【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体是指一种重组i型人源化胶原蛋白及其制备方法和应用。
技术介绍
1、胶原蛋白是人体中含量最多的蛋白，占蛋白质总量的25～30%。作为细胞外基质中含量最丰富的蛋白，胶原蛋白维持细胞结构的完整性和各种生理功能。胶原蛋白是所有结缔组织的主要结构成分，也存在于几乎所有实质器官的间质组织中。在过去的十年里，人们对胶原蛋白的认识不断增加，胶原家族成员也迅速增多。经研究发现，在人体中，已经发现了20多种不同类型的胶原蛋白，大致可以分为以下几类：纤维胶原、基底膜胶原、微纤维胶原、锚原纤维、跨膜区胶原、未完全定性胶原。i型胶原蛋白为纤维胶原，广泛存在皮肤、骨骼、肌腱中，能强化组织强度和弹性，可提供细胞充足的养分，维持正常的生理功能。i型胶原蛋白的长度约300nm，直径约是1.4nm~1.5nm。
2、目前胶原蛋白主要以动物组织为来源，天然提取的胶原蛋白是多种不同分子量的胶原蛋白组成的混合物，不溶于水，生物相容性较差；此外，由于来源于动物组织，对于动物源疾病或者人传染疾病有交叉感染的风险，同时无法与人体相容，会导致出现免疫排斥和过敏症状。生产胶原蛋白的传统方法是利用酸、碱、酶解法处理动物来源的组织，提取胶原蛋白衍生物。这些方法提取的胶原蛋白本身已经丧失了原本的生物学活性，无法应用于生物医学领域发挥真正的功能。所以，目前胶原蛋白只能在化妆品和保健品中使用，根本无法发挥胶原蛋白的原本生物学功能。
3、针对目前胶原蛋白来源以及提取方法等方面存在的缺点和不足，最好的解决方式是大力发展重组人源化胶原蛋白，特别是重
4、基于此，本专利技术对包含特定氨基酸序列的重组i型人源化胶原蛋白进行开发研究，以期能够找到可广泛应用于骨科材料领域、医疗美容领域和运动医学材料领域的高性能、无毒性和无致敏性、制备方法简单和成本较低的重组i型人源化胶原蛋白。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种可广泛应用于骨科材料领域、医疗美容领域和运动医学材料领域的高性能、无毒性和致敏性、制备方法简单和成本较低的重组i型人源化胶原蛋白及其制备方法和应用。
2、为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、在第一个方面中，本专利技术提供了一种重组i型人源化胶原蛋白，所述重组i型人源化胶原蛋白包含：
4、a）如seq id no. 1所示的氨基酸序列；
5、b）与seq id no. 1所示的氨基酸序列具有90%、92%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的氨基酸序列，并且其保留seq id no. 1所示氨基酸序列的生物学功能；
6、c）在seq id no. 1所示的氨基酸序列中添加、取代、缺失或插入1个或多个氨基酸残基的氨基酸序列，并且其保留seq id no. 1的氨基酸序列的生物学功能；或者
7、d）由核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述核苷酸序列与编码seq id no. 1的氨基酸序列的多核苷酸序列在严格条件下杂交，并且所述氨基酸序列保留seq id no. 1的氨基酸序列的生物学功能，所述严格条件是中等严格条件，中-高严格条件，高严格条件或非常高严格条件。
8、作为可选的方式，在上述重组i型人源化胶原蛋白中，所述生物学功能是与内皮细胞、成骨细胞相互作用，促进成骨细胞爬行和生长；或促进皮肤成纤维细胞增殖、增加皮肤弹性。
9、在第二个方面中，本专利技术提供了一种多核苷酸，所述多核苷酸编码上述第一个方面所述的重组i型人源化胶原蛋白。
10、作为可选的方式，在上述多核苷酸中，所述多核苷酸的核苷酸序列如seq id no.2所示。
11、上述seq id no. 2所示的核苷酸序列仅是代表性多核苷酸序列，本领域技术人员能够预期，只要采用分子生物学领域的常规方法能够制备得到上述第一个方面所述的重组i型人源化胶原蛋白的核苷酸序列均在本专利技术范围内。
12、在第三个方面中，本专利技术提供了一种重组质粒，其包含上述第二个方面所述的多核苷酸。
13、在第四个方面中，本专利技术提供了一种转化子，其是通过将上述第三个方面所述的重组质粒导入宿主中而获得的。
14、在第五个方面中，本专利技术提供了上述第一个方面所述的重组i型人源化胶原蛋白的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
15、制备上述第三个方面所述的重组质粒，通过将上述第三个方面所述的重组质粒导入宿主中制备转化子，培养包含所述转化子的所述宿主，从所述宿主中回收所述重组i型人源化胶原蛋白。
16、作为可选的方式，在上述制备方法中，所述重组i型人源化胶原蛋白的氨基酸序列如seq id no. 1所示，所述制备方法包括如下步骤：
17、（1）用上述第三个方面所述的重组质粒和p4h重组质粒一起转化宿主得到转化子，所述宿主为毕赤酵母或中国仓鼠卵巢细胞得到转化子，所述p4h重组质粒选自p4hα-p4hβ重组质粒、p4hα重组质粒、p4hβ重组质粒的一种或多种，所述p4hα重组质粒选自p4hα1，p4hα2，p4hα3或p4hα4；
18、（2）培养步骤（1）中制备得到的转化子，从所述毕赤酵母或所述中国仓鼠卵巢细胞中回收所述重组i型人源化胶原蛋白。
19、因此，作为可选的方式，在上述步骤（1）中，所述p4hα-p4hβ重组质粒可以是p4hα1-p4hβ、p4hα2-p4hβ、p4hα3-p4hβ或p4hα4-p4hβ。
20、优选地，在上述步骤（1）中，所述p4hα-p4hβ重组质粒是p4hα1-p4hβ。
21、作为可选的方式，在上述制备方法中，所述p4hα重组质粒包含对应于脯氨酸羟化酶p4hα1的如seq id no. 3所示的氨基酸序列；对应于脯氨酸羟化酶p4hα2的如seq id no.4所示的氨基酸序列；对应于脯氨酸羟化酶p4hα3的如seq id no. 5所示的氨基酸序列；或者，对应于脯氨酸羟化酶p4hα4的如seq id no. 6所示的氨基酸序列；所述p4hβ重组质粒包含对应于脯氨酸羟化酶p4hβ的如seq id no. 7中所示的氨基酸序列；所述p4hα-p4hβ重组质粒包含对应于脯氨酸羟化酶p4hα1的如seq id no. 3所示的氨基酸序列；对应于脯氨酸羟化酶p4hα2的如seq id no. 4所示的氨基酸序列；对应于脯氨酸羟化酶p4hα3的如seq idno. 5所示的氨基酸序列；或者，对应于脯氨酸羟化酶p4hα4的如seq id no. 6所示的氨基酸序列；以及对应于脯氨酸羟化酶p4hβ的如seq id no. 7中所示的氨基酸序列。
22、在第六个方面中，本专利技术提供了上述第一个方面所述的重组i型人源化胶原蛋白的制备方法，所述制备方法包括如本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种重组I型人源化胶原蛋白，其特征在于，所述重组I型人源化胶原蛋白包含：
2.根据权利要求1所述的重组I型人源化胶原蛋白，其特征在于，所述生物学功能是与内皮细胞、成骨细胞相互作用，促进成骨细胞爬行和生长；或促进皮肤成纤维细胞增殖、增加皮肤弹性。
3.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码根据权利要求1或权利要求2所述的重组I型人源化胶原蛋白。
4.一种重组质粒，其特征在于，其包含根据权利要求3所述的多核苷酸。
5.一种转化子，其特征在于，其是通过将根据权利要求4所述的重组质粒导入宿主中而获得的。
6.根据权利要求1或权利要求2所述的重组I型人源化胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述重组I型人源化胶原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO. 1所示，所述制备方法包括如下步骤：
8.根据权利要求1或权利要求2所述的重组I型人源化胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
9.根据权利要求1或权利
10.根据权利要求1或权利要求2所述的重组I型人源化胶原蛋白在制备皮肤组织用制品中的应用，其特征在于，所述皮肤组织用制品用于维持或促进人皮肤成纤维细胞增殖。
11.根据权利要求1或权利要求2所述的重组I型人源化胶原蛋白在制备皮肤组织用制品中的应用，其特征在于，所述皮肤组织用制品用于维持或提高皮肤弹性。
12.根据权利要求1或权利要求2所述的重组I型人源化胶原蛋白在促进组织增长制品中的应用，其特征在于，所述制品用于维持或上调弹性蛋白、纤维连接蛋白和胶原蛋白I型基因和/或蛋白质的表达。
13.根据权利要求1或权利要求2所述的重组I型人源化胶原蛋白在骨修复制品和运动医学制品中的应用，其特征在于，所述制品具有预防和修复功能，用于促进成骨细胞爬行和生长。
...【技术特征摘要】
1.一种重组i型人源化胶原蛋白，其特征在于，所述重组i型人源化胶原蛋白包含：
2.根据权利要求1所述的重组i型人源化胶原蛋白，其特征在于，所述生物学功能是与内皮细胞、成骨细胞相互作用，促进成骨细胞爬行和生长；或促进皮肤成纤维细胞增殖、增加皮肤弹性。
3.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码根据权利要求1或权利要求2所述的重组i型人源化胶原蛋白。
4.一种重组质粒，其特征在于，其包含根据权利要求3所述的多核苷酸。
5.一种转化子，其特征在于，其是通过将根据权利要求4所述的重组质粒导入宿主中而获得的。
6.根据权利要求1或权利要求2所述的重组i型人源化胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述重组i型人源化胶原蛋白的氨基酸序列如seq id no. 1所示，所述制备方法包括如下步骤：
8.根据权利要求1或权利要求2所述的重组i型人源化胶...
【专利技术属性】
技术研发人员：张微微，庄秀丽，
申请(专利权)人：长春圣博玛生物材料有限公司，
类型：发明
国别省市：
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