皂苷纯化制造技术

公开了含有通过214nm处的紫外吸光度确定的至少88％QS

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】皂苷纯化


[0001]本申请总体上涉及皂苷提取物，特别是皂树(Quillaja saponaria Molina)的提取物，其制备方法和相关方面。

技术介绍

[0002]疫苗中包含佐剂以改善体液和细胞免疫反应，特别是在较差免疫原性的亚单位疫苗的情况下。类似于病原体的自然感染，佐剂依靠先天免疫系统的激活来促进持久的适应性免疫。
[0003]佐剂系统01(AS01)是一种基于脂质体的佐剂，其包含两种免疫刺激剂，3
‑
O
‑
去酰基
‑
4'
‑
单磷酰脂质A(3D
‑
MPL)和QS
‑
21(Garcon and Van Mechelen,2011；Didierlaurent et al.,2017)。3D
‑
MPL是一种来自明尼苏达沙门氏菌(Salmonella minnesota)的脂多糖的无毒衍生物(其是一种TLR4激动剂)，而QS
‑
21是一种来自南美树木皂树树皮的天然皂苷提取物(Kensil et al.,1991；Ragupathi et al.,2011)。AS01包含在最近开发的疟疾疫苗(RTS,S
‑
Mosquirix
TM
)和带状疱疹(Herpes zoster)疫苗(HZ/su
‑
Shingrix
TM
)中，以及针对人类免疫缺陷病毒和结核分枝杆菌等病原体开发的多种候选疫苗中。
[0004]AS01注射在动物模型中导致先天免疫的快速和瞬时激活。免疫接种后，嗜中性粒细胞和单核细胞迅速募集到引流淋巴结(dLN)。此外，AS01诱导MHCII
高
树突细胞(DC)的募集和激活，这是T细胞激活所必需的(Didierlaurent A.M.et al.,2014)。关于AS01组分的作用机制的一些数据也是可得的。3D
‑
MPL通过TLR4发出信号，从而刺激NF
‑
KB转录活性和细胞因子的产生，并直接激活人类和小鼠中的抗原呈递细胞(APC)(De Becker et al.,2000；Ismaili et al.,2002；Martin et al.,2003；Mata
‑
Haro et al.,2007)。QS
‑
21促进小鼠中的高抗原特异性抗体反应和CD8+T细胞反应(Kensil和Kammer,1998；Newman et al.,1992；Soltysik et al.,1995)和人类中的抗原特异性抗体反应(Livingston et al.,1994)。由于其物理特性，人们认为QS
‑
21可能在体内充当危险信号(Lambrecht et al.,2009；Li et al.,2008)。尽管QS
‑
21已被证明激活ASC
‑
NLRP3炎性体和随后的IL
‑
1β/IL
‑
18释放(Marty
‑
Roix,R.et al.,2016)，但涉及皂苷佐剂作用的确切分子途径尚未明确。
[0005]与被批准用作人类药物的产品的任何组分一样，QS
‑
21的生产需要使用经批准的制造工艺并仔细控制最终组成，以确保其符合安全有效的规范。现有工艺的修改需要昂贵且耗时的重新验证，而偏离规范也会导致废品。用于制造QS
‑
21和确定成分的QS
‑
21材料的稳健方法是被持续需要的。
[0006]市售AS01中包含的QS
‑
21皂苷提取物目前含有3％或更少的三萜糖苷组分(称为2018组分)。本专利技术人已经观察到具有更高百分比的2018组分的QS
‑
21皂苷提取物显示出类似的生物活性特征。

技术实现思路

[0007]本专利技术提供了一种皂苷提取物，其包含通过214nm的紫外吸光度确定的(i)至少
88％的QS
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21主峰和(ii)>3至10％的2018组分。
[0008]还提供了一种皂苷提取物，其含有(i)通过214nm的紫外吸光度确定的至少为88％的负离子电喷雾质谱m/z为1855.9、1987.9或2001.9的三萜糖苷，以及(ii)通过214nm的紫外吸光度确定的>3至10％的m/z为2017.9的三萜糖苷。
[0009]此外，提供了一种皂苷提取物，其含有通过214nm的紫外吸光度确定的(i)至少88％的：
[0010][0011]以及(ii)>3至10％的：
[0012][0013]此外，提供了一种用于制造皂苷提取物的方法，其包括以下步骤：
[0014](i)选择具有合适的2018组分组成的皂树的粗水提取物；
[0015](ii)使用聚苯乙烯树脂通过反相色谱法纯化提取物；以及
[0016](iii)使用苯基树脂(phenyl resion)通过反相色谱法纯化提取物。
[0017]提供了本专利技术的皂苷提取物在制备药物中的用途。
[0018]还提供了包含本专利技术皂苷提取物的佐剂组合物和疫苗组合物。
附图说明
[0019]图1：皂树树皮粗水提取物的HPLC谱图。
[0020]图2：皂树树皮粗水提取物的HPLC
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UV谱图。
[0021]图3：皂树树皮粗水提取物的UPLC
‑
UV谱图。
[0022]图4：低2018组分含量的聚苯乙烯皂树QS
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21纯化皂苷提取物的UPLC
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UV谱图。
[0023]图5：低2018组分含量的皂树QS
‑
21纯化皂苷提取物的UPLC
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UV/MS谱图。
[0024]图6：低2018组分含量的皂树QS
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21纯化皂苷提取物的UPLC
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UV/MS详细谱图。
[0025]图7A
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7B：低2018组分含量的皂树QS
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21纯化皂苷提取物的1988(图7A)和2002(图7B)分子量离子的提取质谱图。
[0026]图8：低2018组分含量的皂树QS
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21纯化皂苷提取物的组合质心谱。
[0027]图9：用于制备2018组分富集的皂苷提取物的低2018组分含量的皂树QS
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21纯化皂苷提取物的UPLC
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UV谱图。
[0028]图10A
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10B：2018组分富集的纯化皂苷提取物的批次A(图10A)和批次B(图10B)的UPLC
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UV谱图和峰测量值。
[0029]图11：由具有增加的2018组分百分比的QS
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种皂苷提取物，其包含通过214nm处的紫外吸光度确定的(i)至少88％的QS
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21主峰和(ii)>3％至10％的2018组分。2.根据权利要求1所述的皂苷提取物，其中所述提取物含有至少4.5％的2018组分。3.根据权利要求1或2中任一项所述的皂苷提取物，其中所述提取物含有9％以下的2018组分。4.根据权利要求1所述的皂苷提取物，其含有通过214nm处的紫外吸光度确定的至少98％的QS
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21组、至少88％的QS
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21主峰、>3％至10％的2018组分、1％或更少的所述QS
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21组外的最大峰，并且其中最丰富的物质的单同位素是1987.9m/z。5.一种皂苷提取物，其含有通过214nm处的紫外吸光度确定的(i)至少88％，如至少90％、至少91％、至少92％或至少93％的m/z为1855.9、1987.9和/或2001.9的三萜糖苷，以及(ii)>3％至10％的m/z为2017.9的三萜糖苷。6.根据权利要求5所述的皂苷提取物，其含有通过214nm处的紫外吸光度确定的至少98％的m/z为1517.7、1711.8、1855.9、1987.9、2001.9、2017.9和/或2118的三萜糖苷，至少88％的m/z为1855.9、1987.9和/或2001.9的三萜糖苷，>3％至10％的m/z为2017.9的三萜糖苷，1％或更少任何其他峰，并且其中最丰富的物质的单同位素的m/z为1987.9。7.一种皂苷提取物，其含有通过214nm处的紫外吸光度确定的(i)至少88％，如至少90％、至少91％、至少92％或至少93％的：
和/或
以及(ii)>3％至10％的：8.根据权利要求7所述的皂苷提取物，其含有至少98％的
和/或
9.根据权利要求7或8的皂苷提取物，其含有通过214nm处的紫外吸光度确定的至少98％的
和/或至少88％，如至少90％、至少91％、至少92％或至少93％的：
和/或
>3％至10％的：1％或更少的任何其他峰，并且其中最丰富的物质的单同位素是1987.9m/z。10.根据权利要求7至9中任一项所述的皂苷提取物，其含有通过214nm处的紫外吸光度确定的至少98％的
和/或2118组分，至少88％，如至少90％、至少91％、至少92％或至少93％的：
和/或>3％至10％的：
1％或更少的任何其他峰，并且其中最丰富的物质的单同位素是1987.9m/z。11.根据权利要求7至10中任一项所述的皂苷提取物，其包含通过214nm处的紫外吸光度确定的至少3.5％，如至少4％或至少4.5％的12.根据权利要求10至11中任一项所述的皂苷提取物，其包含通过214nm处的紫外吸光度确定的9％以下，如8％以下或7％以下的：
13.根据权利要求1至12中任一项所述的皂苷提取物，其含有通过214nm处的紫外吸光度和通过相对离子丰度确定的至少40％，如至少50％，特别是至少60％，尤其是至少65％，如至少70％的1988组分。14.根据权利要求1至13中任一项所述的皂苷提取物，其包含如通过214nm处的紫外吸光度和通过相对离子丰度确定的90％或更少，如85％或更少，或80％...

【专利技术属性】
技术研发人员：C，
申请(专利权)人：葛兰素史克生物有限公司，
类型：发明
国别省市：