抗新型冠状病毒S蛋白的单克隆抗体及其应用制造技术

本说明书实施例提供了一种抗新型冠状病毒S蛋白的单克隆抗体及其应用。该单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区。所述重链可变区包括氨基酸序列为SEQ ID NO:1所示的CDRH1、氨基酸序列为SEQ ID NO:2所示的CDRH2和氨基酸序列为SEQ IDNO:3所示的CDRH3。所述轻链可变区包括氨基酸序列为SEQ ID NO:4所示的CDRL1、SEQ ID NO:5所示的CDRL2和SEQ ID NO:6所示的CDRL3。本发明专利技术同时提供了编码该单克隆抗体的核酸分子、包括该单克隆抗体的组合物和检测新型冠状病毒的试剂盒、该单克隆抗体在预防、抑制和/或治疗抗新型冠状病毒的产品中的应用、在制备检测抗新型冠状病毒S蛋白的试剂中的应用。本发明专利技术的单克隆抗体具有较高的灵敏性和特异性，有助于设计和开发抗新冠病毒的药物并且能够应用于免疫学检测。能够应用于免疫学检测。

【技术实现步骤摘要】
抗新型冠状病毒S蛋白的单克隆抗体及其应用


[0001]本说明书涉及生物医药
，具体涉及一种抗新型冠状病毒S蛋白的单克隆抗体及其应用。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒导致的新型冠状病毒肺炎是当前全球关注的公共健康问题。2020年2 月11日，这种新型冠状病毒被国际病毒分类委员会命名为SARS
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CoV
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2(重症急性呼吸系统综合症冠状病毒2，也称为2019
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nCoV(2019新型冠状病毒))，同日，世界卫生组织将该病毒所感染的肺炎命名为COVID
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19。SARS
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CoV
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2与严重急性呼吸综合征冠状病毒 (SARS
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CoV)、中东呼吸综合症冠状病毒(MERS
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CoV)都是源自动物的人畜共患病原体。尽管冠状病毒通常与人类急性呼吸道感染有关，但其感染多种宿主物种的能力使其成为复杂的病原体。由新型冠状病毒(SARS
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CoV
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2)引起的COVID
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19大流行在世界各地肆虐，并造成数百万住院和死亡。
[0003]因此，一方面，有必要建立快速筛选和检测新型冠状病毒的方法，以筛选出感染者或潜在者，并对他们进行隔离或治疗。目前已知的检测方法有实时荧光定量PCR法、血清抗体检测法、抗原检测法等。其中，抗原检测法为通过单克隆抗体检测SARS
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CoV
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2的相应抗原靶标，是一种准确、快速、简单和易于使用的诊断方法。而单克隆抗体作为抗原检测法的核心原材料，起着重要作用。另一方面，有必要研发出能够有效预防、抑制和/或治疗新型冠状病毒的药物，其中，抗体作为病毒治疗重要的手段，重要性不言而喻。

技术实现思路

[0004]根据本说明书的一个方面，提供了一种抗新型冠状病毒S蛋白的单克隆抗体。该单克隆抗体可以包括重链可变区和轻链可变区。所述重链可变区包括氨基酸序列为SEQ IDNO:1所示的CDRH1、氨基酸序列为SEQ ID NO:2所示的CDRH2和氨基酸序列为SEQIDNO:3所示的CDRH3。所述轻链可变区包括氨基酸序列为SEQ ID NO:4所示的CDRL1、 SEQ ID NO:5所示的CDRL2和SEQ ID NO:6所示的CDRL3。
[0005]在一些实施例中，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:7所示，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:8所示。
[0006]根据本说明书的另一个方面，提供了一种核酸分子。所述核酸分子可以包括编码上述抗新型冠状病毒S蛋白的单克隆抗体的核苷酸序列。
[0007]根据本说明书的另一个方面，提供了一种组合物。所述组合物可以包括上述抗新型冠状病毒S蛋白的单克隆抗体，其中，所述组合物用于预防、抑制和/或治疗抗新型冠状病毒。
[0008]根据本说明书的另一个方面，提供了抗新型冠状病毒S蛋白的单克隆抗体在制备预防、抑制和/或治疗抗新型冠状病毒的产品中的应用。
[0009]根据本说明书的另一个方面，提供了一种检测新型冠状病毒的试剂盒。所述试剂
盒包括上述抗新型冠状病毒S蛋白的单克隆抗体。
[0010]根据本说明书的再一个方面，提供了抗新型冠状病毒S蛋白的单克隆抗体在制备检测抗新型冠状病毒S蛋白的试剂中的应用。
具体实施方式
[0011]如本申请和权利要求书中所示，除非上下文明确提示例外情形，“一”、“一个”、“一种”和/或“该”等词并非特指单数，也可包括复数。一般说来，术语“包括”与“包含”仅提示包括已明确标识的步骤和元素，而这些步骤和元素不构成一个排它性的罗列，方法或者设备也可能包含其它的步骤或元素。
[0012]2019
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nCoV(SARS
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CoV
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2)有四种主要的结构蛋白：刺突蛋白(spike protein，也称为 S蛋白)、核衣壳蛋白(nucleocapsid protein，也称为N蛋白)、膜蛋白(membrane protein，也称为M蛋白)和包膜蛋白(envelope protein，也称为E蛋白)。
[0013]S蛋白由较长的膜外区、跨膜区和膜内区组成，属于第一类病毒膜融合蛋白(Class Iviral fusion protein)。不同冠状病毒的S蛋白最显著的区别在于病毒的组装和释放过程中是否被宿主蛋白酶切割。成熟的S蛋白通常会被宿主蛋白酶(半胱氨酸蛋白酶、胰蛋白酶等) 切割成两个亚基：S1和S2。S1亚基可进一步分成两个相对独立的区域(domain)，分别是 N
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端区域(N
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terminal domain，NTD)和C
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端区域(C
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terminal domain，CTD)。S1包含有受体结合域(receptor binding domain，RBD)，大部分的冠状病毒S蛋白的RBD都位于 CTD，例如SARS
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CoV和MERS
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CoV等。只有少部分β冠状病毒的RBD位于NTD(通常 NTD结合糖类受体，CTD结合蛋白类受体)。S2亚基通过跨膜区锚定在膜上，它含有膜融合过程所需要的基本元件，包括：一个内在的膜融合肽(fusion peptide，FP)，两个7肽重复序列(heptad repeat，HR)、一个跨膜临近区(juxamembrain domain，JMD)和一个跨膜结构域(transmembrane domain，TMD)，以及C末端的胞浆区域(cytoplasmic domain， CD)(约40个氨基酸长度)。
[0014]新型冠状病毒的S蛋白的RBD是病毒进入宿主细胞的关键部位。当S蛋白的RBD 与细胞表面受体(ACE2)的相应部位特异结合后，诱导S2的融合核心螺旋结构发生构象变化，卷曲螺旋折叠形成发夹样结构，发夹样结构使病毒与细胞膜拉在一起，最终引起融合，该步骤是病毒感染宿主细胞的关键。S蛋白是宿主中和抗体的重要作用位点。S蛋白可通过 RBD的基因重组或突变可以实现不同宿主间传播，并导致较高致死率。
[0015]根据上述描述，S蛋白可选择作为针对冠状病毒疫苗设计的关键靶点。所有冠状病毒都具有保守的功能模体(motif)，分别位于S1(RBD序列具有高度保守性)和S2(S2 比S1区域的氨基酸序列更为保守)结构域，对RBD及S2区的研究，有助于设计冠状病毒疫苗和开发新的抗冠状病毒药物。
[0016]因此，本申请制备了抗SARS
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CoV
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RBD蛋白的抗体，以抑制病毒感染。具体地，运用HEK293F细胞表达的SARS
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CoV
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RBD蛋白免疫Balb/c小鼠，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，通过特异性的高通量筛选得到具有高度特异性的杂交瘤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗新型冠状病毒S蛋白的单克隆抗体，其特征在于，包括重链可变区和轻链可变区，其中，所述重链可变区包括氨基酸序列为SEQ ID NO:1所示的CDRH1、氨基酸序列为SEQ ID NO:2所示的CDRH2和氨基酸序列为SEQ ID NO:3所示的CDRH3；以及所述轻链可变区包括氨基酸序列为SEQ ID NO:4所示的CDRL1、SEQ ID NO:5所示的CDRL2和SEQ ID NO:6所示的CDRL3。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:7所示，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:8所示。3.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包括编码权利要求1或2所述的抗新型冠状病毒S蛋白的单克隆抗体的核苷酸序列。4.根据权利要求3所述的核酸分子，其特征在于，编码所述重链可变区的CDRH1、CDRH2和CDRH3的核苷酸序列分别为SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11所示，编码所述轻链可变区...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏文涛，上官科科，
申请(专利权)人：杭州旭科生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：