤中的至少一种：
14、i、合成编码抗原与xcl1融合蛋白核酸；
15、ii、构建含所述融合核酸序列的载体；
16、iii、用所述核酸或载体构建表达抗原和xcl1融合蛋白的宿主；
17、iv、利用所述宿主表达并纯化抗原和xcl1的融合蛋白。
18、具体地，本专利技术还提供一种融合蛋白，其包括：xcl1肽段、连接肽段和gp100肽段。
19、所述的融合蛋白中，所述xcl1可为人源的，或者动物源的，例如，可为鼠源、兔源、猪源、牛源、马源或羊源；其可以为野生型蛋白或经过优化或突本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.XCL1在制备拓展T细胞抗原表位的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗原包括肿瘤抗原。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的抗原包括黑色素瘤抗原GP100；所述拓展T细胞抗原表位包括：在GP100抗原对应的表位的基础上，拓展OVA抗原对应的表位。
4.一种拓展T细胞表位的药物，其特征在于，包括如下a~d中的至少一种：
5.一种拓展T细胞表位的药物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下i~iv步骤中的至少一种：
6.一种融合蛋白，其包括：XCL1肽段、连接肽段和GP100肽段。
7.根据权利要求6所述的融合蛋白，其特征在于，所述XCL1的氨基酸序列如SEQ:ID NO：7所示；所述GP100的氨基酸序列如SEQ:ID NO：3所示或如SEQ ID NO:8所示。
8.编码权利要求6~7中任一项所述融合蛋白的核酸。
9.一种载体，其特征在于，包括载体骨架和权利要求8所述的核酸。
10.根据权利要求9所述的载体，其特征在于，所
11.转化或转染了权利要求9或10所述载体的宿主。
12.根据权利要求11所述的宿主，其特征在于，包括哺乳动物的细胞。
13.权利要求6~7中任一项所述的蛋白、权利要求8所述的核酸，权利要求9或10所述的载体和/或权利要求11或12所述的宿主在制备抗黑色素瘤的药物中的应用。
14.一种抗黑色素瘤的药物，其特征在于，包括如下1~4中的至少一种：
...【技术特征摘要】
1.xcl1在制备拓展t细胞抗原表位的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗原包括肿瘤抗原。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的抗原包括黑色素瘤抗原gp100；所述拓展t细胞抗原表位包括：在gp100抗原对应的表位的基础上，拓展ova抗原对应的表位。
4.一种拓展t细胞表位的药物，其特征在于，包括如下a~d中的至少一种：
5.一种拓展t细胞表位的药物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下i~iv步骤中的至少一种：
6.一种融合蛋白，其包括：xcl1肽段、连接肽段和gp100肽段。
7.根据权利要求6所述的融合蛋白，其特征在于，所述xcl1的氨基酸序列如seq:id no：7所示；所述g...
【专利技术属性】
技术研发人员：王晓芳，曲春枫，陈坤，王旭东，吴中严，王嵛，
申请(专利权)人：诺未科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：
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