芫花花蕾中瑞香烷型二萜类化合物的制备和应用制造技术

芫花花蕾中瑞香烷型二萜类化合物的制备和应用，属于医药技术领域，具体涉及从瑞香科瑞香属植物芫花花蕾中提取分离的两个新瑞香烷型二萜类化合物yuanhuakine A,D。本发明专利技术所述化合物是采用硅胶、HP20柱层析、ODS柱层析、HPLC等色谱方法得到的。本发明专利技术还涉及化合物1

【技术实现步骤摘要】
芫花花蕾中瑞香烷型二萜类化合物的制备和应用


[0001]本专利技术属于医药
，具体涉及从芫花花蕾中提取分离得到的2个瑞香烷型二萜类化合物，及其在制备抗肿瘤生物活性方面的应用。

技术介绍

[0002]肿瘤是严重威胁人类健康和生命的主要疾病之一。随着生活环境的变化，人们生活压力的加剧，恶性肿瘤的发病年龄也逐渐年轻化，对于抗肿瘤药物的研发也需要进一步加快。其中，从天然产物中寻找活性成分，也是抗肿瘤药物研发中的重要发展方向。
[0003]此前的文献报道称芫花(Daphne genkwa Sieb.et Zucc.)中具有多种化学成分，其中瑞香烷型二萜具有较好抗肿瘤细胞活性。本专利技术所涉及的瑞香烷型二萜类化合物是通过对芫花花蕾提取制备获得的，具有较好的抗肿瘤细胞系活性。本专利技术所涉及的化合物及其活性，迄今为止尚未见有专利或文献报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术首要目的是提供2个瑞香烷型二萜类化合物及其制备方法；
[0005]本专利技术还提供所述瑞香烷型二萜类化合物在制备具有抗肿瘤活性药物中的用途。
[0006]本专利技术所述2个从瑞香科瑞香属植物芫花中提取分离得到的瑞香烷型二萜类化合物，结构如下：
[0007][0008]本专利技术的制备技术方案包括如下步骤：
[0009](1)取干燥的芫花花蕾以70％工业乙醇回流提取，合并提取液浓缩得到浸膏，所得浸膏先后采用二氯甲烷，乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩后经硅胶柱色谱，以二氯甲烷
‑
甲醇系统进行梯度洗脱，共收集到4个馏分(Fr.A～Fr.D)。
[0010](2)馏分Fr.C经HP20柱色谱分离，以乙醇水梯度洗脱，收集得到4个馏分(Fr.C
‑
1～Fr.C
‑
4)。
[0011](3)馏分Fr.C
‑
1,Fr.C
‑
2,Fr.C
‑
3,Fr.C
‑
4经ODS柱分离，交叉合并，以乙醇水梯度洗脱，收集得到新的4个馏分(Fr.C
‑
I，Fr.C
‑
II，Fr.C
‑
III，Fr.C
‑
IV)。
[0012](4)馏分Fr.C
‑
II和Fr.C
‑
IV分别经硅胶柱，经石油醚/乙酸乙酯梯度洗脱；其中馏分Fr.C
‑
II洗脱得到的馏分Fr.C
‑
II
‑
3经制备型HPLC，以甲醇/水洗脱，得到10个馏分(Fr.C
‑
II
‑3‑
1～Fr.C
‑
II
‑3‑
10)，其中馏分Fr.C
‑
II
‑3‑
4再经过半制备型HPLC色谱，以乙腈/水洗脱，分离纯化得到化合物1；馏分Fr.C
‑
IV洗脱得到的馏分Fr.C
‑
IV
‑
4经制备型HPLC，以甲醇/水洗脱，得到14个馏分(Fr.C
‑
IV
‑4‑
1～Fr.C
‑
IV
‑4‑
14)，馏分Fr.C
‑
IV
‑4‑
10再经过半制备型HPLC色谱，以乙腈/水洗脱，分离纯化得到化合物2。
[0013]上述制备方法，其中：
[0014]步骤(1)中二氯甲烷
‑
甲醇的梯度为：100:1～1:1(v/v)。
[0015]步骤(2)中乙醇水的梯度洗脱浓度为：20％,40％,60％,90％。
[0016]步骤(3)中乙醇水的梯度洗脱浓度为：20％,40％,60％,80％,90％。
[0017]步骤(4)中石油醚/乙酸乙酯为100:1～1:2(v/v)，制备液相甲醇/水的比例为85:15(v/v)，半制备液相乙腈/水的比例为70:30(v/v)。
[0018]所得的化合物1和2经过系统结构鉴定，结果如图1
‑
17及如下内容所示：
[0019]化合物1，无色晶体(CH3OH)；[α]2
D 0
‑
29.1(c 0.10,CH3OH)，根据其HRESIMS给出分子离子峰[M+H]+
m/z 609.2678(calcd for C
34
H
41
O
10
,609.2694)，确定分子式为C
34
H
40
O
10
，不饱和度15。UV光谱给出223nm处有明显吸收峰，UV(CH3OH)λ
max
(logε):225nm。
[0020]1H NMR(600MHz,CDCl3)谱的低场区中存在十个芳香质子信号δ8.01(1H,m),7.92(2H,m),7.55(1H,m),7.49(1H,m),7.43(2H,t,J＝7.8Hz),7.38(2H,t,J＝7.8Hz)，提示该化合物存在两个单取代的苯环；一组末端双键上的质子信号δ5.16(1H,s),5.17(1H,s)；4个连氧次甲基质子信号δ6.02(1H,dd,J＝3.0Hz),4.57(1H,d,J＝5.1Hz),4.09(1H,dd,J＝9.9,2.1Hz),3.56(1H,s)；1对连在季碳上的羟甲基质子信号4.74(1H,d,J＝12.7Hz)，δ4.31(1H,d,J＝12.7Hz)。高场区存在1个连在季碳上的甲基δ1.88(3H,s),2个连在叔碳上的甲基δ1.01(3H,d,J＝6.5Hz),0.95(3H,d,J＝7.2Hz)。
13
C NMR(150MHz,CDCl3)谱中显示有34个碳信号，其中两个苯甲酰氧基上的羰基碳信号δ167.1,166.4；一对末端双键碳信号δ145.1,114.2；两组单取代苯环上的碳信号δ133.4,133.2,130.0
×
3,129.9
×
2,129.5,128.6
×
2,128.5
×
2。同时，瑞香烷型二萜原酸酯δ117左右的特征季碳信号消失，说明该化合物的原酸酯的氧环开裂。在高场区，存在3个甲基碳信号δ19.2,15.6,15.8。通过以上核磁数据判断该化合物为具有两个苯甲酰基取代的瑞香烷型二萜类化合物。根据在该化合物的HMBC谱中存在δ6.02(H
‑
14)到δ167.1(C
‑
1')以及δ4.74和4.31(H2‑
20)到δ167.1(C
‑
1”)的相关，确定了两个苯甲酰基基团分别连接在该化合物的C
‑
14和C
‑
20位。综上分析可确定该化合物的平面结构。
[0021]在NOESY光谱中，H
‑
10/H
‑
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种芫花花蕾中瑞香烷型二萜类化合物，其特征在于，所述瑞香烷型二萜类化合物结构如下：2.根据权利要求1所述的芫花花蕾中瑞香烷型二萜类化合物，其特征在于，所述的瑞香烷型二萜类化合物是从瑞香科瑞香属植物芫花花蕾中提取分离得到。3.一种权利要求1或2所述芫花花蕾中瑞香烷型二萜类化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取干燥的芫花花蕾以工业乙醇回流提取，合并提取液浓缩得到浸膏，所得浸膏先后采用二氯甲烷，乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩后经硅胶柱色谱，以二氯甲烷
‑
甲醇系统进行梯度洗脱，共收集到4个馏分(Fr.A～Fr.D)；(2)馏分Fr.C经HP20柱色谱分离，以乙醇水梯度洗脱，收集得到4个馏分(Fr.C
‑
1～Fr.C
‑
4)；(3)馏分Fr.C
‑
1,Fr.C
‑
2,Fr.C
‑
3,Fr.C
‑
4经ODS柱分离，交叉合并，以乙醇水梯度洗脱，收集得到新的4个馏分(Fr.C
‑
I，Fr.C
‑
II，Fr.C
‑
III，Fr.C
‑
IV)；(4)馏分Fr.C
‑
II和Fr.C
‑
IV分别经硅胶柱，经石油醚/乙酸乙酯梯度洗脱；其中馏分Fr.C
‑
II洗脱得到的馏分Fr.C
‑
II
‑
3经制备型HPLC，以甲醇/水洗脱，得到10个馏分(Fr.C
‑
II
‑3‑
1～Fr.C
‑
II
‑3‑
10)，其中馏分Fr.C
‑
II
‑...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋少江，黄肖霄，米斯会，
申请(专利权)人：沈阳药科大学，
类型：发明
国别省市：