【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物抗体，涉及一种具有竞争活性的传染性喉气管炎病毒（infectious laryngotracheitis virus, iltv）单克隆抗体及其应用，特别涉及一种识别iltv糖蛋白j构象表位且具有竞争活性的单克隆抗体、分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，以及该单克隆抗体在iltv抗原、抗体诊断中的应用。
技术介绍
1、鸡传染性喉气管炎（infectious laryngotracheitis, ilt）是由传染性喉气管炎病毒（infectious laryngotracheitis virus, iltv）引起的急性、高度接触性上呼吸道传染病，是当前危害我国养禽业的重要病毒性传染病之一，给养禽业造成了严重的经济损失。目前，防控该病常用的疫苗是减毒活疫苗，但是减毒活疫苗存在潜伏感染和毒力返强等风险，易导致本病的发生和流行，因此，该疫苗通常仅限于在传染性喉气管炎流行地区使用。在这种情况下，iltv抗体的监测显得尤为重要。一方面，在未免疫iltv疫苗的鸡群中，iltv抗体监测有助于了解ilt是否存在及其流行情况，进而及时采取积极有效地防控措施；另一方面，在免疫iltv疫苗的鸡群中，iltv抗体监测有助于判断鸡群的免疫水平，进而指导疫苗免疫程序的制定与优化。
2、在世界动物卫生组织、中华人民共和国农业行业标准和中华人民共和国出入境检验检疫行业标准中均有推荐的iltv抗体检测方法，主要是以全病毒作为包被抗原的间接elisa检测方法，琼脂免疫扩散法和病毒中和试验方法等。虽然每种方法均有各自的优势，但同时也存在一定的
3、单克隆抗体（monoclonal antibodies, mab）是由单一b细胞克隆产生的理化性状高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。其具有与抗原结合特异性强、灵敏度高，可以体外大量制备等优点，在疾病的诊断、预防和治疗等方面被广泛应用。目前，报道的以纯化的iltv或原核表达的iltv重组蛋白为免疫原制备的单克隆抗体主要有针对gb蛋白（张林.鸡传染性喉气管炎病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心elisa检测方法的建立. 扬州: 扬州大学, 2016.）、gd蛋白（张林. 鸡传染性喉气管炎病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心elisa检测方法的建立. 扬州: 扬州大学, 2016.）（胡顺磊, 赵妍, 崔红玉, 等. 禽传染性喉气管炎病毒gd蛋白单克隆抗体的制备. 中国预防兽医学报, 2012, 34(3): 232-234.）、gg蛋白（孙永珍. 传染性喉气管炎病毒ljs09株在lmh细胞上的生长特性研究及糖蛋白gg、gc的抗体制备. 哈尔滨: 哈尔滨兽医研究所, 2014.）（郭鹏宇, 赵妍, 刘胜旺. 鸡传染性喉气管炎病毒gg蛋白间接竞争elisa方法的建立及初步应用. 中国预防兽医学报,2023, 45(7): 704-709.）的单克隆抗体，也有针对性gj蛋白的单克隆抗体（jifeng yu, yilin, ye cao, et al. development and application of a colloidal gold teststrip for the rapid detection of the infectious laryngotracheitis virus.poultry science, 2020, 99: 2407-2415.）（jutta veits, bernd kollner, jens p.teifke, et al. isolation and characterization of monoclonal antibodiesagainst structural proteins of infectious laryngotracheitis virus. aviandiseases, 2003, 47(2): 330-342.）（张美红. 禽传染性喉气管炎病毒gj蛋白的原核表达及单克隆抗体的研制与标准抗原抗体的制备. 扬州: 扬州大学, 2016.）（申请号为cn201010595809.5，专利技术名称为鸡传染性喉气管炎病毒gj蛋白的单克隆抗体及其应用的专利）。这些mab识别的是线性表位（能够通过western blot实验检测mab与病毒或蛋白之间的反应），但这些单抗均未报道具有与iltv多克隆抗体竞争的活性；也尚未见利用mab的竞争活性建立iltv抗体检测方法的报道。因此，若能筛选出特异性识别天然iltv构象表位的、且与iltv多克隆抗体具有竞争活性的mab，并利用mab与iltv多克隆抗体之间的这种竞争特异性建立检测iltv抗体的竞争elisa检测方法，将填补现有技术中尚未将iltv的mab应用于iltv抗体检测方面的空白，对于iltv抗体的检测具有重要意义。
技术实现思路
1、为了解决现有iltv抗体检测方法存在缺陷，且现有的iltv单克隆抗体只能识别gj蛋白的线性表位，与iltv多克隆抗体无竞争活性等技术问题，本专利技术选取经蔗糖密度梯度纯化后灭活的iltv-ljs09株作为免疫原对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和亚克隆，获得高效分泌抗iltv单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株8h3，经实验发现该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体具有高度特异性及竞争活性，应用前景广阔。
2、为解决上述技术问题并达到相应的技术效果，本专利技术具体提供了如下技术方案：
3、本专利技术的第一个目的是提供一种识别iltv且具有竞争活性的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括单克隆抗体重链可变区和单克隆抗体轻链可变区；单克隆抗体重链可变区包括hcdr1、hcdr2、hcdr3，其氨基酸序列分别如seq id no.3、seq id no.4、seq id no.5所示，单克隆抗体轻链可变区包括lcdr1、lcdr2、lcdr3，其氨基酸序列分别如seq id no.8、seq id no.9、seq id no.10所示。
4、在本专利技术的一种实施方式中，单克隆抗体重链可变区氨基酸序列如seq id no.2所示，单克隆抗体轻链可变区氨基酸序列如seq id no.7所示。
5、本专利技术的第二个目的是提供一种核酸分子，所述核酸分子编码上述单克隆抗体。
6、在本专利技术的一种实施方式中，所述单克隆抗体重链可变区核苷酸序列如seq idno.1所示，轻链可变区核苷酸序列如seq id no.6所示。
7、本专利技术的第三个目的是提供一种重组表达载体，所述重组表达载体包含上述的核酸分子。所述重组表达载体可通过本领域常规方法将本专利技术提供的核酸分子连接于各种表达本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种具有竞争活性的传染性喉气管炎病毒（Infectious LaryngotracheitisVirus, ILTV）单克隆抗体，其特征在于，ILTV单克隆抗体包括单克隆抗体重链可变区和单克隆抗体轻链可变区；单克隆抗体重链可变区包括HCDR1、HCDR2、HCDR3，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5所示，单克隆抗体轻链可变区包括LCDR1、LCDR2、LCDR3，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10所示。
2.根据权利要求1所述的ILTV单克隆抗体，其特征在于，单克隆抗体重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，单克隆抗体轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。
3.一种核酸分子，其特征在于，编码权利要求1-2任一所述的ILTV单克隆抗体。
4.一种重组表达载体，其特征在于，包含权利要求3所述的核酸分子。
5.一种宿主细胞，其特征在于，包括权利要求4所述的重组表达载体或所述宿主细胞的基因组中整合有权利要
6.一种杂交瘤细胞株8H3，其特征在于，产生权利要求1-2任一所述ILTV单克隆抗体，保藏编号为：CGMCC No.45821。
7.权利要求1-2任一所述的ILTV单克隆抗体或权利要求3所述的核酸分子或权利要求4所述的重组表达载体或权利要求5所述的宿主细胞或权利要求6所述的杂交瘤细胞株的应用，其特征在于，将权利要求1-2任一所述的ILTV单克隆抗体或权利要求3所述的核酸分子或权利要求4所述的重组表达载体或权利要求5所述的宿主细胞或权利要求6所述的杂交瘤细胞株用于制备检测ILTV抗原或抗体的试剂或试剂盒。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述试剂或试剂盒包括检测ILTV抗体的竞争ELISA抗体检测试剂或试剂盒、检测ILTV的IFA试剂或试剂盒和检测ILTV的夹心ELISA抗原检测试剂或试剂盒。
9.权利要求1-2任一所述的ILTV单克隆抗体或权利要求3所述的核酸分子或权利要求4所述的重组表达载体或权利要求5所述的宿主细胞或权利要求6所述的杂交瘤细胞株的应用，其特征在于，将权利要求1-2任一所述的ILTV单克隆抗体或权利要求3所述的核酸分子或权利要求4所述的重组表达载体或权利要求5所述的宿主细胞或权利要求6所述的杂交瘤细胞株用于非诊断为目的的ILTV抗原或抗体检测。
10.一种权利要求1-2任一所述的ILTV单克隆抗体识别的抗原表位肽，其特征在于，所述抗原表位肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示。
...【技术特征摘要】
1.一种具有竞争活性的传染性喉气管炎病毒（infectious laryngotracheitisvirus, iltv）单克隆抗体，其特征在于，iltv单克隆抗体包括单克隆抗体重链可变区和单克隆抗体轻链可变区；单克隆抗体重链可变区包括hcdr1、hcdr2、hcdr3，其氨基酸序列分别如seq id no.3、seq id no.4、seq id no.5所示，单克隆抗体轻链可变区包括lcdr1、lcdr2、lcdr3，其氨基酸序列分别如seq id no.8、seq id no.9、seq id no.10所示。
2.根据权利要求1所述的iltv单克隆抗体，其特征在于，单克隆抗体重链可变区氨基酸序列如seq id no.2所示，单克隆抗体轻链可变区氨基酸序列如seq id no.7所示。
3.一种核酸分子，其特征在于，编码权利要求1-2任一所述的iltv单克隆抗体。
4.一种重组表达载体，其特征在于，包含权利要求3所述的核酸分子。
5.一种宿主细胞，其特征在于，包括权利要求4所述的重组表达载体或所述宿主细胞的基因组中整合有权利要求3所述的核酸分子。
6.一种杂交瘤细胞株8h3，其特征在于，产生权利要求1-2任一所述iltv单克隆抗体，保藏编号为：cgmcc no.45821...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘胜旺，赵妍，张宇，
申请(专利权)人：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心，
类型：发明
国别省市：
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