一种非梗阻性无精子症的生物标志物组合及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种用于诊断非梗阻性无精子症的生物标志物的组合，所述生物标志物的组合包括FGF1、FGF9和FGF14，可将上述生物标志物的组合用于制备ELISA检测试剂盒，通过检测患者的血样中FGF1、FGF9和FGF14的表达情况来进行非梗阻性无精子症的诊断，可极大的减轻患者的痛苦，具有广阔的应用前景。具有广阔的应用前景。具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种非梗阻性无精子症的生物标志物组合及其应用


[0001]本专利技术属于医学诊断领域，更为具体的，本专利技术涉及一种非梗阻性无精子症的生物标志物的组合及其应用。

技术介绍

[0002]大约30％
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55％的人类不孕不育与男性因素有关，男性不育症最常见的原因是精子发生障碍，临床上称为弱精子症或无精子症。其中10
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15％归因于无精子症。近年来，随着人们生殖健康需求的不断提高，男性不育越来越成为社会关注的焦点。WHO不育症防治专题组的研究表明生殖内分泌功能紊乱，特别是精液质量低下是男性不育的重要病因。在过去50年中，男性精液质量，尤其是精子生成数量有了相当程度的下降，我国的研究也呈现出相类似的情况。男性不育受到多方面因素的影响，包括环境因素，遗传因素以及表观遗传因素。由于短期内遗传变异相对有限，因此我们有理由相信，非梗阻性无精子症更可能是受到了某些环境危险因素的影响。
[0003]成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor,FGF)家族具有促进细胞发育、细胞增殖、转移和分化等功能。FGF家族的22个成员通过结合和激活四种受体酪氨酸激酶(RTKs)编码的不同异构体来介导细胞反应。四种RTKs分别为FGFR1、FGFR2、FGFR3和FGFR4。FGF与肝素或硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)协同作用，以激活FGFR并诱导多效反应，从而导致FGF诱导多种细胞反应。不同的信号蛋白在FGF的刺激下磷酸化，包括Shc、磷脂酶
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Cγ(PLCγ)、STAT1、Gab1和对接蛋白成纤维细胞受体底物2α(FRS2α)，从而刺激细胞内的信号通路，控制细胞繁殖、细胞分化、细胞转移、细胞存活和细胞形态。FGF1作为FGF家族中的一员，因其等电点偏酸性，又被称为酸性成纤维细胞生长因子(acid fibroblast growth factor,aFGF)。FGF1不仅有激活细胞表面特定受体的经典作用方式，也可以独立于受体激活的信号通路来保护细胞免受应激条件的影响。FGF9最初发现于人类神经胶质瘤细胞系，是一种自分泌或旁分泌生长因子,在许多生理过程起着至关重要的作用,包括胚胎发育。主要分布于细胞和组织中,包括成骨细胞、软骨细胞、血管内皮细胞、晶状体上皮细胞,以及皮肤、肝、肾脏、胃、生殖系统、淋巴组织等。研究发现，FGF9具有多种生物学活性,作为胞间信号分子参与血管形成、胚胎发育、损伤修复、细胞凋亡、神经再生、肿瘤生长等多项生理和病理过程,尤其是在卵巢癌发生、骨骼发育、神经再生、性腺分化等过程中起着重要的作用。FGF14起初被发现主要在发育中的脑、脊髓、胸腺中表达，而进一步研究证实FGF14主要在发育中及成熟的神经系统表达，在CNS中高表达。
[0004]Elisa生物试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的
抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。
[0005]目前，临床诊断无精子症的方法主要是通过睾丸穿刺活检，给病人带来巨大痛苦。因此，开发无精子症的生物标志物并将其用于无精子症的检测，是广大患者的普遍需求。

技术实现思路

[0006]为了弥补现有技术的缺陷，本专利技术公开了一种非梗阻性无精子症的生物标志物的组合及其应用，该组合在患者睾丸组织中和血清中均存在显著的差异性表达，因此可通过对患者血液中生物标志物表达量的分析，即可对非梗阻性无精症进行诊断，显著降低患者的痛苦。
[0007]本专利技术的第一个方面，提供一种非梗阻性无精子症的生物标志物的组合及其应用，其中，所述生物标志物的组合为FGF1、FGF9和FGF14。
[0008]在一种实施方式中，在非梗阻性无精子症患者血清和睾丸组织中，FGF1和FGF9的表达量上升，FGF14的表达量下调。
[0009]本专利技术的第二个方面，提供上述生物标志物的组合在用于制备无精子症诊断试剂盒中的应用。优选的，所述试剂盒为ELISA试剂盒。
[0010]本专利技术的第三个方面，提供一种用于诊断非梗阻性无精子症的试剂盒，其中，所述试剂盒包括用于检测样品中FGF1、FGF9和FGF14表达量的试剂。
[0011]在一种实施方式中，上述试剂盒优选为ELISA法检测试剂盒。
[0012]本专利技术相对于现有技术具有如下显著的进步：
[0013]1、本专利技术提供的生物标志物的组合在非梗阻性无精子症患者的血清中和睾丸组织中均存在相同的差异化表达，特异性强、准确度高；
[0014]2、根据上述生物标志物的组合制备的诊断试剂盒可通过抽血检查实现诊断，克服了现有技术中仅能通过睾丸穿刺活检诊断的技术障碍，极大地减轻了患者的痛苦，推动了实现疾病早发现、早诊治的治疗方针，对于无精子症的诊治和研究具有重大的意义。
附图说明
[0015]附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。在附图中：
[0016]图1NOA造模后，ELISA实验结果：FGF1、FGF9和FGF14在血清中的表达水平；
[0017]图2NOA造模后，WB实验结果：FGF1、FGF9和FGF14在组织蛋白中的表达水平；
[0018]图3FGF1免疫组织化学染色；
[0019]图4FGF9免疫组织化学染色；
[0020]图5FGF14免疫荧光染色。
具体实施方式
[0021]以下结合附图对本专利技术的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实
施例仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0022]实施例1小鼠NOA模型的构建
[0023]方法：利用性成熟的雄性小鼠，体重为25
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35g。取白消安溶解于DMSO，以生理盐水稀释得稀释液，在小鼠下腹部酒精消毒，晾干后，吸取白消安稀释液小鼠腹腔注射，完成首次腹腔注射之后，同一天内再间隔3h注射3次，35
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37天后，即得所述无精子症小鼠模型。处死小鼠后取小鼠全血用于ELISA(酶联免疫吸附测定法)，同时取小鼠睾丸组织进行WB、H&E以及免疫荧光染色法检测，从而检验小鼠全血ELISA法的准确性。
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种非梗阻性无精子症的生物标志物的组合，其特征在于，所述生物标志物的组合为FGF1、FGF9和FGF14。2.根据权利要求1所述的生物标志物的组合，其特征在于，在非梗阻性无精子症患者血清和睾丸组织中，FGF1和FGF9的表达量上升，FGF14的表达量下调。3.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚方华，张宏宇，王德仲，肖健，李校堃，
申请(专利权)人：温州医科大学慈溪生物医药研究院，
类型：发明
国别省市：