一种用于检测CALR基因突变的引物组及试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种用于检测CALR基因突变的引物组及试剂盒，包括用于扩增CALR基因的引物组和检测突变型CALR的探针，还包括用于扩增内参PPIH基因的引物组和检测PPIH的探针。本发明专利技术的试剂盒设计了适用于基于微滴式数字PCR系统的引物和探针，以及相应的对照，使其能够用于基于微滴式数字PCR系统的检测系统。本发明专利技术具有操作简便、检测速度快、高灵敏度、特异性强、重复性好、成本低廉等优点，可用于临床CALR L367fs*46(Ⅰ型)、K385fs*47(Ⅱ型)以及E364Gfs*49型突变的快速检测，为临床CALR突变的诊断和治疗提供参考依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子诊断，涉及试剂盒，具体涉及一种用于calr基因突变检测的引物组及试剂盒。

技术介绍

1、calreticulin(calr)是一种由417个氨基酸(mw：46kda)组成的物种间高度保守的伴侣蛋白，主要定位于内质网。calr包含三个不同的结构域：(1)n端凝集素样球状结构域(n-domain)，对发挥calr的伴侣功能至关重要，也负责calr与α整合素的相互作用；(2)中央富脯氨酸(p)结构域，具有高亲和力和低ca2+结合能力；(3)高酸性c端区域(c-domain)，具有低亲和力和高ca2+结合能力，末端kdel序列作为er滞留信号，确保calr能从高尔基体返回到内质网。calr参与新合成蛋白质和糖蛋白的质量控制系统，防止错误折叠的蛋白质过早从内质网输出，calr也参与其他生物稳态的关键过程，包括抗原呈递、ca2+稳态、细胞粘附、整合素信号和危险信号转导等。

2、2013年首次报道了骨髓增生性肿瘤(mpn)中的calr突变，迄今为止，鉴定到的50多种calr突变类型都是在calr的末端9号外显子的阅读框中少量删除或插入核苷酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于检测CALR基因突变的引物组，其特征在于，包括用于扩增CALR基因的引物组合，检测突变型CALR基因的探针与扩增PPIH基因的引物；其中，扩增CALR基因的引物序列包括如SEQ ID NO：1所示的CALR F1引物、如SEQ ID NO：2所示的CALR F2引物、如SEQ IDNO：3所示的CALR F3引物以及SEQ ID NO：4所示的CALR R1引物；所述检测突变型CALR基因的探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示。

2.根据权利要求1所述的一种用于检测CALR基因突变的引物组，其特征在于，还包括用于扩增内参PPIH基因的引物组和检测PPIH的...

【技术特征摘要】

1.一种用于检测calr基因突变的引物组，其特征在于，包括用于扩增calr基因的引物组合，检测突变型calr基因的探针与扩增ppih基因的引物；其中，扩增calr基因的引物序列包括如seq id no：1所示的calr f1引物、如seq id no：2所示的calr f2引物、如seq idno：3所示的calr f3引物以及seq id no：4所示的calr r1引物；所述检测突变型calr基因的探针的核苷酸序列如seq id no：5所示。

2.根据权利要求1所述的一种用于检测calr基因突变的引物组，其特征在于，还包括用于扩增内参ppih基因的引物组和检测ppih的探针；其中，用于扩增内参ppih基因的引物组包括如seq id no：6所示的ppih f引物与seq id no：7所示的ppih r引物；检测ppih的探针的核苷酸序列如seq id no：8所示。

3.根据权利要求1所述的一种用于检测calr基因突变的引物组，其特征在于，如seq idno：1所示的calr f1引物中，第15和第16位核苷酸为lna修饰；

4.根据权利要求1所述的一种用于检测calr基因突变的引物组，其特征在于，检测突变型calr基因的探针序列的5’端标记fam荧光基团，3’端标记bhq1淬灭基团；探针序列中第5、8、10以及14位核苷酸为lna修饰。

5.一种用于检测calr基因突变的试剂盒，其特征在于，包括pcr反应液、数字pcr微流控芯片、微滴生成油、引物探针预混合液、阳性对照以及阴性对照；所述引物探针预混合...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖晨晨，董华，
申请(专利权)人：杭州迪安医学检验中心有限公司，
类型：发明
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