抗CD38蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及生物检测领域，提供了一种抗CD38蛋白单克隆抗体,其重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。其制备方法中，免疫小鼠所用的抗原为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列编码，经由大肠杆菌重组表达的重组蛋白。发明专利技术人还提供了一株分泌抗CD38蛋白的杂交瘤细胞系，所述细胞系为小鼠杂交瘤细胞系13B5B11C8，保藏号为：CGMCC NO.22319。抗CD38蛋白单克隆抗体,具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达CD38蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。检测。检测。

【技术实现步骤摘要】
抗CD38蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物检测领域，特别涉及抗CD38蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]CD38是一种单链跨膜Ⅱ型糖蛋白，分子量为45kD，包括1个长的羧基端胞外区(258个氨基酸)，1个跨膜区(21个氨基酸)和1个短的氨基端胞内区(21个氨基酸)。人类CD38基因位于4号染色体(4p15),延伸超过62kb。该基因包含7个内含子和8个编码CD38蛋白的外显子。
[0003]CD38是一种具有受体和酶介导功能的多功能蛋白，可作为受体、黏附分子和外切酶。CD38有多种生理功能,可作为受体、黏附分子和外切酶。CD38主要表达于淋系和髓系细胞,也在一些非造血细胞低水平表达(如前列腺上皮细胞,胰腺B细胞,破骨细胞,视网膜细胞等)。在正常人体中，约有20％的人骨髓细胞表达CD38,主要分布在浆细胞、髓细胞、红系细胞、前体细胞以及小部分T细胞中。外周血液中，90％的浆细胞为CD38阳性，自然杀伤细胞和单核细胞中约有60％表达CD38。大多数髓样胸腺细胞均表达CD38,循环T细胞则不表达,而又在活化的T细胞中诱导表达。早期的干细胞和祖细胞均不表达CD38,但也在B细胞上表达,且浆细胞CD38表达水平特别高,这些特点使CD38成为了治疗浆细胞疾病的重要靶点。

技术实现思路

[0004]专利技术人提供了一种抗CD38蛋白单克隆抗体，所述单克隆抗体重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。
[0005]进一步地，所述单克隆抗体重链和轻链可变区氨基酸序列分别是SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列所编码。
[0006]进一步地，所述单克隆抗体制备过程中，免疫小鼠所用的抗原为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列编码，经由大肠杆菌重组表达的重组蛋白。
[0007]进一步地，所述单克隆抗体特异性识别人CD38蛋白。
[0008]进一步地，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCC NO.22319的杂交瘤细胞系产生。所述细胞系为小鼠杂交瘤细胞系13B5B11C8，分类命名为：小鼠杂交瘤细胞系，该细胞系已于2021年04月29日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
[0009]进一步地，所述抗CD38蛋白为小鼠IgG1亚型单克隆抗体。
[0010]专利技术人还提供了一株分泌抗CD38蛋白的杂交瘤细胞系，所述细胞系为小鼠杂交瘤细胞系13B5B11C8，分类命名为：小鼠杂交瘤细胞系，该细胞系已于2021年04月29日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
[0011]专利技术人还提供以上任一所述的抗CD38蛋白单克隆抗体在人CD38蛋白免疫检测中
的用途。
[0012]进一步地，所述免疫检测包括免疫组织化学法，免疫印迹法和酶联免疫法。
[0013]专利技术人再提供了一种人CD38蛋白免疫检测试剂，所述免疫检测试剂内含有以上任一的抗CD38蛋白单克隆抗体为有效成分。
[0014]区别于现有技术，上述技术方案依据CD38蛋白的结构、抗原性、组成氨基酸的亲疏水性以及二级结构，上述技术方案选取CD38蛋白第99位至第296位氨基酸片段和其对应的核苷酸片段，通过大肠杆菌进行重组表达,对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和克隆，获得高效分泌抗CD38蛋白单克隆抗体的单克隆细胞系13B5B11C8,并对单克隆细胞系13B5B11C8进行体外培养，并获得由该细胞系所分泌的抗CD38蛋白单克隆抗体。本方案得到的抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达CD38蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。
[0015]上述
技术实现思路
相关记载仅是本申请技术方案的概述，为了让本领域普通技术人员能够更清楚地了解本申请的技术方案，进而可以依据说明书的文字及附图记载的内容予以实施，并且为了让本申请的上述目的及其它目的、特征和优点能够更易于理解，以下结合本申请的具体实施方式及附图进行说明。
附图说明
[0016]图1为实施例3纯化后CD38单克隆抗体的电泳结果图；M：分子量标记。
[0017]图2为B细胞淋巴瘤免疫组化染色结果图；其中左为13B5B11C8分泌的的CD38，右为市售CD38(38C03)。
具体实施方式
[0018]为详细说明本申请可能的应用场景，技术原理，可实施的具体方案，能实现目的与效果等，以下结合所列举的具体实施例并配合附图详予说明。本文所记载的实施例仅用于更加清楚地说明本申请的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本申请的保护范围。
[0019]在本文中提及“实施例”意味着，结合实施例描述的特定特征、结构或特性可以包含在本申请的至少一个实施例中。在说明书中各个位置出现的“实施例”一词并不一定指代相同的实施例，亦不特别限定其与其它实施例之间的独立性或关联性。原则上，在本申请中，只要不存在技术矛盾或冲突，各实施例中所提到的各项技术特征均可以以任意方式进行组合，以形成相应的可实施的技术方案。
[0020]除非另有定义，本文所使用的技术术语的含义与本申请所属
的技术人员通常理解的含义相同；本文中对相关术语的使用只是为了描述具体的实施例，而不是旨在限制本申请。
[0021]在本申请的描述中，用语“和/或”是一种用于描述对象之间逻辑关系的表述，表示可以存在三种关系，例如A和/或B，表示：存在A，存在B，以及同时存在A和B这三种情况。另外，本文中字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的逻辑关系。
[0022]在本申请中，诸如“第一”和“第二”之类的用语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何实际的数
量、主次或顺序等关系。
[0023]在没有更多限制的情况下，在本申请中，语句中所使用的“包括”、“包含”、“具有”或者其他类似的表述，意在涵盖非排他性的包含，这些表述并不排除在包括所述要素的过程、方法或者产品中还可以存在另外的要素，从而使得包括一系列要素的过程、方法或者产品中不仅可以包括那些限定的要素，而且还可以包括没有明确列出的其他要素，或者还包括为这种过程、方法或者产品所固有的要素。
[0024]与《审查指南》中的理解相同，在本申请中，“大于”、“小于”、“超过”等表述理解为不包括本数；“以上”、“以下”、“以内”等表述理解为包括本数。此外，在本申请实施例的描述中“多个”的含义是两个以上(包括两个)，与之类似的与“多”相关的表述亦做此类理解，例如“多组”、“多次”等，除非另有明确具体的限定。
[0025]实施例1重组CD38蛋白片段的制备
[0026]一、抗原片段选择
[0027]从Uniprot数据库(http本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗CD38蛋白单克隆抗体，其特征在于,所述单克隆抗体重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于,所述单克隆抗体重链和轻链可变区氨基酸序列分别是SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列所编码。3.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体制备过程中，免疫小鼠所用的抗原为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列编码，经由大肠杆菌重组表达的重组蛋白。4.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体特异性识别人CD38蛋白。5.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCC NO.22319的杂交瘤细胞系产生。6.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书一页说明书六页序列表三页附图一页，
申请(专利权)人：福州迈新生物技术开发有限公司，
类型：发明
国别省市：