含有修饰IgG2结构域的引起激动或拮抗特性的修饰抗体及其用途制造技术

通过体外和体内方法的组合，本发明专利技术人显示人IgG2(h2)向抗

【技术实现步骤摘要】
含有修饰IgG2结构域的引起激动或拮抗特性的修饰抗体及其用途
[0001]本申请是CN201580023010.X的分案申请。
[0002]优先权
[0003]本申请要求2014年3月24日提交的英国申请号1405264.1和2014年3月25日提交的英国申请号1405275.7的优先权，所述申请的内容以引用的方式整体并入本文。
[0004]领域
[0005]本申请大体上涉及以下发现，人IgG2(h2)向抗
‑
CD40抗体和其他免疫刺激受体抗体递送独特的FcγR
‑
独立性激动活性，所述其他免疫刺激受体包括4
‑
1BB和CD28；以及可能地其他B7/CD28和TNF/TNFR家族成员，以及另外的发现，即h2的独特激动或相反地拮抗活性依赖于铰链和C
H
1二硫键的精确排列。基于此发现，本专利技术提供了新颖激动和拮抗抗体以及其在治疗中的用途，其中IgG2的铰链区被诱变为将所述抗体
‘
锁定
’
成更柔性
‘
h2A
’
或更紧密
‘
h2B
’
构象，以便分别赋予抗体拮抗和激动特性。
[0006]背景
[0007]单克隆抗体(mAb)为革命性的癌症治疗，它重新燃起免疫系统可用于根除肿瘤的信念(Sliwkowski等，(2013)；Hodi FS等，(2010)；Wolchok JD等，(2013)。使用抗
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CTLA
‑
4和抗
‑
PD
‑
1mAb的结果已证实以下观点，T
‑
细胞免疫可提供针对攻击性和难以治疗的癌症的持久防护，所述癌症诸如转移性黑色素瘤和非小细胞肺癌。(Hodi FS等，(2010)；Wolchok JD等，(2013)；Topalian SL等，(2012)。不同mAb药剂以不同方式介导其作用并且改进治疗功效需要精确理解其作用机制。此外，mAb同种型的选择主要由于指导抗原接合下游事件的Fcγ受体(FcγR)相互作用中的差异而为关键的(Nimmerjahn F&Ravetch JV(2012)；White AL等，(2013)。
[0008]药剂通过消耗其细胞靶标起作用，诸如用抗
‑
CD20消耗恶性B细胞(Uchida J等，(2004))或用抗
‑
CTLA4和抗
‑
GITR消耗鼠T调节细胞(Simpson TR等，(2013)Bulliard Y等，(2013)。对于这种类型的药剂，小鼠IgG2a(m2a)和人IgG1(h1)为有效的，因为它们具有高激动性/抑制性(A/I)FcγR结合比率(Hamaguchi Y等，The Journal of experimental medicine 203(3):743
‑
753；Nimmerjahn F&Ravetch JV(2005))。相比之下，其作用依赖于激动受体接合的mAb诸如免疫刺激性抗
‑
CD40(Brahmer等，(2012)；Bruhns等，Blood 113,3716
‑
3725或细胞凋亡促进抗死亡受体(DR)4、DR5和Fas(Li F&Ravetch JV(2012)；Wilson NS等，(2011).Xu Y等，(2003)似乎主要依赖于与抑制性FcγRIIB交联来递送其活性(White AL等，(2011)；Li F&Ravetch JV(2013),White等，(2013))。对于这种类型的药剂，小鼠IgG1(m1)在临床前模型中为最佳的，因为它具有低A/I比率并且以足够亲和力接合FcγRIIB，以介导交联(White等，(2011)；Li F&Ravetch JV(2011))。在临床试验中的激动性抗
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CD40 mAb CP870,893(Vonderheide RH等，(2007))为一种人IgG2(h2)，它基于其同种型而未被预测接合Fc？R)(Bruhns P等，(2009)。另外两种激动性较小的CD40抗体ChiLOB7.4和SGN40二者均为h1(Advani R等，(2009)；Johnson等，(2010))。另外，最新研究表明h2恒定区赋予特异性抗人CD28 mAb(TGN1412)增加的刺激活性(Ball C等，(2012))。
[0009]尽管这样，但是在本专利技术之前还不清楚待用于人治疗中的应在激动性mAb或融合蛋白中使用的最佳同种型。具体地说，关于抗体同种型如何可以实现治疗性抗体的治疗特性即其激动性或拮抗特性的理解较少。本专利技术解决了此需要，提供了改进的激动性(以及拮抗性)抗体，并且还提供了用于合成所述抗体的方式。在一个示例性实施方案中，这些抗体和融合蛋白例如靶向TNFR超家族成员的那些抗体和融合蛋白适用于治疗适应症，其中无论是激动性还是拮抗性抗体或融合蛋白均是治疗上需要的。
[0010]概述
[0011]本专利技术提供一种关于用于产生具有激动或拮抗特性的抗体的最佳抗体同种型的理解。更确切地说，本专利技术提供保护具有特异性突变的人IgG2恒定区的抗体，其中根据这些特异性突变，这些抗体具有激动或拮抗特性。
[0012]本专利技术特别利用针对多种人共刺激受体(CD40、4
‑
1BB和CD28)的mAb确定人IgG同种型的免疫调节活性并因此显示人IgG2(h2)比h1或人h4赋予这些药剂更大的免疫刺激活性，并且显示此活性并不依赖于FcgR相互作用中的差异而是依赖于h2铰链和CH1结构域中二硫键的构象，所述构象使用诱变可被操纵成将mAb
‘
锁定
’
成具有相反水平的激动水平的不同构象，从而提供具有限定水平的活性的同源超激动治疗性抗体，所述活性独立于局部微环境中的FcgR表达水平。
[0013]本专利技术还涉及包含具有特异性突变的人IgG2恒定区的此类抗体和融合蛋白在疾病治疗或预防中作为受体激动剂或受体拮抗剂的用途，其中此类受体激动剂或受体拮抗剂具有治疗性应用。在示例性实施方案中，所述抗体将特异性接合TNF超家族成员，诸如CD40、LTα、LTβ、FASL CD30、CD27、OX40、TRAIL/APO
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2L、4
‑
1BB、4
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1BBL、TNF、TNF
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R、TRANCE、TRANCE
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R、GITR或“糖皮质激素诱导的TNF受体”、TWEAK、FN14等；或者接合B7/CD28家族成员，诸如B7.1(CD80)、B7.2(CD86)、B7
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DC(PD
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L2或CD273)、B7
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H1、B7
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H2、B7
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H3(CD本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合人细胞表面上表达的受体或配体的修饰抗体，其中所述修饰抗体激动由所述受体或配体引起的一种或多种生物活性或者由所述配体及其相应受体的相互作用引起的生物活性，其中所述抗体不是人IgG2抗体，并且另外其中不是人IgG2的所述修饰抗体的整个或基本上重链铰链和C
H
1结构域和任选地轻链恒定区被hIgG2抗体相应的整个或基本上整个铰链和C
H
1结构域和任选地轻链恒定区替换。2.根据权利要求1所述的修饰抗体，其选自hIgG1、hIgG3、hIgG4、IgA、IgD、IgE或IgM，其中所述抗体的整个或基本上整个铰链和C
H
1结构域和任选地整个或基本上整个轻链恒定区已被hIgG2相应的整个或基本上整个轻链和铰链和C
H
1结构域(“H2区”或“H2结构域”)替换。3.根据权利要求1或2所述的修饰抗体，其中位置127处的重链半胱氨酸残基和位置214处的轻链半胱氨酸残基中的任一个或两者(其中编号是根据Kabat)是缺失的或者被改变成不同的氨基酸残基，从而使得所述所得修饰抗体的激动特性相对于其中所述半胱氨酸残基中的任一个或两者未改变的其他方面相同抗体有所增加。4.根据权利要求1、2或3所述的修饰抗体，其中在所述修饰抗体的所述H2区中突变或缺失...

【专利技术属性】
技术研发人员：‑，
申请(专利权)人：癌症研究技术有限公司，
类型：发明
国别省市：