一种样本保存液及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种样本保存液、其制备方法及应用，涉及分子生物技术领域。本发明专利技术提供的样本保存液包括如下组分：特定浓度的缓冲化合物、表面活性剂、醇和螯合剂，通过上述特定浓度的组分，使得本发明专利技术提供的样本保存液具有安全、稳定、高效的优点，可以在5分钟内将病毒灭活，并可稳定保存病毒样本核酸。本发明专利技术的保存液既可用于保存RNA病毒又可用于保存DNA病毒，在保存的过程中病毒感染力被严重减弱，甚至完全丧失感染力，并且保存液无需进行核酸提取操作，可以直接作为样本模板进行后续核酸扩增检测实验，从而大大简化病毒检测流程和时间，有效提高疫情防控的反应速度和有效性。效提高疫情防控的反应速度和有效性。效提高疫情防控的反应速度和有效性。

【技术实现步骤摘要】
一种样本保存液及其应用


[0001]本专利技术涉及一种既能保存病毒样品又能直接用于核酸扩增的样本保存液，涉及分子生物学


技术介绍

[0002]病毒(Biological virus)是一种个体微小，结构非常简单的非细胞生命形态，由一个核酸长链和蛋白质外壳构成，只含一种核酸(DNA或RNA)，必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型生物，不能独立生存，一旦离开了宿主细胞，就成了没有任何生命活动、也不能独立自我繁殖的化学物质。
[0003]病毒核酸的检测，有助于人类疾病的早期诊断、疑难样本的辅助诊断、耐药性监测、病程监控及预测、指导抗病毒治疗及疗效判定等重要领域。核酸检测主要包括PCR和基因测序两种检测方式，核酸结构的完整性在高效准确的诊断过程中起到了重要作用。因此，如何保存完整的病毒核酸对下游的基因分析具有非常重要的意义。
[0004]病毒核酸很容易降解，尤其是RNA病毒，很容易被广泛存在的内源性或者外源性RNA酶降解。而RNA酶性质稳定，即使高温高压处理也无法使其失活，所以病毒核酸需要严格的储存条件。
[0005]现有的常规的病毒保存方法：(1)
‑
80℃超低温保存；(2)UTM/MTM常规病毒保存液。
‑
80℃超低温保存，对环境设备的要求很高，如实验室没有超低温冰箱，就无法保存，而且病毒离开超低温环境也不便运输。UTM常规病毒保存液保存病毒，无法对病毒进行灭活，活病毒可能会危及医务及操作人员的安全。MTM灭活型病毒保存液，可以安全地灭活病原样本，同时保存和稳定释放的DNA和RNA，但不能直接用于扩增检测，需进行核酸抽提。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的就是提供一种既可以安全灭活病毒、保存病毒，又可以直接用于核酸扩增而无需进行核酸抽提的样本保存液。
[0007]本专利技术的另一个目的在于提供上述样本保存液的制备方法及其应用。
[0008]本专利技术提供了一种样本保存液，所述样本保存液包括：终浓度为10
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100mmol/L的缓冲化合物，体积百分比为5％
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30％的醇，体积百分比为0.01％
‑
2％的表面活性剂和终浓度为0.1
‑
1mmol/L的螯合剂。
[0009]进一步的，所述样本保存液包括：终浓度为20
‑
50mmol/L的缓冲化合物、体积百分比为15％
‑
30％的醇、体积百分比为0.05
‑
2％的表面活性剂和终浓度为0.1
‑
0.5mmol/L的螯合剂；
[0010]优选地，所述样本保存液包括：终浓度为20mmol/L的缓冲化合物、体积百分比为15％的醇、体积百分比为0.5％的表面活性剂和终浓度为0.1mmol/L的螯合剂。
[0011]进一步的，所述缓冲化合物包括磷酸盐缓冲液或HEPES缓冲液。
[0012]进一步的，所述醇包括甲醇、乙醇或丙醇中的一种或多种。
[0013]进一步的，所述表面活性剂包括离子型表面活性剂或非离子型表面活性剂；
[0014]可选地，所述离子型表面活性剂包括十二烷基硫酸钠、十二烷基硫酸锂或月桂酰基肌氨酸钠中的一种或多种；
[0015]可选地，所述非离子型表面活性剂包括4
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壬基苯基
‑
聚乙二醇、乙基苯基聚乙二醇、聚乙二醇辛基苯基醚、吐温或山梨醇酐单月桂酸酯聚氧乙烯(20)醚中的一种或多种。
[0016]优选地，所述去污剂为浓度0.5％的聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X
‑
100)。
[0017]进一步的，所述螯合剂包括EDTA
·
2Na、氨基三乙酸或8
‑
羟基喹啉中的一种或多种。
[0018]进一步的，所述病毒样本保存液的pH为6.5
‑
8。
[0019]本专利技术还提供了上述的病毒样本保存液的制备方法，其包括：将磷酸盐缓冲液、表面活性剂、甲醇、乙醇及溶剂均匀混合，并调节PH值至6.5
‑
8，即获得所述样本保存液。
[0020]另外，本专利技术还提供了上述的样本保存液在保存病毒样本中的应用。其包括：将待保存的病毒DNA或RNA样本置于上述的样本保存液中，混匀，保存。
[0021]综上，本专利技术提供的样本保存液的配方能够在快速裂解病毒释放DNA或RNA的同时，稳定DNA/RNA结构，对其形成保护，在高温放置15天后仍然能够保持DNA/RNA的完整性。本配方组合能够直接用于PCR或RT
‑
PCR扩增，各组分不会对扩增过程产生抑制，免除了DNA/RNA的抽提过程，使得病毒的检测步骤更简单，时间更短。
[0022]与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
[0023]1)本专利技术的样本保存液可以直接裂解样本，并对病毒进行快速灭活，减少运输人员及实验人员的感染危险，具有安全简捷、性能稳定等特点；
[0024]2)本专利技术的样本保存液中的配方成分不会对PCR或RT
‑
PCR检测过程产生抑制，所得样本可以直接用于PCR或RT
‑
PCR核酸检测，无需对样本DNA或RNA进行纯化，使得检测步骤更简便，并节省检测时间；
[0025]3)本专利技术的样本保存液在高温环境下(37℃)能很好的保持DNA或RNA结构完整性长达15天，降低了对样本的保存和运输条件的苛刻要求。
附图说明
[0026]为了更清楚地说明本专利技术具体实施例或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些具体实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0027]图1为本专利技术实施例2提供的实验对照组1的荧光显微镜下结果图，A、阳性对照组：慢病毒液与PBS 1:1稀释；B、阳性对照组：慢病毒液与PBS 1:2稀释；C、阳性对照组：慢病毒液与PBS 1:4稀释。如图1所示，PBS稀释后的慢病毒感染293T细胞，培养5天后，293T细胞产生明显的绿色荧光。说明慢病毒对293T细胞具有较强的感染能力。
[0028]图2为本专利技术实施例2提供的实验对照组2的荧光显微镜下结果图，A、阴性对照组：PBS与保存液Y1:1稀释；B、阴性对照组：PBS与保存液Y1:5稀释；C、阴性对照组：PBS与保存液Y1:9稀释。以PBS代替慢病毒，检测保存液对293T细胞正常培养的影响。结果如图2所示，保存液Y对293T细胞不产生影响，细胞形态与生长速度均正常(图2A、B、C)。
[0029]图3为本专利技术实施例2提供的实验组1的荧光显微镜下结果图，A、保存液Y以1:1比例预处理慢病毒5min；B、保存液Y以1:1比例预处理慢病毒30min；C、保存液Y以1:1比例预处理慢病毒60min。慢病本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种样本保存液，其特征在于，所述样本保存液包含：终浓度为10
‑
100mmol/L的缓冲化合物，体积百分比为5％
‑
30％的醇，体积百分比为0.01％
‑
2％的表面活性剂和终浓度为0.1
‑
1mmol/L的螯合剂。2.根据权利要求1所述的样本保存液，其特征在于，所述样本保存液包括：终浓度为20
‑
50mmol/L的缓冲化合物、体积百分比为15％
‑
30％的醇、体积百分比为0.05
‑
2％的表面活性剂和终浓度为0.1
‑
0.5mmol/L的螯合剂。3.根据权利要求1所述的样本保存液，其特征在于，所述样本保存液包括：终浓度为20mmol/L的缓冲化合物、体积百分比为15％的醇、体积百分比为0.5％的表面活性剂和终浓度为0.1mmol/L的螯合剂。4.根据权利要求1
‑
3所述的样本保存液，其特征在于，所述缓冲化合物包括磷酸盐缓冲液或HEPES缓冲液。5.根据权利要求1
‑
3所述的样本保存液，其特征在于，所述醇包括甲醇、乙醇或丙醇中的一种或...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗英，虞闰六，任绪义，
申请(专利权)人：杭州迪安医学检验中心有限公司，
类型：发明
国别省市：