抗PD-1抗体及其稳定制剂制造技术

本发明专利技术提供了一种结合人PD

【技术实现步骤摘要】
抗PD
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1抗体及其稳定制剂
[0001]本专利申请要求于2020.7.14日提交的申请号为202010676464.X的中国专利申请的优先权益，在此将其全部内容引入作为参考。


[0002]本专利技术涉及抗体药物领域，具体而言，本专利技术涉及一种抗PD
‑
1抗体、其稳定制剂、制药用途。

技术介绍

[0003]程序性细胞死亡蛋白1(PD
‑
1)，也被称为CD279，是T细胞受体CD28家族的成员，表达于多种免疫细胞，如T细胞，B细胞，单核细胞等的表面，是一种在肿瘤微环境中抑制CD4+和CD8+ T细胞功能的重要的免疫检查点分子。PD
‑
1的关键配体包括PD
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L1(B7
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H1)和PD
‑
L2(B7
‑
DC)，它们由免疫细胞表达，并且还可以在多种组织上诱导，当T细胞上的PD
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1结合PD
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L1或PD
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L2时，T细胞接收抑制信号，从而抑制T细胞增殖和细胞因子产生，会有效降低T细胞参与的免疫应答。而PD
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L1和PD
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L2在多种人类肿瘤细胞上高表达，因此使得肿瘤细胞逃避T细胞的监督(Pardoll DM.The blockade of immune checkpoints in cancer immunotherapy.Nat.Rev.Cancer12(4),252
–<br/>264(2012))。
[0004]目前在全球范围内已上市的抗人PD
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1的单抗共有3种。抗人PD
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1的全人源抗体纳武单抗(Nivolumab)显示抑制PD
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1与PD
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L1和PD
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L2的结合，临床用于治疗晚期黑色素瘤，非小细胞肺癌，肾细胞癌，霍奇金淋巴瘤，头颈部鳞癌，尿路上皮癌，结直肠癌和肝细胞癌；抗人PD
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1的人源化抗体派姆单抗(Perbrolizumab)显示抑制PD
‑
1与PD
‑
L1和PD
‑
L2的结合，临床用于治疗恶性黑色素瘤，非小细胞肺癌，经典型霍奇金淋巴瘤，头颈部鳞癌，d
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mmr突变或MSI
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H恶性肿瘤(Alsaab et al.PD
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1and PD
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L1Checkpoint Signaling Inhibition for Cancer Immunotherapy:Mechanism,Combinations,and Clinical Outcome.Front.Pharmacol.8:561)。抗人PD
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1的Libtayo单抗(Cemiplimab)可与PD
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1结合并阻断其与PD
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L1和PD
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L2的相互作用，释放PD
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1通路介导的免疫应答抑制，包括抗肿瘤免疫应答,临床用于治疗转移性皮肤鳞状细胞癌(CSCC)患者或局部晚期CSCC患者(Markham,A.&amp;Duggan,S.Drugs.2018.doi:10.1007/s40265
‑
018
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1012
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5)。国内处于临床阶段的抗人PD
‑
1的单抗就有10多种，适应症覆盖复发难治恶性淋巴瘤，霍奇金淋巴瘤，B细胞非霍奇金淋巴瘤，腺泡状软组织肉瘤，晚期或复发性恶性肿瘤，食管癌、胃癌或胃食管结合部癌，鼻咽癌、头颈部鳞癌，肺癌，转移性结直肠癌，局限性肾细胞癌，尿路上皮癌，肝细胞癌，黑色素瘤，晚期三阴性乳腺癌，胸膜间皮瘤，晚期神经内分泌肿瘤，不可切除或d
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mmr突变或MSI
‑
H实体瘤。其中恒瑞的SHR
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1210、百济神州的tislelizumab、信达的IBI
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308已递交上市申请，君实的JS001已于12月17日有条件批准上市，名为特瑞普利单抗注射液(商品名：拓益)。国际上，抗PD
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1的抗体已经有三个上市品种，多个临床在研品种。涉及的专利包括：WO2004004771，WO2006121168，WO2008156712，WO2010029435，WO2012145493，WO2015085847，US20170044260，CN104250302，CN105330740，CN105531288等。
[0005]针对PD
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1的抗体研究众多，目前已有多个抗PD
‑
1抗体上市或正在进行临床试验，虽然抗PD
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1抗体对多种肿瘤确有治疗效果，然而在具体临床应用中也经常出现疗效不佳、治疗失败的案例。导致PD
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1抗体治疗失败原因涉及肿瘤疾病的复杂性、患者个体差异性等多种因素，其中抗PD
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1抗体稳定性不足也是影响肿瘤治疗效果的重要原因之一。抗PD
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1抗体作为一种生物大分子，结构复杂，在生产和贮存过程中，会发生聚集、变性、沉淀等物理变化及异构化、脱酰胺和氧化等化学变化。这些改变会影响产品的安全性及有效性。目前提高抗PD
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1抗体稳定性的技术路线主要集中于：抗体分子结构改良和修饰，抗体制剂的优化和筛选。由于不同的抗PD
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1抗体的分子结构、结合表位、治疗活性等方面均存在差异，因此针对新研发的抗PD
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1抗体必需针对其具体情况研究适用的稳定制剂，以减少其在施用于受试者前因理化性状改变而导致的疗效损失。

技术实现思路

[0006]本专利技术要解决的技术问题是，提供一种抗PD
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L1的抗体分子，利用杂交瘤技术获得鼠抗体，通过抗体活性分析(ELISA(结合，阻断)，亲和力动力学)获得候选鼠抗体后；将鼠抗体轻重链基因可变区序列克隆至编码人抗体轻重链恒定区序列的上游，进行哺乳动物细胞表达，制备嵌合抗体，然后通过抗体活性分析，阻断PD
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1与其配体结合实验，与CD28其他家族成员结合实验，与细胞表面PD
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1结合实验，体外细胞学实验确定先导抗体后；根据Germline数据库选择人源化模板，进行抗体序列人源化设计，获得的人源化抗体再次通过抗体活性分析，阻断PD
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1与其配体结合实验，与CD28其他家族成员结合实验，与细胞表面PD
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1结合实验，体外细胞学实验验证后；再进行人源化抗体对体内外肿瘤细胞生长抑制实验进行最后的成药性评价，获得亲和力和特异性保持不变的PD
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1人源化抗体序列。在抗PD
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1人源化抗体晶体复合物结构解析的基础上，进行CDR区定向突变，以获得具本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区(VH)选自SEQ ID NO:54或SEQ ID NO:62；所述轻链可变区(VL)选自SEQ ID NO:52或SEQ ID NO:60。2.一种抗体或其抗原结合片段，其是以权利要求1所述抗体或其抗原结合片段为出发抗体，根据出发抗体与PD
‑
1抗原晶体复合物的结构解析，通过CDR定向进化改造产生的，至少部分的保留了出发抗体对PD
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1的亲和力，优选比出发抗体对PD
‑
1的亲和力高。3.如权利要求2所述抗体或其抗原结合片段，至少部分的保留了出发抗体对PD
‑
1的亲和力是指保留了出发抗体对PD
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1亲和力的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％。4.如权利要求2或3所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述抗体或其抗原结合片段的轻链可变区与出发抗体轻链可变区相比，在选自第24、30、32、50、55、56、91、92、93、94、96位中的一个或多个位点存在氨基酸突变；和/或所述抗体或其抗原结合片段的重链可变区与出发抗体重链可变区相比，在选自第31、32、33、52、53、54、55、56、57、100、101、106位中的一个或多个位点存在氨基酸突变；所述轻链可变区的氨基酸残基位点编号根据SEQ ID NO:60确定；所述重链可变区的氨基酸残基位点编号根据SEQ ID NO:62确定。5.如权利要求4所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述抗体或其抗原结合片段的轻链可变区与出发抗体轻链可变区相比，存在以下一个或多个氨基酸置换：K24R、E30S、V32A、V32Y、W50A、W50G、H55A、H55Q、T56S、Y91A、Y91F、S92D、S92N、R93N、R93S、Y94F、W96G和W96Y；和/或所述抗体或其抗原结合片段的重链可变区与出发抗体重链可变区相比，存在以下一个或多个氨基酸置换：S31D、Y32A、Y32N、D33S、D33Y、S52K、S52W、G53S、G53Y、G54D、G54S、G55S、S56G、Y57T、Y59A、Y59T、D100E、D100Y、S101A和Y106T。6.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段与权利要求1
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【专利技术属性】
技术研发人员：章燕珍，任杰，梅菲，汤沛霈，陈坤，谭小钉，
申请(专利权)人：江苏迈威康新药研发有限公司，
类型：发明
国别省市：