非洲猪瘟病毒细胞系适应毒株的制备、特性分析及其应用制造技术

本发明专利技术公开了在传代细胞系中良好复制的非洲猪瘟病毒(ASFV)适应毒株及其应用。本发明专利技术通过不同传代细胞系的感染实验发现ASFV野毒株(ASFV

【技术实现步骤摘要】
非洲猪瘟病毒细胞系适应毒株的制备、特性分析及其应用


[0001]本专利技术涉及非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)细胞系适 应毒株，尤其涉及在传代细胞系中良好复制的ASFV适应毒株及其可能应 用，属于ASFV细胞系适应毒株及其应用领域。

技术介绍

[0002]非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swinefever virus,ASFV)引起猪的一种接触传染性、广泛出血性、烈性传染病， 最急性和急性型感染死亡率可高达100％(Galindo I,Alonso C.AfricanSwine Fever Virus:A Review.Viruses,2017,9(5).pii:E103.)。ASFV是非 洲猪瘟相关病毒科(Asfarviridae)非洲猪瘟病毒属(Asfivirus)的唯一成 员，也是目前所知唯一可经虫媒传播的DNA病毒(Dixon LK,Chapman DA, Netherton CL,Upton C.African swine fever virus replication and genomics. Virus Res,2013,173(1):3
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14.)。ASFV主要感染单核
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巨噬细胞，可通过巨 胞饮或网格蛋白介导的内吞完成其入侵细胞。成熟的ASFV病毒粒子结构 复杂，主要由基因组、内核心壳、内膜、衣壳和囊膜5部分组成。ASFV 的基因组是约190kb的双链线性DNA分子，可编码近200种蛋白，主要 由3部分组成：末端的发卡环结构、紧邻末端由多基因家族构成的可变区 以及中间比较稳定的保守区。多基因家族基因拷贝数的不同会造成ASFV 不同分离株基因组大小存在差异。ASFV的基因型复杂多变，目前已鉴定 出24种基因型(Quembo CJ,Jori F,Vosloo W,Heath L.Geneticcharacterization of African swine fever virus isolates from soft ticks at thewildlife/domestic interface in Mozambique and identification of a novelgenotype.Transbound Emerg Dis.2018,65(2):420
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431.)。东欧及高加索地 区流行的主要是基因II型，西非地区主要是基因I型，东非和南非则有20 多种基因型。根据ASFV红细胞吸附抑制特性，可将其分为8个血清群。
[0003]ASFV野毒株具有严格的细胞嗜性，主要感染单核巨噬细胞，因此原 代单核细胞或者肺泡巨噬细胞是体外研究ASFV与宿主互作的主要靶细 胞。然而原代细胞的制备费时费力花费巨大、批间重复性差、易污染的特 性限制了ASFV的基础和应用研究。缺乏可支持ASFV良好复制的细胞系 严重制约了ASFV基因功能的研究、毒力相关因子的挖掘、病毒分离和活 疫苗的大规模制备(S
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nchez EG,Riera E,Nogal M,Gallardo C,Fern
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ndez P, Bello
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Morales R,L
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pez
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Guerrero JA,Chitko
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McKown CG,Richt JA,RevillaY.Phenotyping and susceptibility of established porcine cells lines to Africanswine fever virus infection and viral production.Sci Rep.2017；7(1):10369.)。 在异种细胞传代适应是解决上述问题的途径之一。
[0004][0005]在ASF疫苗的众多研发策略中，绝大多数是在原代猪肺泡巨噬细胞中 通过基因工程手段制备的活疫苗，此类疫苗可以提供不同程度的同源或者 异源保护，其他策略的疫苗
候选株保护效率差强人意(Wang T,Sun Y,QiuHJ.African swine fever:an unprecedented disaster and challenge to China. Infect Dis Poverty,2018,7(1):111.)。然而，ASFV基因缺失活疫苗的安全 性需要全面、系统的评估。在异种细胞上传代适应获得的ASFV弱毒株通 常伴随着免疫原性的丧失，无法对ASFV强毒株的攻击提供保护(Krug PW, Holinka LG,O'Donnell V,Reese B,Sanford B,Fernandez
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Sainz I,Gladue DP, Arzt J,Rodriguez L,Risatti GR,Borca MV.The progressive adaptation of ageorgian isolate of African swine fever virus to vero cells leads to a gradualattenuation of virulence in swine corresponding to major modifications of theviral genome.J Virol.2015；89(4):2324
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2332.)。目前仍然缺乏支持ASFV有 效增殖并保持其免疫原性和基因组稳定性的传代细胞系(S
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nchez EG,RieraE,Nogal M,Gallardo C,Fern
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Morales R,L
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Guerrero JA, Chitko
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McKown CG,Richt JA,Revilla Y.Phenotyping and susceptibility ofestablished porcine cells lines to African swine fever virus infection and viralproduction.Sci Rep.2017；7(1):10369.)。该问题严重限制了ASFV与宿主相 互作用的研究，未知功能基因的鉴定和ASF活疫苗的规模化生产。因此， 获得可以在传代细胞系良好增殖的ASFV适应毒株对于ASFV基础和应用 研究等具有重要的价值。

技术实现思路

[0006]本专利技术的主要目的是提供一株在传代细胞系上良好增殖的ASFV适应 毒株。
[0007]本专利技术的目的之二是将所述的ASFV细胞系适应毒株作为模式毒株应 用于ASFV基因功能、适应机制、致病机制等方面的研究或者应用于制备 ASF活疫苗等。
[0008]本专利技术通过不同传代细胞系的感本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.在传代细胞系上良好增殖的非洲猪瘟病毒细胞系适应毒株，其特征在于，其微生物保藏编号是CCTCC NO：V202153。2.按照权利要求1所述的非洲猪瘟病毒细胞系适应毒株，其特征在于，所述的传代细胞是HEK293T细胞。3.权利要求1所述的非洲猪瘟病毒细胞系适应毒株作为减毒株在制备防治非洲猪瘟疫苗中的用途。4.按照权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的非洲猪瘟疫苗是非洲猪瘟病毒活疫苗。5.权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：仇华吉，孙元，王涛，罗玉子，李永锋，吴红霞，李素，李连峰，李淼，张交儿，于少雄，
申请(专利权)人：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心，
类型：发明
国别省市：