用于新型冠状病毒Delta突变株检测的标记抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种用于新型冠状病毒Delta突变株检测的标记抗体及其应用，属于新冠病毒检测技术领域。标记抗体包括包含重链可变区和轻链可变区，其氨基酸序列如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8所示。该标记抗体能够与新冠病毒Delta突变株Spike蛋白上的T478K突变位点特异性结合，与常见的包被抗体联用，能够快速、精准、高效地检测和鉴别出新冠病毒Delta突变株，具有非常高的灵敏度和特异性，不仅能用于新型冠状病毒Delta突变株的鉴定，制备相应的胶体金试纸条和检测试剂盒，还能用于制备相关的治疗药物。还能用于制备相关的治疗药物。还能用于制备相关的治疗药物。

【技术实现步骤摘要】
用于新型冠状病毒Delta突变株检测的标记抗体及其应用


[0001]本专利技术属于新冠病毒检测
，特别是用于新型冠状病毒Delta突变株检测的标记抗体。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒(SARS
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CoV
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2)是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株。人感染了冠状病毒后常见体征有呼吸道症状、发热、咳嗽、气促和呼吸困难等；较严重时可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭，甚至死亡。自新冠疫情爆发以来，随着新冠病毒本身的不断演进，突变速度越来越快。多种凶悍的新冠突变株来势汹汹，袭击全球，其在人群中的传播速度、感染效率和严重程度均有不同程度的提高，给人类疫情防控造成巨大困难。例如，近期流行的Delta突变株，其具备的3个重要突变L452R、T478K和P681R，致使其潜伏期变短、传播速度变快，以及感染力增加等特征，造成了Delta突变株的全球大流行。目前，国内外针对新冠病毒突变株的检测主要应用二代测序的方法检测。但是基于NGS的二代测序检测方法耗时且昂贵。市场迫切地需要一种能够快速又经济的平台对突变体进行准确检测。
[0003]现有技术中，例如中国专利申请CN113584232A提供了一种新型冠状病毒及其德尔塔突变株检测试剂盒及其检测方法，该方法提供了一种检测德尔塔突变株的引物探针组合。又例如中国专利申请CN113563475A提供了一种抗新型冠状病毒的双特异性抗体及其应用，该抗体对印度的B.1.617
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1毒株(德尔塔毒株) 的中和活性极高。然而，这种双特异性抗体，其主要应用于制备治疗新冠病毒的药物和疫苗。本专利技术制备的标记抗体，则旨在可以通过与非突变位点表位抗体进行配对，组成免疫夹心检测方法，应用于胶体金检测试剂盒的开发，可以经济且速地检测新冠病毒的delta突变株。

技术实现思路

[0004]针对以上现有技术的不足，本专利技术提供了一种用于新型冠状病毒Delta突变株检测的标记抗体及其应用方法，利用该标记抗体能够实现新冠病毒Delta突变株的快速检测，该方法不仅可以检测新冠病毒，而且还可快速、精准地检测和鉴别新冠病毒Delta突变株。并应用于新冠病毒Delta突变株的快速检测试剂盒(例如胶体金、ELISA等)的开发，为全球防疫提供一种经济且有效检测的工具。有鉴于此，特提出本专利技术，具体通过以下技术实现。
[0005]用于新型冠状病毒Delta突变株检测的标记抗体，包含重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区包含氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的CDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的CDR2、氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的CDR3，还包含氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示的FR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示的FR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的FR3，氨基酸序列如SEQ ID NO.7 所示的FR4；
[0006]所述轻链可变区包含：氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示的CDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示的CDR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示的CDR3，还包括氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示的FR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.12 所示的FR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.13所
示的FR3，氨基酸序列如SEQ IDNO.14所示的FR4。
[0007]上述重链和轻链的连接结构为FR1
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CDR1
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FR2
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CDR2
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FR3
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CDR3
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FR4。
[0008]优选地，上述标记抗体中，所述重链可变区和轻链可变区通过天然肽键或肽链连接，或通过人工肽链连接。
[0009]优选地，重链的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示或经一个或多个氨基酸的替换、缺失或插入得到的具有相同功能的蛋白的氨基酸序列，轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示或经一个或多个氨基酸的替换、缺失或插入得到的具有相同功能的蛋白的氨基酸序列。
[0010]本专利技术还提供了能够编码上述用于新型冠状病毒Delta突变株检测的标记抗体的基因，所述重链的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示，所述轻链的核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示。本专利技术还提供了上述标记抗体的制备方法，采用以下步骤制备获得：
[0011]S1、构建重组人新型冠状病毒Delta突变株S1蛋白的真核表达质粒，经转染HEK293细胞进行表达，亲和层析柱纯化，获得纯化Delta突变株S1蛋白；
[0012]S2、使用纯化Delta突变株S1蛋白作为免疫原免疫小鼠，将从中获得的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合为杂交瘤细胞；
[0013]S3、培养该杂交瘤细胞，并进行亚克隆筛选，获得分泌的单克隆抗体及杂交瘤细胞。
[0014]获得上述单克隆抗体后，进行Delta突变株S1蛋白突变位点表位抗体的筛选和鉴定；对筛选获得的标记抗体进行测序，获得标记抗体重链和轻链可变区序列。
[0015]本专利技术还提供了含有能够编码上述标记抗体的基因的生物材料，所述生物材料是重组DNA、表达盒、载体、宿主细胞、工程菌或细胞系。
[0016]针对上述标记抗体的应用方法和应用领域，用于制备纤维素膜上喷涂有金标的所述标记抗体的检测新型冠状病毒Delta突变株的胶体金试纸条；或用于制备含有所述的标记抗体的检测新型冠状病毒Delta突变株的酶联免疫试剂盒、胶体金试剂盒、化学发光免疫试剂盒；或通过基因技术，对所述标记抗体进行人源化构建，用于制备治疗新型冠状病毒Delta突变株的药物组合物。
[0017]优选地，上述标记抗体的应用方法中，在制备胶体金试纸条时，检测线上包被有包被抗体，质控线上包被有羊抗鼠IgG；在制备酶联免疫试剂盒时，包括含有所述标记抗体的试剂和含有所述包被抗体的试剂。
[0018]更优选地，所述包被抗体由1株或2株单克隆抗体组成，所述包被抗体与新冠病毒Delta突变株的Spike蛋白的NTD、RBD非突变区表位特异结合；
[0019]或者与氨基酸序列C端的非突变区保守序列表位特异结合；
[0020]或者与Spike蛋白的T19R，G142D，R158G，L452R，T478K，D614G，P681R 突变位点中的1或2个特异结合的单克隆抗体。
[0021]进一步优选地，所述包被抗体与新冠病毒Delta突变株的Spike蛋白的NTD、 RBD非突变区表位区特异结合。
[0022]以上所述的包被抗体可以选用市售常见的或是通过自身合成，且具有上述功能的抗体。
[0023]与现有技术相比，本专利技术的有益之处在于：本专利技术提供的标记抗体，能够与新冠病毒Delta突变株Spike蛋白上的T478K突变位点特异性结合，将其与常见的用于新冠病毒检
测的包被抗体联用后，能够快速、精准、高效地从新冠病毒感染人员中检测和本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于新型冠状病毒Delta突变株检测的标记抗体，其特征在于，包含重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区包含氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的CDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的CDR2、氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的CDR3，还包含氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示的FR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示的FR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的FR3，氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示的FR4；所述轻链可变区包含：氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示的CDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示的CDR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示的CDR3，还包括氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示的FR1、氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示的FR2，氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示的FR3，氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示的FR4。2.根据权利要求1所述的用于新型冠状病毒Delta突变株检测的标记抗体，其特征在于，所述重链可变区和轻链可变区通过天然肽键或肽链连接，或通过人工肽链连接。3.根据权利要求1所述的用于新型冠状病毒Delta突变株检测的标记抗体，其特征在于，重链的氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示或经一个或多个氨基酸的替换、缺失或插入得到的具有相同功能的蛋白的氨基酸序列，轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示或经一个或多个氨基酸的替换、缺失或插入得到的具有相同功能的蛋白的氨基酸序列。4.编码权利要求3所述的用于新型冠状病毒Delta突变株检测的标记抗体的基因，其特征在于，所述重链的核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示，所述轻链的核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示。5.权利要求1
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3任一项所述的标记抗体的制备方法，其特征在于，采用以下步骤制备获得：S1、构建重组...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾大勇，曾琦，
申请(专利权)人：武汉奥科博泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：