一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法技术

本发明专利技术公开了一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法。该方法采用超高效液相色谱法应用紫外检测器来测定动物胆汁中胆绿素以及有关物质含量，其色谱条件如下：色谱柱为phenomenex kinetex

【技术实现步骤摘要】
一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法


[0001]本专利技术涉及一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法。

技术介绍

[0002]胆色素是动物胆汁的主要基本成分之一，由棕黄色的胆红素和青绿色的胆绿素组成，两者的含量比例和浓度的不同而使胆汁呈现各种颜色。人的胆汁几乎只含有前者，通常是黄褐至红褐色。一般地，肉食动物的胆液多含胆红素；草食动物的胆液多含胆绿素，多少带有绿色。
[0003]胆绿素是由血红蛋白分解产生的血红素被氧化、失去铁，使卟啉环打开而形成。胆绿素又名去氢胆红素，暗绿色片状或柱状晶体，约300℃变黑，分解而不熔化，无熔点。可溶于甲醇、乙醚、氯仿、二硫化碳、苯中，难溶于水，并广泛存在于动物胆汁中。
[0004]现有的关于胆绿素含量检测方法主要包括以下专利和文献。
[0005]1.Zl201810979793.4，公开了一种检测鸭蛋壳色素的方法；
[0006]2.Zl201610866121.3，公开了一种胆绿素制剂及其在防治猪繁殖与呼吸综合征中的应用和检测方法；
[0007]3.“胆绿素的溶出伏安法研究以及胆红素的间接测定”(鲁贤丹，曾百肇，张悟铭，周性尧；《分析化学》，1995，23(1)，39～41)；
[0008]4.“鸡蛋、鸭蛋与鹌鹑蛋壳色素含量的比较”(李笑，付强，张配颖，牛文晓，黄天成，李梦雨；《绿色科技》，2018年8月第16期)；
[0009]现有专利以及文献中关于胆绿素含量检测方法，主要以溶出伏安法以及光度法(紫外分光光度计定性或者定量)为主，因此对于工业化提取和生产胆绿素，存在非常大的不便，不能快速和准确的定量胆绿素含量。但未有专利和文献收载利用超高效液相色谱法(UPLC)同时分离和定量检测动物胆汁中胆绿素的含量。故此，现有胆绿素含量的检测方法有待于进一步完善。

技术实现思路

[0010]本专利技术的目的在于：克服现有技术中的不足之处，提供一种快速有效测定动物胆汁中胆绿素含量的检测方法，本专利技术采用超高效液相色谱法应用紫外检测器(UPLC
‑
UV法)来测定动物胆汁中胆绿素以及有关物质含量。区别于传统紫外分光光度计法，本方法应用超高效液相色谱法能快速、准确地分离定量动物胆汁中胆绿素含量，大大缩短了分析时间，提高了检测效率，且该分析方法专属性强。
[0011]为了实现上述目的，本专利技术采取以下技术方案：
[0012]一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法，采用超高效液相色谱法应用紫外检测器来测定动物胆汁中胆绿素含量以及有关物质，其色谱条件为：
[0013]色谱柱：phenomenex kinetex
‑
XB C18，100mm
×
2.1mm
×
1.7um；
[0014]流动相A：浓度0.05mol/L的三(羟甲基)氨基甲烷水溶液，用磷酸调节溶液pH为
4.0；
[0015]流动相B：乙腈和四氢呋喃按体积1:1的混合溶液；
[0016]设定梯度洗脱条件如下表所示：
[0017][0018]设定流速为0.35mL/min；
[0019]设定柱温为40℃；
[0020]设定检测波为376nm；
[0021]设定进样量为2.0uL。
[0022]本专利技术中，一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法，其特征在于所述定量测定包括以下步骤：
[0023]1)取胆绿素对照品，用稀释剂溶解成浓度为0.005mg/mL的对照品溶液，取胆汁样品用稀释剂溶解为浓度为10mg/mL的供试品溶液；
[0024]2)分别取对照品溶液以及供试品溶液各2uL注入液相色谱仪中，记录色谱图中胆绿素的峰面积，按照外标法来计算，胆汁样品中胆绿素的含量。
[0025]所述动物胆汁为鸡胆汁、鸭胆汁、鹅胆汁、猪胆汁、牛胆汁、羊胆汁中的一种。优选动物胆汁为鸡胆汁或鸭胆汁。且应用于本专利方法验证所用的胆汁为鸡胆汁和鸭胆汁。
[0026]本专利技术中，所述稀释剂为二甲基亚砜。
[0027]由于在动物胆汁中还存在其它胆色素类物质，如猪牛胆汁中存在胆红素，因此还应包括系统适应性测定，测定方法如下：
[0028]分别取胆绿素、胆红素对照品，置于同一容量瓶中，用稀释剂溶解成胆绿素浓度为0.005mg/mL和胆红素浓度为0.02mg/mL的混合对照溶液，摇匀即得系统适应性溶液，取2uL进样记录色谱图各峰的分离度和理论塔板数。
[0029]本专利技术的优点和有益效果如下：
[0030]1、本专利技术方法能够快速准确的测定动物胆汁中胆绿素的含量；
[0031]2、相对现有的一些应用光度法(紫外分光光度计)胆色素检测方法，本专利技术方法应用超高效液相色谱(UPLC
‑
UV)检测方法，该方法专属性强，准确性高；
[0032]3、由于动物胆汁中还存在其它胆色类物质，如胆红素，而现有的胆绿素检测方法，无法排除动物胆汁中胆红素的干扰，无法分离胆绿素和胆红素两种胆色素类物质，更无法有效定量动物胆汁中胆绿素的含量，而本方法在UPLC条件下，利用小粒径的超高压液相色谱柱的分离优势，能准确分离动物胆汁中胆绿素和胆红素，同时准确定量动物胆汁中胆绿
素的含量，大大缩短了分析时间，提高了检测效率。
[0033]4、本专利技术选用性价比较高的紫外检测器(UV)，应用反相超高效液相色谱法，本方法灵敏度高、可靠性强，检测成本低，适用于动物胆汁中胆绿素提取生产中间产品控制以及中间体的质量考察。
附图说明
[0034]图1为空白溶剂(稀释剂)色谱图；
[0035]图2为实施例中胆绿素对照溶液平行样1色谱图；
[0036]图3为实施例中胆绿素对照溶液平行样2色谱图；
[0037]图4为实施例中鸡胆汁样品供试溶液平行样1色谱图；
[0038]图5为实施例中鸡胆汁样品供试溶液平行样2色谱图；
[0039]图6为实施例中鸭胆汁样品供试溶液平行样1色谱图；
[0040]图7为实施例中鸭胆汁样品供试溶液平行样2色谱图。
[0041]图8为系统适应性测定中胆红素对照溶液平行样1色谱图；
[0042]图9为系统适应性测定中胆红素对照溶液平行样2色谱图；
[0043]图10为胆绿素及胆红素系统适应性溶液色谱图；
具体实施方式
[0044]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明，但并不局限于此。
[0045]实施例
[0046]如图1～图7所示，本实施例一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法中所述动物胆汁主要选用胆绿素含量较高的鸡胆汁和鸭胆汁；
[0047]本实施例所采用的色谱条件为：
[0048]色谱柱：phenomenex kinetex
‑
XB C18，2.1mm
×
100mm，1.7um或效能相当色谱柱；
[0049]流动相A：浓度0.05mol/L的三(羟本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法，其特征在于，采用超高效液相色谱法应用紫外检测器来测定动物胆汁中胆绿素以及有关物质含量，其色谱条件为：色谱柱：phenomenex kinetex
‑
XB C18，100mm
×
2.1mm
×
1.7μm；流动相A：浓度0.05mol/L的三羟甲基氨基甲烷水溶液，用磷酸调节溶液pH为4.0；流动相B：乙腈和四氢呋喃按体积1:1的混合溶液；设定梯度洗脱条件如下表所示：设定流速为0.35mL/min；设定柱温为40℃；设定检测波为376nm；设定进样量为2.0μL。2.根据权利要求1所述的一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法，其特征在于所述定量测定包括以下步骤：1)取胆绿素对照品，用稀释剂溶解成浓度为0.005mg/mL的对照品溶液，取胆汁样品用稀释剂溶解为浓度为10mg/mL的供试品溶液；2)分别取对照...

【专利技术属性】
技术研发人员：娄良，张和平，郭然，
申请(专利权)人：中山百灵生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：