不同分子量范围的透明质酸钠的分离和测定分子量的方法技术

本发明专利技术属于医药和分析检测领域，涉及一种不同分子量范围的透明质酸钠的分离和/或测定分子量的方法。具体地，一种通过高效液相色谱测定透明质酸钠样品的分子量的方法，其中，色谱条件如下：色谱柱为SRT SEC

【技术实现步骤摘要】
不同分子量范围的透明质酸钠的分离和测定分子量的方法


[0001]本专利技术属于医药和分析检测领域，涉及一种不同分子量范围的透明质酸钠的分离和/或测定分子量的方法；具体地，涉及一种通过高效液相色谱，分离不同分子量范围透明质酸钠混合物和/或测定分子量范围的方法。

技术介绍

[0002]透明质酸钠(Sodiumhyaluronate,SH)是由(1y4)
‑
O
‑
B
‑
D
‑
葡糖醛酸
‑
(1y3)
‑2‑
乙酰氨基
‑
2脱氧
‑
B
‑
D
‑
葡萄糖双糖单位重复连接构成的糖胺聚糖的钠盐，为酸性粘多糖。透明质酸钠可用做眼科的保护剂、关节腔内注射剂及美容产品，具有较高的临床价值。
[0003]透明质酸钠的各种临床疗效与其分子量(重均分子量Mw)紧密相关，不同分子量范围具有不同的用途，用于滴眼剂、骨科、眼科手术和美容产品的重均分子量有不同的规定，随着临床的需求与制剂技术的发展，将不同分子量范围的透明质酸钠混合物添加到产品中，获得了多重临床效果。因此，产品中不同分子量范围的透明质酸钠分子量的控制就成为了关键检测指标。然而透明质酸钠的检测也是难点，一个重要原因是，每段分子量范围的透明质酸钠均呈现一定的分布宽度，且水溶液黏度较大，在色谱柱中不同分子量范围的透明质酸钠不容易分离，需要全新摸索开发分离方法，并进行对应检测。
[0004]检测透明质酸钠的含量普遍采用硫酸咔唑显色反应，以D
‑
葡萄糖醛酸内酯为对照品，紫外分光光度法进行检测。用于透明质酸钠分子量测定的方法主要有特性黏度法和分子排阻色谱法(SEC法)。透明质酸钠的制剂产品常以单一分子量范围为主，现有检测方法也仅限于此类产品的检测，例如国内外药典普遍采用以Shodex SB
‑
806HQ为色谱柱的分子排阻色谱法进行检测，但仅限于单一分子量范围的透明质酸钠分子量检测。然而随着不同分子量范围的透明质酸钠应用于同一个产品中，由于涉及不同分子量范围的透明质酸钠混合物，所以并不适用于用特性黏度法测定。另外，目前的检测方法中，流动相中加入的起防腐作用的叠氮钠属于剧毒品，易爆炸，有较大安全隐患。
[0005]由此，尚需要开发针对不同分子量范围的透明质酸钠的检测方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术人经过深入的研究和创造性的劳动，得到了一种对不同分子量范围透明质酸钠混合物进行分离并测定分子量的方法。本专利技术人惊奇地发现，本专利技术能够使不同分子量范围的透明质酸钠的混合物达到较好的分离，分子量检测结果有良好稳定性和重复性，突破了现有的仅能检测单一分子量范围透明质酸钠分子量的技术局限性，为不同分子量范围透明质酸钠混合物有效分离并检测分子量提供依据。另外，流动相中加入ProClin200试剂取代叠氮钠，避免了叠氮钠的危险性(剧毒、易爆炸)，提高了安全性。由此提供了下述专利技术：
[0007]本专利技术的一个方面涉及一种通过高效液相色谱分离透明质酸钠和/或测定透明质酸钠样品的分子量的方法，其中，色谱条件如下：
[0008]色谱柱为SRT SEC
‑
150(5μm,7.8x300mm)、SRT SEC
‑
500(5μm,7.8x300mm)和SRT SEC
‑
2000(5μm,2000(5μm,7.8x300mm)三根色谱柱串联；
[0009]流动相为氯化钠水溶液，浓度为0.18
‑
0.22mol/L，其中按照体积百分比加入0.01％
‑
0.05％(即1000ml流动相中加入0.1ml
‑
0.5ml ProClin200试剂)ProClin200试剂；
[0010]色谱柱温度(同检测器温度)为40℃
‑
50℃；
[0011]流速为0.7
‑
0.9ml/min；并且
[0012]进样体积为90
‑
110μl。
[0013]在本专利技术的一些实施方式中，所述的方法，其中，待测样品为不同分子量(例如2种、3种或4种分子量)的透明质酸钠的混合物。
[0014]在本专利技术的一些实施方式中，所述的方法，其中，待测样品为分子量2万的透明质酸钠和分子量35万的透明质酸钠的混合物。
[0015]在本专利技术的一些实施方式中，所述的方法，其中，待测样品为分子量2万的透明质酸钠和分子量60万的透明质酸钠的混合物。
[0016]在本专利技术的一些实施方式中，所述的方法，其中，待测样品为分子量2万的透明质酸钠和分子量150万的透明质酸钠的混合物。
[0017]在本专利技术的一些实施方式中，所述的方法，其中，待测样品为分子量2万的透明质酸钠和分子量300万的透明质酸钠的混合物。
[0018]在本专利技术的一些实施方式中，所述的方法，其中，待测样品为分子量选自2万、35万、60万、150万和300万中的任意2种、任意3种、任意4种或者全部5种的透明质酸钠的混合物。
[0019]在本专利技术的一些实施方式中，所述的方法，其中，待测样品中各透明质酸钠的质量相等。
[0020]本专利技术的方法能够有效地分离透明质酸钠样品(混合物)中各分子量的透明质酸钠；和/或本专利技术的方法能够有效地测定(检测出)透明质酸钠样品(混合物)中各透明质酸钠的分子量。
[0021]在本专利技术的一些实施方式中，所述的方法，其中，三根色谱柱串联的顺序依次为：
[0022]SRT SEC
‑
150(5μm,7.8x300mm)、SRT SEC
‑
500(5μm,7.8x300mm)和SRT SEC
‑
2000(5μm,7.8x300mm)；
[0023]SRT SEC
‑
150(5μm,7.8x300mm)、SRT SEC
‑
2000(5μm,7.8x300mm)和SRT SEC
‑
500(5μm,7.8x300mm)；
[0024]SRT SEC
‑
500(5μm,7.8x300mm)、SRT SEC
‑
150(5μm,7.8x300mm)和SRT SEC
‑
2000(5μm,7.8x300mm)；
[0025]SRT SEC
‑
500(5μm,7.8x300mm)SRT SEC
‑
2000(5μm,7.8x300mm)和SRT SEC
‑
150(5μm,7.8x300mm)；
[0026]SRT SEC
‑
2000(5μm,7.8x300mm)、SRT SEC
‑
150(5μm,7.8x300mm)和SRT SEC
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种通过高效液相色谱测定透明质酸钠样品的分子量的方法，其中，色谱条件如下：色谱柱为SRT SEC
‑
150(5μm,7.8x300mm)、SRT SEC
‑
500(5μm,7.8x300mm)和SRT SEC
‑
2000(5μm,2000(5μm,7.8x300mm)三根色谱柱串联；流动相为氯化钠水溶液，浓度为0.18
‑
0.22mol/L，其中按照体积百分比加入0.01％
‑
0.05％ProClin200试剂；色谱柱温度(同检测器温度)为40℃
‑
50℃；流速为0.7
‑
0.9ml/min；并且进样体积为90
‑
110μl。2.根据权利要求1所述的方法，其中，三根色谱柱串联的顺序依次为：SRT SEC
‑
150(5μm,7.8x300mm)、SRT SEC
‑
500(5μm, 7.8x300mm)和SRT SEC
‑
2000(5μm,7.8x300mm)；SRT SEC
‑
150(5μm,7.8x300mm)、SRT SEC
‑
2000(5μm,7.8x300mm)和SRT SEC
‑
500(5μm,7.8x300mm)；SRT SEC
‑
500(5μm,7.8x300mm)、SRT SEC
‑
150(5μm, 7.8x300mm)和SRT SEC
‑
2000(5μm,7.8x300mm)；SRT SEC
‑
500(5μm,7.8x300mm)SRT SEC
‑
2000(5μm, 7.8x300mm)和SRT SEC
‑
150(5μm,7.8x300mm)；SRT SEC
‑
2000(5μm,7.8x300mm)、SRT SEC
‑
150(5μm,7.8x300mm)和SRT SEC

【专利技术属性】
技术研发人员：刘继东，杨强，杨晨，
申请(专利权)人：沈阳兴齐眼药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：